一、Identification and characterization of a salt tolerance-responsive gene(AtGRP9)of Arabidopsis（论文文献综述）
宋亚楠[1]（2021）在《亚麻荠WRKY转录因子家族的鉴定及其介导盐胁迫响应的功能研究》文中研究表明特色油料作物亚麻荠（Camelina sativa）不仅种子富含ɑ-亚麻酸（18:ω3）,是制备高端功能性油脂产品的优质资源,而且具有生育期短（80-100天）、水肥消耗低、病虫草害少和易于简化栽培等优良农艺性状,是发展低耗高效可持续农业生产体系的一个理想作物。特别是,与油菜和大豆等作物相比,亚麻荠抵御低温、干旱和盐胁迫等逆境能力强,是挖掘优异抗逆性基因资源的突特种质。植物特有的WRKY转录因子蛋白家族,参与植物生长发育以及抗逆反应等多种生命活动。然而,有关亚麻荠抗逆性机制以及WRKY转录因子种类、进化及功能还鲜见报道。本文聚焦于鉴定介导亚麻荠抗盐胁迫机制WRKY转录因子等关键基因。以亚麻荠品种SC-N1为试材,系统检测亚麻荠盐胁迫响应表征;应用RNA-seq进行亚麻荠盐胁迫响应的转录组学分析,筛选参与亚麻荠盐胁迫响应的转录因子;全基因组鉴定亚麻荠WRKY家族成员和表达谱,解析WRKY家族系统进化和功能变异,确定介导亚麻荠盐胁迫抗性的候选WRKY转录因子;应用单细胞光自养模式植物莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）的遗传转化体系检测候选的亚麻荠盐胁迫响应CsWRKY的功能;培育目标CsWRKY过表达以及CRISPR-Cas9敲除的亚麻荠转基因株系,分析转基因株系生理生化表型,鉴定介导亚麻荠盐胁迫响应的CsWRKY及其生物学功能。本研究将为挖掘亚麻荠耐盐的相关基因、解析亚麻荠响应盐胁迫的分子调控机制提供科学依据。主要研究结果如下:1.亚麻荠幼苗盐胁迫响应的表征于水培条件下,选取6片真叶幼苗进行盐胁迫处理,检测幼苗形态和生理生化相关参数。与对照（1/2 Hoagland营养液）相比,盐胁迫3 d的幼苗发生叶片萎蔫和生长减缓等受害症状,且呈现剂量效应。三个不同剂量（100、150和200 m M）Na Cl处理的亚麻荠幼苗株高分别降低了25.26%、37.59%和44.58%,地上部鲜重分别降低了3.22%、13.44%和21.51%,地下部鲜重分别降低了41.18%、47.06%和50.0%,叶绿素a（Chla）含量分别降低了10.29%、27.94%和32.35%,叶绿素b（Chlb）含量分别降低了28.26%、52.17%和56.52%。盐胁迫导致幼苗叶绿素荧光参数（Fm、Fv/Fm、Y（II）、q P和ETR）及光合作用减低。相反,盐胁迫（200 m M）处理的幼苗抗渗物质显着增加,类胡萝卜素、脯氨酸、可溶性糖含量分别比对照提高了40.0%、10.6倍和47.0%。SOD（超氧化物歧化酶）和POD（过氧化物酶）活性和T-AOC（总抗氧化能力）比对照提高了51.86%、156.89%和50.18%。此外,盐胁迫幼苗的过氧化氢酶（CAT）活性高于对照约4倍。显然,亚麻荠能通过提高抗渗物质合成积累和增强抗氧化酶活及清除活性氧（ROS）能力而抵御盐胁迫。2.亚麻荠幼苗转录组分析与盐胁迫响应的转录因子筛选为发掘亚麻荠的耐盐基因和揭示盐胁迫应答调控机制,利用RNA-Seq技术对175 m M Na Cl胁迫处理1 d的亚麻荠幼苗及其对照材料进行转录组分析。结果显示,共获得亚麻荠转录组数据42.47Gb,组装得到功能注释的99402条Unigenes和5902个差异表达基因（DEG）（2917个上调和2985个下调）。GO富集分析发现,较多数量的DEGs主要集中在分子功能（33.60%）、细胞组分（13.60%）和生物过程中（52.79%）。KEGG途径分析将1442个DEGs注释到44条代谢通路,其中,上调DEGs显着富集到抗坏血酸和醛酸代谢、精氨酸脯氨酸代谢,氧化磷酸化以及苯丙烷类合成途径,下调DEGs主要参与光合作用。进一步对差异表达基因综合分析,筛选到较重要的转录因子家族,包括WRKY、MYB、b HLH、AP2/ERF和b ZIP等。其中,WRKY转录因子基因上调表达数目多、水平高,预示着WRKY转录因子在亚麻荠幼苗盐胁迫应答过程中发挥更加重要的作用。3.亚麻荠CsWRKY转录因子全基因组鉴定及系统进化分析应用组学分析工具从亚麻荠基因组共鉴定到242个CsWRKY蛋白成员,由不均匀分布在20条染色体的224个CsWRKY基因编码,其中15个CsWRKY基因产生33个WRKY可变剪接体。依据WRKY和锌指基序,CsWRKY家族成员分为3大类（I、II和III）,其中第II大类含有149个WRKYs,又分为5个亚类（IIa、IIb、IIc、IId和IIe）。CsWRKY蛋白含有的10个保守基序,其中特有的WRKYGQK七肽最为保守。然而,多个IIc亚类的CsWRKYs检测到WRKYGXK、WRKYGKK和WRKYGEK等变异。这些变异可能导致CsWRKY蛋白功能多样化。CsWRKY基因家族进化经历了较强的纯化选择（purifying selection）,未发现随机重复（tandem duplication）,但发生了137个片段重复事件（segmental duplication event）,构成亚麻荠CsWRKY基因家族扩张和功能变异的关键进化驱动力。此外,分别检测到166和173个CsWRKY基因对应于65个At WRKY和111个Br WRKY（Brassica rapa）直向同源基因,预示着亚麻荠WRKY基因家族扩张可能发生在拟南芥与油菜分离之后。4.亚麻荠CsWRKY基因时空表达谱分析与介导盐胁迫应答的CsWRKY筛选应用亚麻荠根、茎、叶、花和种子等12个不同组织器官的转录组数据,分析CsWRKY基因表达谱显示,54%CsWRKY基因至少在一种组织器官表达,在根、茎、成熟叶、花和发育早期种子表达的基因分别占89.11%、80.69%、78.71%、88.61%和76.73%。70个CsWRKYs在12个组织器官均表达,其中高表达基因24个。许多CsWRKY基因具有组织特异性表达模式,例如,在两个组织/器官表达的,CsWRKY25和34在花序和发育晚期种子,CsWRKY174在萌发种子和根,CsWRKY73和203在花和成熟叶。仅在一个组织/器官表达的有,根组织的CsWRKY111、208和226,花组织的CsWRKY182和202,以及早期发育种子的CsWRKY204。这些结果表明CsWRKY在亚麻荠组织/器官发育过程中起重要作用,其中一部分CsWRKYs可能参与调控细胞基础生命活动,而另一部分CsWRKYs则在不同组织/器官行使差异化调控功能。应用盐胁迫亚麻荠幼苗转录组数据和实时荧光定量PCR检测相关CsWRKY基因的表达谱,筛选出CsWRKY8、9、10、43、48、49、50、162和242共9个基因为重要的介导盐胁迫应答CsWRKYs。盐胁迫幼苗地上组织中,这9个基因均上调表达,其中CsWRKY9、CsWRKY43和CsWRKY162表达水平高于对照组织的5倍以上。在盐胁迫根组织中,CsWRKY9、43和162亦上调表达,表达量高于对照组织6倍多。然而,CsWRKY8和10则显着下调表达（p<0.05）,其他4个CsWRKYs表达量上调未达显着水平（p<0.05）。5.应用莱茵衣藻遗传转化体系鉴定亚麻荠CsWRKY9、43和162基因的功能对低等植物和高等植物WRKY转录因子家族分析发现,单细胞光自养模式植物莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）的基因组仅有1个WRKY基因。应用莱茵衣藻过表达异源WRKY基因研究其功能,能有效排除宿主内源多个WRKY基因的干扰。同时,我们获得了莱茵衣藻WRKY突变体LMJ605及其野生型株系CC5325。这为鉴定本文筛选到的亚麻荠盐胁迫响应的候选CsWRKY功能提供了独特的测试宿主种质。从上文9个候选CsWRKYs中选择最重要的CsWRKY9、43和162为目的基因,将其分别克隆入适于在莱茵衣藻细胞表达的p HR13载体多克隆位点,构建过表达载体p HR13-CsWRKY9,p HR13-CsWRKY43和p HR13-CsWRKY162。采用玻璃珠法将表达载体分别导入易遗传转化的莱茵衣藻藻株CC849,经过分子检测获得目的基因稳定有效表达的转基因莱茵衣藻株系。检测未转化的对照藻株（CC849）和转基因藻株在正常培养条件和盐胁迫下的生长表型,结果发现,正常培养条件下,转基因藻株生物量和光合作用等性状略高于对照藻株,但未达显着水平（p<0.05）。在150 m M Na Cl盐胁迫条件下培养4 d后,对照藻株CC849以及转化株CsWRKY9、43和162的生物量比正常培养条件的生物量分别降低了33.57%、25.85%、14.47%和8.63%。在175 m M Na Cl盐胁迫条件下培养4 d后,对照藻株CC849以及转化株CsWRKY9、43和162的生物量比正常培养条件的生物量分别降低了59.40%、27.22%、18.79%和16.31%。检测叶绿素含量及叶绿素荧光参数显示,盐胁迫抑制藻细胞光合作用,但转基因藻株受害程度显着低于对照CC849（p<0.05）。进一步比较藻株CC849、藻株CC5325及其WRKY突变体LMJ605和转化藻株CsWRKY162在正常培养条件和盐胁迫下的表型显示,莱茵衣藻内源WRKY基因的功能缺失（LMJ605）未明显抑制正常培养条件下藻细胞的生长和光合作用。然而,在盐胁迫条件下,突变株LMJ605生长严重受阻。在150 m M Na Cl盐胁迫条件下培养,对照藻株CC849、CC5325、LMJ605和转化藻株CsWRKY162的生物量与正常条件下相比,分别减少了33.26%、10.50%、58.04%和11.54%。在175 m M Na Cl盐胁迫条件下培养,藻株CC849、CC5325、LMJ605和转化藻株CsWRKY162的生物量分别比正常培养降低了56.69%、25.68%、67.54%和17.21%。当盐浓度达到200 m M Na Cl时,藻株CC849、CC5325、LMJ605和CsWRKY162随着培养时间延长,藻细胞生长严重阻滞直至完全死亡,其中LMJ605受害最重,转化藻株CsWRKY162则受害相对轻,存活期比对照株（CC849）延长2倍多。这些莱茵衣藻遗传转化试验结果表明,CsWRKY9、CsWRKY43和CsWRKY162均能显着提高宿主细胞的抗/耐盐性,其中CsWRKY162功效最强。6.亚麻荠CsWRKY162过表达及CRISPR/Cas9敲除突变体的构建和表型分析选择CsWRKY162分别构建其过表达和CRISPR/Cas9敲除的亚麻荠突变体,深入解析CsWRKY162介导亚麻荠盐胁迫应答机制。成功构建CsWRKY162基因过表达载体p CAMBIA1303-CsWRKY162以及敲除载体CRISPR-CsWRKY162＿ta/b和CRISPR-CsWRKY162＿tc/d。应用农杆菌介导的浸花法将构建的载体分别导入亚麻荠,获得T0代种子,经筛选和鉴定,获得纯合CsWRKY162转基因植株,以及CsWRKY162基因敲除植株（含敲除载体CRISPR-CsWRKY162＿ta/b）,CsWRKY162基因序列发生了碱基缺失和替换。转基因植株表型分析显示,正常生长条件下,CsWRKY162过表达植株生长发育与对照植株差异不明显。在175 m M Na Cl盐胁迫条件下,对照植株生长受抑制,CsWRKY162过表达植株株高和单株鲜重分别是对照株1.5倍和1.3倍多。CsWRKY162过表达植株未显受害症状。在正常条件下,CsWRKY162基因敲除植株生物量等性状与对照株相比没有明显变化。在175 m M Na Cl盐胁迫条件下,CsWRKY162基因敲除植株矮小,其受害症状显着大于对照植株,其中,株高比对照植株降低了20%左右,单株鲜重比对照植株降低了40%左右。在亚麻荠响应盐胁迫过程中,胁迫相关基因NHX2、HKT和NCED3在CsWRKY162过表达株系和敲除株系中的表达分别上调和下调。亚麻荠遗传转化试验再次证明CsWRKY162是介导亚麻荠盐胁迫应答的一个极为重要的转录因子。有关这些亚麻荠转化体的转录组测序以及相关分析正在进行中,以期进一步阐明CsWRKY162介导的亚麻荠盐胁迫抗性表达机制和调控网络。综上所述,本文论述了亚麻荠盐胁迫响应的表征,全基因组系统鉴定了亚麻荠WRKY转录因子及其表达谱,揭示了CsWRKY家族成员的进化特征。筛选到9个介导亚麻荠盐胁迫响应的CsWRKY转录因子。应用独特的单细胞模式植物莱茵衣藻遗传转化体系评价了CsWRKY9、CsWRKY43和CsWRKY162的功能,成功构建了亚麻荠CsWRKY162过表达和敲除突变体,论证了CsWRKY162是正调控亚麻荠盐胁迫抗/耐性机制的一个重要转录因子。本文为全面解析各CsWRKY家族成员的功能以及抵御盐胁迫等逆境的分子机制和培育抗逆性优良的品种提供了新知识,靶标基因及相关研究基础。
吴林[2]（2021）在《毛竹CPA家族的鉴定及PheNHX2的功能分析》文中认为毛竹（Phyllostachys edulis）是世界上最重要的非木材林产品之一,具有较高的文化、生态和经济价值,而低温、干旱、盐渍等众多不利环境因素却严重制约着毛竹产业的发展,因此,如何利用分子生物学技术挖掘毛竹中的抗逆基因,提高毛竹对非生物胁迫的耐受性成为毛竹遗传育种的重要课题。植物单价阳离子/质子反转运蛋白（CPA）是一类在植物盐胁迫响应中起重要作用的跨膜转运蛋白,包括Na+/H+逆向转运蛋白（NHX）,K+外排转运蛋白（KEA）和阳离子/H+交换蛋白（CHX）。目前CPA已在其他多个物种被分离鉴定,然而毛竹CPA的分子特征尚不明晰。在本研究中,首先利用生物信息学方法在全基因组水平鉴定了毛竹CPA,随后通过运用qRT-PCR技术分析了毛竹NHX基因的组织和诱导表达模式,筛选出抗逆候选基因PheNHX2,并进一步利用农杆菌介导法在拟南芥中过表达PheNHX2以研究该基因的生物学功能。获得以下主要结果:1.在毛竹基因组中鉴定出37个含Na＿H＿Exchanger（PF00999）结构域的CPA,系统发育分析表明毛竹CPA可分为三类:10个NHX（PheNHX1-PheNHX10）,6个KEA（PheKEA1-PheKEA6）和21个CHX（PheCHX1-PheCHX21）。在毛竹CPA蛋白中预测出10个保守基序,其中属于Na＿H＿Exchanger结构域片段的基序Motif2高度保守,分布于所有的毛竹CPA成员。2.毛竹NHX的组织表达模式分析表明,这些基因在多个组织中特异性表达;诱导表达模式分析表明,盐处理对毛竹NHX的表达有不同程度的诱导作用,其中PheNHX2在NaCl处理下的表达显着上调。3.PheNHX2的亚细胞定位实验表明PheNHX2是一类液泡膜定位蛋白。过表达PheNHX2转基因拟南芥在盐胁迫下,显着抑制了植物种子发芽和根系生长,影响了细胞中的Na+和K+平衡,降低了转基因拟南芥的耐盐性。同时包括叶绿素含量,丙二醛含量,过氧化物酶、过氧化氢酶活性以及相对电导率等相关生理指标的测定,进一步证实了过表达PheNHX2降低了转基因拟南芥的耐盐性。qRT-PCR实验结果表明,在盐胁迫下,过表达PheNHX2显着抑制了转基因拟南芥中一些与胁迫及离子转运相关的基因的表达。毛竹NHX是一类与植物盐胁迫响应相关的基因,其中液泡膜定位的PheNHX2对植物的耐盐性呈负调节。研究结果为毛竹CPA基因功能和PheNHX2调控毛竹耐盐性机制研究奠定了基础。
黄娟娟[3]（2021）在《杨树转录因子PtERF004耐盐胁迫功能分析》文中研究指明杨树（Populus）生长快、适应性强,是我国重要的造林和绿化树种,但在干旱、半干旱、盐碱、荒漠化等脆弱生态区,杨树的生长发育受到了明显的限制。ERF蛋白是植物所特有的并可直接参与植物生长发育及生物与非生物胁迫应答过程的一类转录因子。在前期研究的基础上,本研究以84K杨（P.abla×P.glandulosa）为研究材料,对7个抗逆胁迫相关的杨树ERF基因进行系统生物信息学及表达模式分析,选取序列最短,分子量最小,编码氨基酸最少,热稳定性最强,在根中相对表达量最显着的PtERF004基因进行过表达和抑制表达载体构建及杨树遗传转化,并对其耐盐胁迫功能及与其互作基因的生物学功能进行分析。研究结果如下:（1）对7个PtERFs基因进行系统的生物信息学分析。开放阅读框分析显示7个PtERF基因（PtERF001-PtERF007）的序列长度在400～1500之间,开放阅读框个数为4～12个,均含有最长的开放阅读框ORF1,PtERF004序列最短,编码氨基酸最少;基本理化性质分析显示7个PtERs基因均为热稳定性强的亲水性的可溶性蛋白,不属于跨膜蛋白,且均无信号肽,结构元件均为α-螺旋和无规则卷曲;同源分析表明7个PtERFs基因在拟南芥中的同源基因共有5个;系统进化分析表明,7个PtERFs基因属于ERF-a、ERF-b、ERF-c 3个亚家族,且包含AP2、YRG和RAYD保守域;染色体定位显示7个PtERFs基因分别定位于19条染色体中的第3、2、11、6、18、4、5条染色体上;共线性分析显示PtERF002、PtERF004、PtERF006与全基因组重复事件相关;启动子结构分析表明7个PtERFs启动子区域具有ABRE、LTR、MBS等多种与胁迫相关的顺式调控元件;GO注释分析表明7个PtERFs具有DNA结合和转录调控因子活性,可能参与了植物的胁迫响应过程。（2）通过RT-qPCR分析7个PtERF基因在50m MNa Cl胁迫下的表达模式,结果显示,同一亚家族基因在盐胁迫下表现出相似的表达变化,例如,ERF-c亚家族的PtERF001和PtERF004在根中的表达量变化相似,均在48h时最高,但大多数基因表现出特定的表达模式。通过RNA-Seq对7个基因的表达模式进行了验证,根据表达水平将7个PtERF基因分为2个亚组,其中PtERF003、PtERF004、PtERF005属于一个亚组,其他4个属于另一个亚组;基因表达相关性分析表明PtERF004与PtERF005相关,PtERF002、PtERF003和PtERF007的相关性较强。（3）为进一步揭示ERF转录因子在杨树应答盐胁迫过程中的功能,本研究选取了PtERF004进行过表达和抑制表达载体构建及杨树遗传转化,并对其耐盐功能进行了分析。共获得PtERF004过表达转基因杨树株系（OX）19个和抑制表达转基因杨树株系（RNAi）9个。在正常条件下,与非转基因杨树（WT）相比,OX和RNAi的生根率均变低、株高均变矮,且OX的生根率和株高均小于RNAi;OX的总鲜重和根鲜重均大于WT,而RNAi与WT的差异不显着;OX的根直径、根表面积、根体积、叶面积、叶长、叶宽、气孔宽度均大于WT,而RNAi与WT的类似;OX和RNAi的地上部鲜重、叶片数、主根长、根尖数、叶片长宽比、气孔长与WT的差异不显着;OX的POD活性、SOD活性和MDA含量均与WT相似,但明显低于RNAi;OX、RNAi和WT的CAT活性、叶片相对含水量和叶片电导率均没有显着差异。在盐胁迫条件下,OX的根鲜重、根直径、根表面积、根体积、叶片长宽比大于WT,RNAi与WT差异不显着,其他生长指标均小于WT。OX的POD活性和MDA含量均高于WT和RNAi,而CAT活性则相反。OX和RNAi的叶片相对含水量和叶片电导率没有显着差异。以上结果表明,杨树转录因子PtERF004对盐胁迫较为敏感,且其过量表达可以促进侧根的生长。（4）为鉴定与PtERF004互作的靶基因并分析其耐盐功能,通过RNA-Seq分析了WT和OX的叶片中基因表达水平。结果显示,在盐胁迫（NT+100）处理后,与对照（NT+0）比较,共检测到1175个差异表达基因（DEGs）;在OX vs NT+0中发现288个DEGs,相同的DEGs有129个,且均在OX植株中下调表达;WGCNA分析共鉴定出15个DEGs,其中13个与PtERF004直接共表达;DEGs中共有转录因子7个,其中4个WRKY转录因子（WRKY24、WRKY33、WRKY40、WRKY41）,1个b ZIP（b ZIP14）、1个GRAS、1个NAC（NAC045）,且均在OX抑制表达;启动子结构分析发现NAC045含有1个可与PtERF004结合的DRE元件;酵母单杂交验证表明PtERF004可以与含有DRE元件的NAC045的Promoter1（翻译起始位点上游的-525bp到-197bp）结合;RT-qPCR分析表明NAC045在RNAi中高诱导表达。综上,PtERF004可能通过促进侧根系的生长,提高了杨树对盐胁迫的敏感性。本研究为PtERF004基因的进一步应用及系统揭示ERF转录因子的功能提供理论依据。
王培龙[4]（2021）在《刚毛柽柳ThPHD3基因调控盐胁迫应答分子机制研究》文中研究表明植物在对周围环境的适应过程中,通过调控某些特定转录因子的表达产生特异性的产物来增强植物对逆境条件的适应性。关于转录因子在应对非生物胁迫过程中的功能研究日益受到人们的重视。植物同源结构域（Plant homeodomain,PHD）转录因子是在植物生长发育和多种生物胁迫应答信号途径中发挥作用的锌指蛋白。本研究从刚毛柽柳耐盐转录组中克隆获得ThPHD3基因,并对其耐盐功能和调控机理进行了初步研究,获得的主要研究结果如下:1、ThPHD3蛋白定位在细胞核中。其表达受到两种非生物胁迫处理（高盐和干旱）以及两种激素信号（ABA和GA3）刺激的诱导,尤其是在盐胁迫下ThPHD3基因在刚毛柽柳根中的表达显着上调,说明ThPHD3基因可能在刚毛柽柳的耐盐胁迫应答中发挥作用。2、盐胁迫下过表达ThPHD3基因拟南芥种子的萌发率和幼苗的根长、鲜重较野生型高,且转基因植株在盐胁迫时细胞内与活性氧清除相关的保护酶类含量高于野生型,活性氧含量和细胞损伤程度明显低于野生型。为了验证拟南芥中异源表达的结果,分别将ThPHD3基因过表达、抑制表达和空载体（对照）菌株瞬时转化刚毛柽柳,发现盐胁迫下瞬时过表达植株也能增加保护酶类含量,降低过氧化氢和丙二醛的积累。说明ThPHD3基因在植物耐盐方面可能起重要作用。3、对3种瞬时转基因刚毛柽柳进行RNA-Seq分析。与对照组比,过表达植株中上调表达基因和下调表达基因数量分别为317和81,而抑制表达中上调表达基因和下调表达基因数量分别为146和228。GO功能分类结果显示多数差异表达基因富集在植物激素信号转导,苯丙烷生物合成以及植物病原体相互作用等途径中。三组转基因材料共同含有的差异表达基因有54个,包括氨肽酶M1,锌指蛋白ZAT8,植物U-box,磷酸盐反应1家族蛋白,丝裂原活化蛋白激酶激酶A,蛋白磷酸酶2C 25,乙烯反应转录因子ERF017和钙结合蛋白CML39等多个类别的基因。4、通过反式酵母单杂交分析从随机文库中筛选得到15条ThPHD3基因可能结合的元件。酵母单杂交以及EMSA实验证明可能与ThPHD3转录因子结合的AATCTCCAAT元件的核心序列为TCTC。将TCTC元件构建到pCAMBIA1301载体中与效应载体共转烟草,GUS染色和GUS酶活性测定证实ThPHD3在植物体内能特异识别TCTC元件。对TCTC的突变处理和酵母单杂交分析,得到可能与ThPHD3基因相互作用的新的元件CC/ATC 以及 T/CACC。5、ChIP实验结果表明ThPHD3基因可以与转录组差异表达基因ThZAT12和ThE3PUB23启动子中含有TCTC元件的序列结合,EMSA以及共转烟草体内互作进一步证实了这种结合,表明ThZAT12和ThE3PUB23是ThPHD3基因的下游靶基因。进一步对ThZAT12和ThE3PUB23基因瞬时转化刚毛柽柳的耐盐应答情况进行分析,发现过表达株系显示出明显的耐盐应答。6、转录激活实验发现ThPHD3转录因子不具有转录激活活性。酵母双杂交以及BiFC实验发现刚毛柽柳ThPHD3转录因子可以与ThPHD5、ThPHD9和ThWRKY2蛋白相互作用形成异源二聚体。过表达ThWRKY2基因可以提高植株在盐胁迫下的ROS清除能力,细胞损伤较少,提高了植株的耐盐能力。综合分析以上结果,初步明确了ThPHD3基因的耐盐功能。ThPHD3基因与ThPHD5、ThPHD9和ThWRKY2蛋白相互作用,结合到下游耐盐相关靶基因ThZAT12和ThE3PUB23基因启动子上的TCTC元件,进而提高植株在盐胁迫下的ROS清除能力,减少细胞损伤。本研究为进一步完善刚毛柽柳ThPHD3基因的耐盐机制奠定基础,对深入认识木本植物的耐盐机制进而培育出耐盐能力优良的木本植物具有重要意义。
王丽丽[5]（2020）在《尿素代谢途径对盐逆境下拟南芥种子萌发和苗期生长的影响研究》文中进行了进一步梳理盐胁迫严重抑制种子的萌发,对植物生长发育产生不可逆的影响。尿素代谢途径关键酶-脲酶在种子萌发期起着非常重要的作用。因此,探究尿素代谢途径和盐胁迫对种子萌发和苗期生长的生理调控机制具有重要的生物学意义。1.利用转录组测序技术分析尿素代谢途径相关基因缺失突变体aturease、atdur3,共获得8个差异表达基因,qRT-PCR结果表明,8个差异表达基因对盐胁迫均有强烈的应答,其基因表达量均有明显的变化。2.通过 Arabidopsis Biological Research Center（ABRC）获得 8 个差异表达基因缺失突变体,盐胁迫下观察其种子萌发和苗期生长,结果发现,高盐胁迫显着抑制atgrp9缺失突变体种子萌发和苗期生长。3.进一步通过杂交获得atgrp9aturease纯合双突变体,在盐胁迫处理下,与atgrp9突变体相比,atgrp9aturease可以明显提高盐胁迫对植株生长的抑制作用,并且atgrp9aturease体内NH4+含量积累显着低于atgrp9,结果表明:阻断尿素代谢减少NH4+的产生可以在一定程度上缓解高盐胁迫对atgrp9突变体的抑制作用,促进植物幼苗的生长。4.sos1和sos3突变体对盐分极为敏感,在130 mM NaCl处理下种子基本不萌发,然而通过向盐胁迫培养基中外源添加脲酶抑制剂PPD,随着PPD浓度的不断增加,sos1和sos3对高盐胁迫的耐受性明显提高。此外,通过杂交获得sos3aturease双突变体,分析其在盐胁迫处理下的长势,结果显示:与sos3突变体相比,sos3aturease双突变体具有明显的耐盐性,且体内NH4+含量显着性降低,以上这些结果表明,尿素代谢途径参与并影响盐逆境胁迫下的种子萌发和苗期生长过程。
雷晓锦[6]（2020）在《刚毛柽柳耐盐ThCOLs转录因子基因克隆与筛选》文中研究说明转录因子（transcriptionfactor,TF）是一类能与基因启动子上的顺式作用元件特异性结合的DNA结合蛋白,可以通过结合下游基因启动子上的顺式作用元件来调节一系列下游基因的表达,所以筛选耐盐能力优良的转录因子再通过基因工程手段培育抗逆植物新品种的过程中极其重要。为了从木本盐生植物刚毛柽柳（Tamarix hispida）中克隆并筛选获得耐盐能力优良的COL基因,本研究鉴定了 8个ThCOLs基因,分析了这些基因在各种逆境胁迫后的表达模式,并选择其中的受盐胁迫高度诱导表达基因验证其耐盐功能。具体结果如下:通过对前期建立的7个刚毛柽柳转录组序列的查找,克隆获得8个单一并具有完整开放读码框（ORFs）的ThCOLs基因（命名为ThCOL1-8）。8个ThCOLs基因编码区长度为1089-1467 bp,编码氨基酸残基个数为362-488,预测的相对分子质量大小为39.6-53.6 kDa,理论等电点（pI）为4.83-7.48。多序列比对结果显示8个ThCOLs转录因子主要分为三类,其中ThCOL2、ThCOL5和ThCOL8亲缘关系较近,属于第一类,为N端含有两个完整B-BOX结构域的转录因子;ThCOL3属于第二类,为N端含有一个完整B-BOX结构域的转录因子;ThCOL1、ThCOL4、ThCOL6和ThCOL7属于第三类,为N端含有一个完整的B-BOX结构域和一个二级结构发生改变的B-BOX结构域的转录因子。不同非生物胁迫（高盐、干旱、重金属）和ABA处理后刚毛柽柳根、叶组织中8个ThCOLs基因表达模式分析结果显示,8个ThCOLs基因在胁迫后表达量都发生了明显改变,表明这些基因都为胁迫应答基因,可能至少参与了一种刚毛柽柳的抗逆应答。其中ThCOL2基因在刚毛柽柳根和叶中盐胁迫下大部分时间点的表达都发生了显着变化,其可能在刚毛柽柳在盐胁迫应答过程中起重要作用。为了进一步验证ThCOL2基因是否参与了刚毛柽柳的抗逆应答调控,构建了重组载体pROKⅡ-ThCOL2和pFGC5941-ThCOL2,进行刚毛柽柳瞬时转化以获得瞬时过表达和抑制表达ThCOL2基因刚毛柽柳,同时以pROKⅡ瞬时侵染刚毛柽柳作为对照。对共培养不同时间点的三种瞬时表达刚毛柽柳ThCOL2基因表达分析显示成功获得瞬时过表达（OE）和抑制表达（IE）转基因株系。进一步的生理染色和生理指标结果表明,过表达ThCOL2基因在150 mMNaCl胁迫下可通过调节保护酶类的活性,增强转基因刚毛柽柳细胞内清除活性氧能力,促使O2-和H2O2的积累减少,从而减少细胞受损或细胞死亡,增强植物的耐盐性。提示ThCOL2基因可能是一个耐盐能力优良的候选基因。为了更详细地研究ThCOL2基因可能参与的耐盐调控机制,对ThCOL2基因的亚细胞定位和转录激活活性进行了研究,结果表明ThCOL2定位于细胞核且具有转录激活活性,转录激活结构域位于139-346aa（不含保守结构域的中间区域）。进一步利用TF-Centered Y1H技术（以转录因子为中心的酵母单杂交技术）分析了 ThCOL2转录因子识别的顺式作用元件。未知元件“ATTGTGAAAT”出现的次数最多。缺失和突变分析结果显示,“GTGAAA”为ThCOL2转录因子识别的核心作用元件,表明该基因可能通过与其结合,从而调控下游基因的表达。在以后的研究中,将会对ThCOL2转录因子直接调控的下游基因进行查找与鉴定,以分析ThCOL2转录因子的耐盐调控网络。
付阳[7]（2019）在《拟南芥IAR4调控盐胁迫下主根生长的分子机制》文中进行了进一步梳理土壤盐渍化是植物承受的最主要的环境胁迫之一,严重制约植物的生长,使得农作物的产量严重降低,危害国家的粮食安全。为了抵御土壤中盐离子的胁迫,植物体内产生了一系列的盐胁迫调控机制来适应环境。根部作为最直接感知盐胁迫信号的器官,在盐胁迫下的发育受到严重抑制。因此挖掘盐胁迫下调控根生长发育的关键因子并解析机制,对改良植物特别是作物在盐胁迫下的生长能力具有重要的理论和实践意义。本研究通过反向遗传学的方法对拟南芥盐胁迫诱导基因的T-DNA插入突变体库进行盐处理下的表型筛选,筛选到了一个在盐胁迫下主根生长被严重抑制的突变体。该突变体中编码丙酮酸脱氢酶E1α亚基的基因IAR4发生了突变。IAR4突变后增加了植株对盐离子的敏感性,导致了盐胁迫下iar4突变体主根生长极度迟缓,并且存活率明显下降。进一步研究发现在盐胁迫条件下,iar4突变体体内SOS信号途径中的SOS1和SOS3基因的激活被严重抑制,从而导致iar4突变体在盐胁迫下积累了更多的Na+以及更高的Na+/K+比值,破坏了体内的盐离子平衡,造成了Na+毒害作用,对植株的生长产生了严重影响。通过对IAR4调控盐胁迫下植物根生长的生理机制研究发现,在盐胁迫下,iar4突变体中的ROS清除系统不能被正常激活,破坏了体内ROS产生与清除的平衡,导致了ROS在体内过量的积累,从而影响植株在盐胁迫下的根长发育。IAR4基因的突变会降低根尖分生组织的活性,使得根部区域细胞数目变少以及细胞长度变短。盐胁迫处理会加剧iar4突变体对盐敏感的表型,使根部分生区的活性以及细胞分裂的能力都受到严重的抑制,从而导致了根长发育极度迟缓。当外源施加ROS还原剂GSH时,iar4突变体根部分生区的活性以及细胞分裂的能力都得到部分的恢复。表明盐胁迫抑制主根生长可能是由于盐胁迫下大量积累的活性氧抑制了根尖分生组织的活性导致。植株根部的发育以及根尖分生组织活性的维持都是通过生长素的运输以及分布来调节的。进一步对IAR4通过调控ROS来影响根长发育进行生理、分子以及细胞学上的研究时发现,盐胁迫抑制了突变体根部生长素极性运输相关的ProPIN1:PIN1-GFP、ProPIN2:PIN2-GFP、ProPIN3:PIN3-GFP以及生长素应答相关ProDR5:GFP的表达水平,导致根尖生长素分布少,抑制根尖分生组织活性以及细胞分裂水平,使得根生长受到严重抑制。当外源施加ROS清除剂GSH或者添加生长素时,iar4突变体中生长素极性运输的转运子的表达得到恢复,并部分恢复了分生组织活性和主根根长。这些结果表明iar4突变体中过多积累的ROS抑制主根的发育是通过抑制生长素的运输和分布来实现的。本论文研究通过反向遗传学方法找到了拟南芥中调控盐胁迫应答的一个新基因IAR4,该基因整合了ROS和生长素途径,通过调节PIN介导的生长素极性运输从而调控盐胁迫下主根的生长。我们的研究主要解析了IAR4调控盐胁迫下根部生长的机制,同时阐明了ROS和生长素在盐胁迫下的互作关系。
王建文[8]（2019）在《柽柳miRNA调控耐盐性的分子机理研究》文中提出盐碱地产生的高盐胁迫直接影响作物产量,中国盐碱地面积约20多万平方公里,理解植物耐盐机制、利用抗逆育种手段充分利用盐碱地,对提高我国农业综合生产能力、解决粮食危机意义重大。相比草本植物,耐盐树种具有高度耐盐的优良特性,研究其耐盐调控机理可以进一步阐明植物的耐盐机制。非编码小分子微小RNA（micro RNA,mi RNA）在植物的逆境胁迫响应中发挥重要的调控功能,研究林木mi RNA的转录后调控机制,阐明其调控耐盐性的分子机理,对耐盐种质资源评价和植物抗逆遗传改良具有重要的指导意义。盐生植物柽柳（Tamarix chinensis Lour.）作为耐盐性最高的树种之一,是林木耐盐性研究的优良材料。本研究利用小RNA测序技术,进行了柽柳mi RNA的全基因组扫描,预测了mi RNA和靶基因的调控网络,鉴定了两个盐胁迫诱导的mi RNA（tch-mi R156和tch-mi R164）及其靶基因,并进行了分子互作验证。通过抗性靶基因的异源过表达,初步验证了tch-mi R156和tch-mi R164为柽柳耐盐性正调控因子。主要研究结果如下:I.对盐胁迫下的柽柳根部组织进行小RNA测序,预测了288个mi RNA并建立了其在根部组织的表达谱,预测到191个差异表达mi RNA和706个靶基因,联合柽柳转录组数据所注释的盐胁迫相关基因,预测了柽柳mi RNA-耐盐靶基因调控网络。II.根据mi RNA表达谱,结合茎环引物定量PCR验证,筛选出3个胁迫显着诱导的mi RNA（ath-mi R164a,ath-mi R156a和ath-mi R157a）为候选mi RNA;通过荧光定量PCR,构建了盐胁迫下mi RNA靶基因家族的表达谱,筛选出NAC（No Apical Meristem,ATAF1/2and CUC2;’无顶端分生组织’、’拟南芥激活因子’和’杯状子叶’的缩写）和SBP（SQUAMOSA promoter binding protein;花分生组织特征基因启动子结合蛋白）两个转录因子家族为候选靶基因家族。III.利用从头预测的方法,预测到ath-mi R164a,ath-mi R156a成熟体对应的初级转录本,通过RACE技术克隆了柽柳tch-mi R164和tch-mi R156基因全长,构建了mi RNA瞬时过表达载体,结合双荧光素酶报告载体共转化原生质体,验证了mi RNA156的5个靶标（SBP1-5）和mi RNA164的3个靶标（NAC1-3）。IV.通过RACE技术克隆了5个SBP靶基因全长和3个NAC靶基因全长,并进行了胁迫下组织表达模式分析,筛选出根中特异性表达且迅速受盐胁迫抑制的NAC1,以及在根、茎、叶中表达模式一致的且和mi RNA156表达量显着负相关的SBP5,作为功能验证的靶基因。通过NAC1和SBP5的mi RNA响应元件多点突变,获得了mi R156抗性靶标r SBP5和mi R164抗性靶标r NAC1,并验证了抗性靶标为典型的核定位。V.抗性靶标r SBP5和r NAC1的遗传转化结果表明,NAC1和SBP5超表达拟南芥在0.3%盐胁迫下,种子发芽率显着低于野生型,幼苗根系和子叶生长显着减缓,受到明显的胁迫抑制,且相比SBP5超表达,NAC1超表达对种子发芽率以及幼苗的抑制效应更为显着。相比野生型,转基因NAC1和SBP5拟南芥耐盐性显着下降,处于盐敏感状态。通过异源表达柽柳靶基因,首次揭示了柽柳NAC1和SBP5负调控耐盐性。综上,本研究表明,tch-mi R156通过转录后沉默靶基因SBP5,抑制其对植株的盐敏感诱导;tch-mi R164通过转录后沉默靶基因NAC1,抑制其对植株的盐敏感诱导,tch-mi R156和tch-mi R164为耐盐性的正调控因子。结合已有报道,柽柳耐盐性调控模式推测如下:高盐胁迫下,胁迫信号诱导tch-mi R156和tch-mi R164基因上调表达,短时间内积累大量tch-mi R156和tch-mi R164成熟体,分别介导靶基因SBP5和NAC1的转录后沉默,导致有效转录因子不足,下游基因转录活性和丰度下降,柽柳脱离盐敏感状态,表现为高耐盐性。tch-mi R156和tch-mi R164通过转录后沉默NAC1和SBP5,调控柽柳适应盐胁迫。
胡华冉[9]（2019）在《工业大麻耐盐候选基因GDH2和NACs的克隆及功能分析》文中认为盐害是影响植物生长发育和全球农业产量的一种主要的非生物胁迫,因此植物的耐盐性机制研究成为当今全球关注的热点之一。工业大麻（Cannabis sartiva L.）是极具潜力的经济作物,研究其耐盐机理对改良和提高大麻耐盐性具有重要理论与实践意义。目前,NAC转录因子被证实响应植物盐胁迫,而谷氨酸脱氢酶（GDH）是植物体内一种重要的胁迫应答酶。基于实验室前期研究工作,从大麻盐胁迫转录组数据库筛选了被证实参与逆境响应通路且表达上调的4个候选基因,分别命名为CsGDH2,CsN4C1,CsA4 C2,CsNAC3。本论文在探索大麻组培体系的基础上,克隆了这4个基因的全长序列,进行了生物信息学分析;同时筛选内参基因研究其时空表达特征;构建了原核表达载体及RNAi、过表达载体,将过表达载体分别转化烟草和拟南芥,初步分析了这4个盐胁迫应答基因的功能;主要结果如下:（1）基因的半定量和定量表达分析表明,4个候选基因在根和叶中的表达量随盐浓度、胁迫时间的变化而不同。CsGDH2基因在叶中的表达量总体高于根部;200 mM NaCl胁迫下,CsNAC1基因在根部的表达量高于叶片,而CsNA C2和CsNA C3基因则相反。此外,CsGDH2、CsNA C3基因的表达量随胁迫时间的增加而增加,但CsNA Cl、CsNA C2呈现出先增后降的趋势。（2）构建的CsGDH2和CsNAC基因原核表达载体pEASY-Blunt E1,经盐胁迫诱导出大量目的蛋白。初步认为该4个基因在参与大麻耐盐碱调控方面做出了一定的贡献。（3）从大麻中克隆得到谷氨酸脱氢酶2基因（CsGDH2）cDNA片段,其序列全长1730bp,开放阅读框1236 bp,编码411个氨基酸,包含一个谷氨酸脱氢酶保守结构域;比较了与CsGDH2氨基酸序列同源性90%以上的物种,系统进化树显示,CsGDH2与桑树亲缘关系最近,而与南瓜、苦瓜的亲缘关系最远。克隆了 CsNAC1、CsN4 C2、CsN4 C3的cDNA 全长,分别为 888 bp、864bp、1059 bp,分别编码295、287和352个氨基酸;经保守结构域和同源序列比对发现它们编码的蛋白质均具有NAM结构域,且CsNA C1和CsNA C2属于NAC家族的ATAF亚族,CsNA C3则属于AtNAC3亚族。比较了与CsAAC氨基酸序列同源性90%以上的物种,系统进化树提示,CsNA Cs与苎麻、山黄麻及蓖麻的亲缘关系最近。4个基因编码的亲水性蛋白质的等电点、脂溶系数、不稳定系数等理化性质各不相同。（4）构建了这4个盐胁迫相关基因的RNAi和过表达载体,通过叶盘法和花序侵染法分别转入烟草和拟南芥:①CsGDH2转基因烟草经盐处理后的谷氨酸脱氢酶活性、SOD活性、叶绿素含量、可溶性糖含量显着高于野生型,丙二醛含量显着低于野生型。②CsNAC1、CsNAC3转基因烟草的相对电导率和SOD活性都显着高于野生型,而这两项生理指标在CsNA C2转基因烟草中则与野生型无明显差异;3个基因的转基因烟草植株的叶绿素含量和可溶性糖含量均显着高于野生型;CsNAC1和CsNA C3转基因植株的MDA含量显着低于野生型,而CsNAC2转基因植株无显着变化。③CsGDH2、CsN4 C2和CsNAC3（CsN4C1基因侵染未获得转基因材料）的转基因拟南芥种子在盐胁迫下的发芽率显着高于野生型,说明耐盐性提高。综上所述,CsGDH2、CsNAC1和CsN4C3的过量表达,能显着提高烟草转基因植株的耐盐性,而CsNAC2基因的功能尚难确定。（5）对于’云麻1号’,用于叶片愈伤组织诱导的最适培养基为:0.4 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+MS+8g琼脂+30g糖:该品种叶片再生的潮霉素筛选压为2 mg/L,头孢霉素筛选压为0.2 g/L。
沈杰[10]（2017）在《蛋白磷酸酶TOPP4参与拟南芥盐胁迫响应初步研究》文中研究表明盐碱条件产生的渗透胁迫、离子毒害及营养失衡均会对细胞的生理活动和代谢平衡造成严重影响,如影响脂质代谢、蛋白质合成与修饰等一系列重要的生命活动过程。为应对不良的外界环境,植物进化出多种生理生化机制维持自身稳态,确保生长发育的正常进行。本论文利用蛋白磷酸酶TOPP4基因的一个点突变体topp4-1和T-DNA插入突变体topp4-3为材料进行研究,发现盐胁迫和渗透胁迫条件下topp4-1和topp4-3均出现更加敏感的应答缺陷表型,而对过氧化物、碱性条件及K+、Li+胁迫处理表现出与野生型相似的表型。p TOPP4-GUS染色和定量PCR结果表明,同盐胁迫响应基因RD22和RD29B一样,TOPP4也受盐胁迫诱导表达,由此证明TOPP4参与了植物盐胁迫应答过程。进一步研究发现TOPP4蛋白的C端结构域可以更好地恢复酵母AXT3K的盐敏感缺陷表型。二氨基联苯胺染色（DAB）和膜脂过氧化产物丙二醛（MDA）含量测定发现,盐胁迫能够引起topp4-1和topp4-3中活性氧（ROS）爆发和MDA含量积累,而且显着高于野生型。酵母双杂及pull-down实验结果表明,TOPP4能够与SOS信号通路中的调控因子GT、GH6和GH8分别互作,暗示TOPP4可能通过SOS信号通路调节植物耐盐过程。为验证植物蛋白磷酸酶PP1家族成员在盐胁迫调控过程中的功能,将9个成员转化盐敏感缺陷酵母AXT3K突变体,TOPP1和TOPP4可以较明显恢复酵母AXT3K的盐敏感缺陷表型,TOPP5的恢复作用较弱,表明PP1家族中TOPP1、TOPP4和TOPP5可能均参与盐胁迫应答过程。酵母双杂实验结果显示TOPP1、TOPP4、TOPP6、TOPP7与GT存在互作,GH8只与TOPP4存在互作。总之,我们的研究结果表明植物PP1家族可能通过SOS信号通路参与盐胁迫应答过程。
二、Identification and characterization of a salt tolerance-responsive gene(AtGRP9)of Arabidopsis（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Identification and characterization of a salt tolerance-responsive gene(AtGRP9)of Arabidopsis（论文提纲范文）
（1）亚麻荠WRKY转录因子家族的鉴定及其介导盐胁迫响应的功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 特色油料作物亚麻荠 |
| 1.1.1 亚麻荠抗逆性及优异农艺性状 |
| 1.1.2 亚麻荠的广泛应用 |
| 1.2 盐胁迫对植物生长发育的影响及植物对盐胁迫的应答 |
| 1.3 参与植物胁迫响应的转录因子 |
| 1.4 WRKY转录因子与植物生长发育及胁迫响应的调控 |
| 1.4.1 WRKY转录因子的特征 |
| 1.4.2 参与植物胁迫响应的WRKY转录因子研究进展 |
| 1.5 本研究的目的、意义及主要内容 |
| 1.6 本研究的技术路线 |
| 第二章 亚麻荠对盐胁迫响应的生理生化表征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 试验材料 |
| 2.2.1 植物材料 |
| 2.2.2 营养液配方 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 亚麻荠幼苗的处理 |
| 2.3.2 植株形态指标测定 |
| 2.3.3 植株生理指标测定 |
| 2.3.4 数据分析 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 盐胁迫对亚麻荠幼苗生长的影响 |
| 2.4.2 盐胁迫对亚麻荠幼苗叶片光合作用的影响 |
| 2.4.3 盐胁迫对亚麻荠幼苗叶片渗透调节物质的影响 |
| 2.4.4 盐胁迫对亚麻荠幼苗叶片丙二醛含量和相对电导率的影响 |
| 2.4.5 盐胁迫对亚麻荠幼苗叶片抗坏血酸和H_2O_2的影响 |
| 2.4.6 盐胁迫对亚麻荠幼苗叶片抗氧化体系的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 亚麻荠幼苗转录组分析与盐胁迫响应转录因子的筛选 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 试验材料 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 亚麻荠转录组测序 |
| 3.3.2 亚麻荠测序数据分析 |
| 3.3.3 差异表达基因筛选与及功能富集分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 测序数据质量分析 |
| 3.4.2 亚麻荠差异表达基因的分析 |
| 3.4.3 差异表达基因的GO富集分析 |
| 3.4.4 差异表达基因的KEGG富集分析 |
| 3.4.5 介导亚麻荠盐胁迫响应的候选转录因子分析 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 参与盐胁迫响应的基因及代谢通路 |
| 3.5.2 转录因子介导植物盐胁迫响应 |
| 3.5.3 WRKY转录因子是调控植物盐胁迫应答的重要成员 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 亚麻荠WRKY转录因子的全基因组鉴定与盐胁迫响应CsWRKY的筛选 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 试验材料 |
| 4.2.1 植物材料 |
| 4.2.2 主要试剂 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 亚麻荠WRKY转录因子的筛选 |
| 4.3.2 亚麻荠WRKY转录因子的理化性质分析 |
| 4.3.3 亚麻荠WRKY转录因子保守结构域和基因结构及进化分析 |
| 4.3.4 亚麻荠WRKY基因在不同组织器官表达谱和盐胁迫表达分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 全基因组鉴定获得242 个亚麻荠CsWRKY家族成员 |
| 4.4.2 15个CsWRKY基因位点可变剪接产生33 个不同的ORF剪接体 |
| 4.4.3 亚麻荠CsWRKY蛋白多序列比对和进化树分析 |
| 4.4.4 CsWRKY蛋白检测到10 个保守基序 |
| 4.4.5 亚麻荠CsWRKY基因不均匀地分布于各染色体 |
| 4.4.6 亚麻荠CsWRKY基因家族扩增的进化驱动力及CsWRKY和拟南芥、油菜WRKY的共线性分析 |
| 4.4.7 CsWRKY基因在不同组织中的表达 |
| 4.4.8 CsWRKY基因在盐胁迫下亚麻荠幼苗的表达谱 |
| 4.5 讨论 |
| 4.5.1 亚麻荠WRKY成员的保守性和差异性 |
| 4.5.2 基因片段复制构成亚麻荠WRKY家族急剧扩增的关键进化动力 |
| 4.5.3 部分CsWRKYs可能是介导亚麻荠盐胁迫响应的核心转录因子 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 应用莱茵衣藻遗传转化体系鉴定亚麻荠CsWRKY9、43和162 基因的功能 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 试验材料 |
| 5.2.1 植物材料 |
| 5.2.2 试验试剂 |
| 5.2.3 菌株与载体 |
| 5.2.4 培养基的配制 |
| 5.3 试验方法 |
| 5.3.1 亚麻荠CsWRKY9、43和162 基因的克隆和分析 |
| 5.3.2 构建CsWRKY9、43和162 基因的表达载体 |
| 5.3.3 CsWRKY9、43和162 基因的莱茵衣藻遗传转化 |
| 5.3.4 CsWRKY9、43和162 转基因藻株的筛选与鉴定 |
| 5.3.5 CsWRKY9、43和162 转化藻株的生理指标测定 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 亚麻荠CsWRKY9、43和162 基因的克隆及编码蛋白特性分析 |
| 5.4.2 CsWRKY9、43和162 基因表达载体的鉴定 |
| 5.4.3 阳性转化藻株的筛选及基因组DNA PCR鉴定 |
| 5.4.4 转化藻株目的基因CsWRKY9、43和162 表达分析 |
| 5.4.5 转化藻株CsWRKY9、43和162 对盐胁迫响应的表征 |
| 5.4.6 莱茵衣藻内源 CrWRKY敲除株系与过表达外源 CsWRKY藻株盐胁迫响应的表型比较 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第六章 亚麻荠CsWRKY162 过表达及CRISPR/Cas9 敲除突变体的构建和表型分析 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 试验材料 |
| 6.2.1 植物材料 |
| 6.2.2 试验试剂 |
| 6.2.3 菌种与载体 |
| 6.2.4 培养基的配制 |
| 6.3 试验方法 |
| 6.3.1 构建CsWRKY162 基因的过表达载体 |
| 6.3.2 构建CRISPR/Cas9 敲除载体 |
| 6.3.3 亚麻荠的遗传转化 |
| 6.3.4 转基因亚麻荠的鉴定及盐胁迫处理 |
| 6.4 结果与分析 |
| 6.4.1 CsWRKY162 植物过表达载体的鉴定 |
| 6.4.2 CsWRKY162 CRISPR/Cas9 敲除载体的鉴定 |
| 6.4.3 亚麻荠最适Hyg筛选浓度的确定 |
| 6.4.4 亚麻荠CsWRKY162 基因过表达株系的筛选及PCR鉴定 |
| 6.4.5 亚麻荠CsWRKY162 基因过表达株系对盐胁迫响应的表征 |
| 6.4.6 过表达株系中胁迫相关基因的表达 |
| 6.4.7 亚麻荠CsWRKY162 基因敲除株系的筛选及基因组DNA PCR鉴定 |
| 6.4.8 亚麻荠CsWRKY162 基因敲除株系响应盐胁迫的表征 |
| 6.4.9 CsWRKY162 敲除株系中胁迫相关基因的表达 |
| 6.5 讨论 |
| 6.6 小结 |
| 第七章 全文总结及展望 |
| 7.1 全文总结 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 附录 |
| 附表 |
| 附图 |
| 博士期间发表的论文 |
| 致谢 |
（2）毛竹CPA家族的鉴定及PheNHX2的功能分析（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要缩写词一览表 |
| 文献综述 |
| 1 植物抗盐机制研究 |
| 1.1 土壤盐碱化及对植物的危害 |
| 1.2 盐胁迫对植物的影响 |
| 1.2.1 盐胁迫对植物生长及形态的影响 |
| 1.2.2 盐胁迫对植物代谢的影响 |
| 1.3 植物的耐盐机制 |
| 1.3.1 植物渗透胁迫调节 |
| 1.3.2 植物离子毒害调节 |
| 1.4 毛竹盐胁迫研究进展 |
| 2 植物离子通道蛋白研究进展 |
| 2.1 植物HKT型转运蛋白 |
| 2.2 非选择性阳离子通道(NSCC)蛋白 |
| 2.3 单价阳离子/质子反转运(CPA)蛋白 |
| 1 引言 |
| 1.1 研究的目的及意义 |
| 1.2 技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 实验菌株和载体 |
| 2.1.3 酶与试剂 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.1.5 主要培养基配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 毛竹CPA的鉴定 |
| 2.2.2 毛竹CPA的系统进化分析 |
| 2.2.3 毛竹CPA的基因结构及保守结构域分析 |
| 2.2.4 毛竹CPA的基因复制分析 |
| 2.2.5 毛竹CPA的顺式作用元件分析 |
| 2.2.6 毛竹NHX的表达模式分析 |
| 2.2.7 毛竹PheNHX2 的克隆 |
| 2.2.8 毛竹PheNHX2 的亚细胞定位分析 |
| 2.2.9 拟南芥过表达毛竹PheNHX2 |
| 2.2.10 转基因拟南芥耐盐性研究 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 毛竹CPA的鉴定与表征 |
| 3.2 毛竹CPA的系统发育分析 |
| 3.3 毛竹CPA的基因结构分析 |
| 3.4 毛竹CPA家族的保守基序分析 |
| 3.5 毛竹CPA的进化分析 |
| 3.6 毛竹CPA启动子区分析 |
| 3.7 毛竹NHX家族的组织表达模式分析 |
| 3.8 毛竹NHX家族的诱导表达模式分析 |
| 3.9 毛竹PheNHX2 的克隆 |
| 3.10 毛竹PheNHX2 的亚细胞定位 |
| 3.11 过表达PheNHX2 拟南芥的幼苗表型分析 |
| 3.12 过表达PheNHX2 拟南芥的成苗表型分析 |
| 3.13 过表达PheNHX2 拟南芥的生理指标测定 |
| 3.14 胁迫响应基因的表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 毛竹CPA的鉴定 |
| 4.2 毛竹NHX家族基因的组织表达模式 |
| 4.3 毛竹NHX家族基因的诱导表达模式 |
| 4.4 毛竹PheNHX2 的功能分析 |
| 5 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 A 毛竹CPA基因的特性信息 |
| 附录 B 毛竹CPA蛋白多序列比 |
| 附录 C 水稻、玉米、二穗短柄草、高粱、毛果杨和拟南芥的CPA基因ID |
| 附录 D 毛竹CPA蛋白保守基序的相关信息 |
| 附录 E 同源基因对的核苷酸替换率及分化时间 |
| 作者简介 |
（3）杨树转录因子PtERF004耐盐胁迫功能分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 引言 |
| 第一章 杨树非生物胁迫相关转录因子研究进展 |
| 1.1 非生物胁迫相关转录因子研究进展 |
| 1.1.1 AP2/ERF转录因子研究进展 |
| 1.1.2 其他转录因子研究进展 |
| 1.2 杨树对盐胁迫的适应性研究 |
| 1.2.1 盐胁迫对杨树生长发育的影响 |
| 1.2.2 杨树应答盐胁迫的信号转导途径 |
| 1.3 本文主要研究内容及目的 |
| 1.4 技术路线 |
| 第二章 杨树ERF转录因子耐盐胁迫表达模式分析 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 主要试剂、仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 PtERF基因的生物信息学分析 |
| 2.2.2 RNA的提取 |
| 2.2.3 c DNA合成 |
| 2.2.4 RT-qPCR分析 |
| 2.2.5 RNA-Seq分析 |
| 2.2.6 数据统计分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 序列的获得 |
| 2.3.2 PtERF基因的生物信息学分析 |
| 2.3.3 PtERF基因在盐胁迫条件下的时空表达模式分析 |
| 2.3.4 GO功能注释和富集分析 |
| 2.3.5 KEGG功能注释和富集分析 |
| 2.3.6 基于RNA-Seq的表达模式分析 |
| 2.3.7 表达相关性分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 PtERF004 植物表达载体构建与遗传转化 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 主要试剂、菌株及载体 |
| 3.1.3 培养基配制 |
| 3.1.4 主要药品的配制 |
| 3.1.5 仪器和耗材 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 杨树PtERF004 植物过表达载体的构建 |
| 3.2.2 杨树PtERF004 植物抑制表达载体的构建 |
| 3.2.3 杨树遗传转化 |
| 3.2.4 转基因杨树的鉴定 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 杨树PtERF004 植物过表达及抑制表达载体构建 |
| 3.3.2 转基因杨树的培育 |
| 3.3.3 转基因杨树的PCR检测 |
| 3.3.4 转基因杨树的RT-qPCR检测 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 杨树PtERF004 耐盐功能分析 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 药品的配制 |
| 4.1.4 仪器、耗材及软件 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 PtERF004 基因在转基因杨树中的表达分析 |
| 4.2.2 转基因杨树形态指标测定 |
| 4.2.3 转基因杨树耐盐分析 |
| 4.2.4 转基因杨树生理指标的测定 |
| 4.2.5 ROS相关基因在转基因杨树中的表达分析 |
| 4.2.6 数据处理 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 PtERF004 基因的表达分析 |
| 4.3.2 转基因杨树形态指标分析 |
| 4.3.3 转基因杨树耐盐分析 |
| 4.3.4 转基因杨树的生理指标测定 |
| 4.3.5 ROS相关基因的相对表达水平分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 PtERF004 互作基因鉴定 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 植物材料 |
| 5.1.2 主要试剂、菌株及载体 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 RNA测序数据处理与分析方法 |
| 5.2.2 酵母单杂交分析 |
| 5.2.3 NAC045 基因表达量分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 差异表达基因分析 |
| 5.3.2 WGCNA分析 |
| 5.3.3 转录因子分析 |
| 5.3.4 启动子结构分析 |
| 5.3.5 酵母单杂交验证 |
| 5.3.6 NAC045 基因表达量分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 讨论 |
| 6.1.1 杨树ERF转录因子耐盐胁迫表达模式分析 |
| 6.1.2 杨树PtERF004 耐盐功能分析 |
| 6.1.3 PtERF004 互作基因鉴定 |
| 6.2 主要结论 |
| 6.3 主要创新点 |
| 6.4 不足与展望 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（4）刚毛柽柳ThPHD3基因调控盐胁迫应答分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 抗逆相关转录因子 |
| 1.3 PHD转录因子 |
| 1.3.1 PHD转录因子的结构特征 |
| 1.3.2 PHD转录因子的功能 |
| 1.4 刚毛柽柳及其抗逆基因研究进展 |
| 1.5 研究的目的和意义 |
| 1.6 研究内容和技术路线 |
| 2 刚毛柽柳ThPHD3基因的克隆及表达分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 植物材料以及胁迫处理 |
| 2.1.2 菌种与载体 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 刚毛柽柳RNA提取 |
| 2.2.2 反转录 |
| 2.2.3 刚毛柽柳ThPHD3基因的克隆 |
| 2.2.4 ThPHD3基因的生物信息学分析 |
| 2.2.5 ThPHD3蛋白的亚细胞定位分析 |
| 2.2.6 实时荧光定量qRT-PCR分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 ThPHD3基因的克隆 |
| 2.3.2 ThPHD3基因的生物信息学分析 |
| 2.3.3 ThPHD3亚细胞定位分析 |
| 2.3.4 ThPHD3基因在不同非生物胁迫和激素处理下的表达分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 转ThPHD3基因拟南芥和刚毛柽柳的耐盐分析 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 菌株和载体 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 CTAB法植物基因组DNA的提取 |
| 3.2.2 pROKⅡ-ThPHD3过表达载体构建 |
| 3.2.3 pFGC5941-ThPHD3抑制表达载体构建 |
| 3.2.4 转ThPHD3基因拟南芥的获得及耐盐分析 |
| 3.2.5 瞬时转化ThPHD3基因刚毛柽柳及耐盐性分析 |
| 3.3 转录组测序分析 |
| 3.3.1 植物材料的处理及送样 |
| 3.3.2 转录组测序RNA样品准备及测序 |
| 3.3.3 测序数据分析 |
| 3.3.4 数据处理 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 ThPHD3基因过表达和抑制表达载体构建 |
| 3.4.2 转ThPHD3基因T_1代拟南芥的筛选和PCR鉴定 |
| 3.4.3 过表达ThPHD3基因提高了转基因拟南芥的耐盐能力 |
| 3.4.4 瞬时转化ThPHD3基因增强了刚毛柽柳的耐盐能力 |
| 3.4.5 3种瞬时转化刚毛柽柳RNA-seq分析 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 刚毛柽柳ThPHD3基因识别顺式作用元件鉴定 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 菌株和载体 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 培养基 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 pGADT7-Rec2-ThPHD3重组载体构建 |
| 4.2.2 ThPHD3基因与酵母文库互作分析 |
| 4.2.3 pHIS2-元件报告载体的构建 |
| 4.2.4 ThPHD3基因识别的核心元件验证分析 |
| 4.2.5 EMSA验证ThPHD3与核心元件的结合 |
| 4.2.6 农杆菌瞬时转化烟草验证ThPHD3与核心元件的结合 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 pGADT7-Rec2-ThPHD3酵母效应载体的获得 |
| 4.3.2 ThPHD3与酵母文库互作筛选结合元件 |
| 4.3.3 未知元件中核心序列的确认 |
| 4.3.4 EMSA分析ThPHD3与核心元件的结合 |
| 4.3.5 ThPHD3基因与TCTC元件在烟草体内的相互作用 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 ThPHD3基因调控下游靶基因的鉴定 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 植物材料 |
| 5.1.2 菌株和载体 |
| 5.1.3 主要试剂 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 靶基因的ChIP分析 |
| 5.2.2 靶基因ZAT12和E3PUB23的酵母单杂交分析 |
| 5.2.3 靶基因ZAT12和E3PUB23的EMSA分析 |
| 5.2.4 靶基因ZAT12和E3PUB23的体内验证分析 |
| 5.2.5 ThZAT12和ThE3PUB23基因的耐盐应答分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 刚毛柽柳ThPHD3基因调控下游基因的鉴定 |
| 5.3.2 ThPHD3基因与靶基因启动子的体内互作验证 |
| 5.3.3 ThZAT12和ThE3PUB23基因瞬时转化刚毛柽柳耐盐响应分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 刚毛柽柳ThPHD3转录因子互作蛋白的筛选 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.1.1 植物材料 |
| 6.1.2 菌株和载体 |
| 6.1.3 主要试剂 |
| 6.1.4 培养基 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 ThPHD家族基因酵母双杂交载体构建 |
| 6.2.2 刚毛柽柳ThPHD3基因的转录激活活性分析 |
| 6.2.3 ThPHD3蛋白与ThPHDs家族其他蛋白的二聚作用分析 |
| 6.2.4 ThPHD3蛋白与ThPHDs家族其他互作蛋白的BiFC验证 |
| 6.2.5 Bait蛋白(pGBKT7-ThPHD3)筛选cDNA文库 |
| 6.2.6 候选Prey质粒的分离与鉴定 |
| 6.2.7 ThWRKY2基因的耐盐应答分析 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 酵母双杂交Bait表达载体(pGBKT7-ThPHD3)构建 |
| 6.3.2 Bait蛋白(pGBKT7-ThPHD3)转录激活活性分析 |
| 6.3.3 刚毛柽柳ThPHD3二聚作用分析 |
| 6.3.4 刚毛柽柳ThPHD3蛋白与互作蛋白ThWRKY2的筛选验证 |
| 6.3.5 刚毛柽柳ThWRKY2基因的耐盐应答分析 |
| 6.4 本章小结 |
| 7 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 博士学位论文修改情况确认表 |
（5）尿素代谢途径对盐逆境下拟南芥种子萌发和苗期生长的影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 盐胁迫对植物的危害及分子机理 |
| 1.1.1 盐胁迫对植物的危害 |
| 1.1.2 植物耐盐性的研究进展 |
| 1.2 尿素代谢 |
| 1.2.1 脲酶的作用及生理机制 |
| 1.2.2 氨对植物作用的研究进展 |
| 1.3 种子萌发的调控 |
| 1.4 SOS信号通路 |
| 1.5 研究的目的与意义 |
| 2 材料与实验方法 |
| 2.1 植物材料 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验试剂与药品配置 |
| 2.3.1 实验试剂 |
| 2.3.2 药品配置 |
| 2.4 转录组分析 |
| 2.4.1 转录组测序与数据评估 |
| 2.4.2 差异表达基因分析及功能注释 |
| 2.4.3 差异表达基因对盐胁迫的应答 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.5.1 植物材料处理 |
| 2.5.2 植物总RNA的提取 |
| 2.5.3 mRNA反转录合成cDNA |
| 2.5.4 实时定量PCR检测 |
| 2.5.5 植物总DNA提取 |
| 2.5.6 突变体鉴定 |
| 2.5.7 双突变材料制备 |
| 2.5.8 植物体内NH_4~+含量测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 盐胁迫处理下尿素代谢途径差异表达基因的挖掘 |
| 3.1.1 数据筛选与评估 |
| 3.1.2 样本相关性检验 |
| 3.1.3 差异表达基因的分析 |
| 3.1.4 小结 |
| 3.2 尿素代谢途径差异表达基因对盐胁迫应答分析 |
| 3.2.1 差异表达基因缺失突变体鉴定 |
| 3.2.2 差异表达基因缺失突变体在盐胁迫下表型分析 |
| 3.2.3 尿素代谢途径对差异表达基因在盐胁迫下的因影响分析 |
| 3.2.4 小结 |
| 3.3 尿素代谢与盐胁迫对种子萌发的相关性研究 |
| 3.3.1 尿素代谢对盐敏感突变体生长的研究 |
| 3.3.2 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（6）刚毛柽柳耐盐ThCOLs转录因子基因克隆与筛选（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 抗逆相关的转录因子 |
| 1.2.1 NAC类转录因子 |
| 1.2.2 WRKY类转录因子 |
| 1.2.3 MYB类转录因子 |
| 1.3 CO-Like转录因子的结构和功能 |
| 1.3.1 CO-Like转录因子的结构特征 |
| 1.3.2 CO-Like转录因子参与开花调控 |
| 1.3.3 CO-Like转录因子在抗逆和其它方面的功能 |
| 1.4 技术路线 |
| 1.5 研究的目的与意义 |
| 2 刚毛柽柳ThCOLs基因的克隆及表达分析 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 载体与菌株 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 刚毛柽柳总RNA的提取和反转录 |
| 2.2.2 刚毛柽柳ThCOLs基因的克隆 |
| 2.2.3 刚毛柽柳ThCOLs基因生物信息学分析 |
| 2.2.4 实时荧光定量RT-PCR |
| 2.2.5 数据处理 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 刚毛柽柳ThCOLs基因序列的获得 |
| 2.3.2 刚毛柽柳ThCOLs基因生物信息学分析 |
| 2.3.3 不同胁迫处理下ThCOLs表达模式分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 刚毛柽柳ThCOL2基因耐盐功能初步分析 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 菌株与载体 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 pROKⅡ-ThCOL2过表达载体的构建 |
| 3.2.2 pFGC5941-ThCOL2抑制表达载体的构建 |
| 3.2.3 刚毛柽柳瞬时转化 |
| 3.2.4 RNA提取和qRT-PCR |
| 3.2.5 组织化学染色 |
| 3.2.6 生理指标的测定 |
| 3.2.7 数据处理 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 pROKⅡI-ThCOL2过表达载体的构建 |
| 3.3.2 pFGC5941-ThCOL2抑制表达载体的构建 |
| 3.3.3 瞬时表达刚毛柽柳的获得 |
| 3.3.4 盐胁迫下瞬时转基因刚毛柽柳苗的组织化学染色分析 |
| 3.3.5 盐胁迫下瞬时转基因刚毛柽柳的生理生化指标分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 ThCOL2转录因子识别顺式作用元件的研究 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 载体与菌株 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 刚毛柽柳ThCOL2基因的亚细胞定位 |
| 4.2.2 ThCOL2蛋白转录激活结构域分析 |
| 4.2.3 ThCOL2转录因子识别顺式作用元件的研究 |
| 4.2.4 核心作用元件筛选 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 ThCOL2基因亚细胞定位分析 |
| 4.3.2 ThCOL2转录因子转录激活活性分析 |
| 4.3.3 顺式作用元件的筛选 |
| 4.3.4 核心作用元件特异性互作鉴定 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一: 克隆获得的刚毛柽柳ThCOLs基因推导的蛋白序列 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（7）拟南芥IAR4调控盐胁迫下主根生长的分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 植物盐胁迫研究进展 |
| 1.1.1 盐胁迫对植物的影响 |
| 1.1.2 盐胁迫对植物根系的影响 |
| 1.1.3 植物耐盐机理的研究 |
| 1.1.3.1 植物对渗透压胁迫的调控 |
| 1.1.3.2 植物对离子毒害的调控 |
| 1.2 生长素对植物的影响 |
| 1.2.1 生长素的合成 |
| 1.2.1.1 依赖色氨酸的生长素合成途径 |
| 1.2.1.2 不依赖色氨酸的生长素合成途径 |
| 1.2.2 生长素的信号转导 |
| 1.2.3 生长素的极性运输 |
| 1.2.3.1 生长素输入载体 |
| 1.2.3.2 生长素输出载体 |
| 1.3 氧化胁迫对植物的影响 |
| 1.3.1 活性氧对植物发育的影响 |
| 1.3.2 活性氧的产生 |
| 1.3.3 活性氧的清除 |
| 1.3.3.1 酶促清除系统 |
| 1.3.3.2 非酶促清除系统 |
| 1.4 生长素和活性氧之间的交叉作用 |
| 1.4.1 ROS影响生长素的合成与代谢 |
| 1.4.2 ROS影响生长素的运输与信号转导 |
| 1.4.3 ROS和生长素的cross-talk对植物的影响 |
| 1.5 丙酮酸脱氢酶家族研究进展 |
| 1.5.1 丙酮酸脱氢酶复合物的结构与种类 |
| 1.5.2 丙酮酸脱氢酶复合物的研究概况 |
| 1.5.3 植物中丙酮酸脱氢酶的研究概况 |
| 1.6 本研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 拟南芥材料 |
| 2.2 实验所用到的菌株和质粒载体 |
| 2.3 拟南芥的种植方法 |
| 2.3.1 拟南芥种子的清洗 |
| 2.3.2 拟南芥的种植 |
| 2.4 常用培养基的配方 |
| 2.5 拟南芥水培生长方法 |
| 2.5.1 水培液的配置 |
| 2.5.2 水培装置的改造以及水培生长 |
| 2.6 拟南芥基因组总DNA的提取与基因型鉴定 |
| 2.6.1 植物DNA快速抽提法 |
| 2.6.2 CTAB法抽提植物基因组DNA |
| 2.6.3 基因型鉴定 |
| 2.7 拟南芥RNA的提取 |
| 2.8 拟南芥的基因表达量检测 |
| 2.8.1 半定量PCR检测表达量 |
| 2.8.2 qRT-PCR检测表达量 |
| 2.9 遗传转化载体的构建和转化 |
| 2.9.1 回补载体的构建 |
| 2.9.2 GUS染色载体构建 |
| 2.9.3 遗传转化 |
| 2.9.4 转基因植株的筛选 |
| 2.10 拟南芥植株抗逆性实验 |
| 2.10.1 盐胁迫处理下植株表型统计 |
| 2.10.2 甘露醇处理下植株表型统计 |
| 2.10.3 GSH或 NAA处理下的植株表型统计 |
| 2.11 拟南芥根系结构的观察 |
| 2.11.1 拟南芥幼苗根部胁迫处理 |
| 2.11.2 根尖拍照 |
| 2.11.3 根尖各区域细胞统计 |
| 2.12 Na~+及K~+含量检测 |
| 2.13 活性氧检测 |
| 2.13.1 H_2DCF-DA荧光探针标记检测 |
| 2.13.2 DAB染色 |
| 2.13.3 NBT染色 |
| 2.14 ROS清除酶CAT、SOD酶活检测 |
| 2.14.1 CAT酶活检测 |
| 2.14.2 SOD酶活检测 |
| 2.15 MDA含量的检测 |
| 2.16 激光共聚焦检测GFP荧光蛋白 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 盐敏感突变体的筛选与表型鉴定 |
| 3.1.1 盐敏感突变体的筛选 |
| 3.1.2 拟南芥突变体基因型鉴定与表达量检测 |
| 3.1.3 IAR4 缺失突变体的表型确定与分析 |
| 3.2 IAR4 的表达模式分析 |
| 3.3 IAR4 缺失突变体的耐盐性分析 |
| 3.4 IAR4 回补突变体的耐盐性检测 |
| 3.4.1 IAR4 回补突变体的获得以及表达量检测 |
| 3.4.2 IAR4 回补突变体在盐处理条件下的根长分析 |
| 3.5 IAR4 缺失突变体盐胁迫相关检测 |
| 3.5.1 IAR4 缺失突变体对渗透压胁迫的分析 |
| 3.5.2 IAR4 缺失突变体Na~+/K~+含量 |
| 3.5.3 IAR4 缺失突变体盐胁迫相关基因表达量检测 |
| 3.6 IAR4 缺失突变体活性氧变化检测 |
| 3.6.1 IAR4 缺失突变体盐处理下活性氧积累过多 |
| 3.6.2 IAR4 缺失突变体活性氧相关基因表达量检测 |
| 3.6.3 IAR4 缺失突变体活性氧清除酶含量检测 |
| 3.7 IAR4 缺失突变体根部分生区活性的变化 |
| 3.7.1 IAR4 缺失突变体根尖细胞数目和长度的检测 |
| 3.7.2 IAR4 缺失突变体细胞周期基因检测 |
| 3.8 GSH处理会恢复盐胁迫下突变体的根部变化 |
| 3.8.1 GSH对 IAR4 缺失突变体根长的影响 |
| 3.8.2 GSH对 IAR4 缺失突变体细胞分裂的影响 |
| 3.9 盐胁迫抑制根部生长素响应和运输水平 |
| 3.9.1 盐胁迫抑制根部生长素响应水平 |
| 3.9.2 盐胁迫抑制根部生长素的运输水平 |
| 3.10 生长素恢复盐处理下IAR4 缺失突变体根部表型 |
| 3.10.1 生长素部分恢复盐胁迫下根长变化 |
| 3.10.2 生长素部分恢复盐胁迫下生长素响应的变化 |
| 3.10.3 生长素部分恢复盐胁迫下PINs的变化 |
| 3.11 GSH可部分恢复盐胁迫下的生长素响应和运输水平 |
| 3.11.1 GSH可部分恢复盐胁迫下的生长素响应水平 |
| 3.11.2 GSH可部分恢复盐胁迫下的PINs表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 IAR4 调控盐胁迫下主根生长 |
| 4.2 IAR4 影响生长素的动态平衡 |
| 4.3 IAR4 参与盐胁迫下ROS对生长素的极性运输 |
| 4.4 研究展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录Ⅰ 本实验所用引物信息 |
| 附录Ⅱ 部分实验操作步骤 |
| 附录Ⅲ |
| 致谢 |
（8）柽柳miRNA调控耐盐性的分子机理研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 植物耐盐性研究进展 |
| 1.1.1 植物耐盐研究 |
| 1.1.2 植物耐盐机制 |
| 1.1.3 耐盐研究方法 |
| 1.1.4 柽柳的耐盐研究 |
| 1.1.4.1 林木抗逆的特性 |
| 1.1.4.2 柽柳的逆境生理机制 |
| 1.1.4.3 柽柳的耐盐分子机制 |
| 1.2 植物miRNAs和逆境胁迫 |
| 1.2.1 植物miRNAs生物合成 |
| 1.2.2 miRNAs的胁迫响应 |
| 1.2.2.1 miRNAs的胁迫诱导 |
| 1.2.2.2 miRNAs的耐盐调控 |
| 1.2.2.3 miR156/SPL抗逆研究 |
| 1.2.2.4 miR164/NAC抗逆研究 |
| 1.3 miRNA研究技术 |
| 1.3.1 miRNAs检测方法 |
| 1.3.1.1 传统方法 |
| 1.3.1.2 新方法 |
| 1.3.2 靶基因鉴定方法 |
| 1.3.2.1 基于生物信息预测 |
| 1.3.2.2 基于降解片段 |
| 1.3.2.3 基于荧光素酶报告基因 |
| 1.3.3 功能研究的方法 |
| 1.3.3.1 功能获得(gain-of-function)方法 |
| 1.3.3.2 功能缺失(loss-of-function)方法 |
| 1.4 立题依据和技术路线 |
| 1.4.1 立题依据 |
| 1.4.2 技术路线 |
| 第二章 盐胁迫下柽柳小 RNA 组测序 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 试剂和仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 蛋白含量和POD酶活测定 |
| 2.2.2 总RNA提取纯化 |
| 2.2.3 小RNA建库测序和分析 |
| 2.2.4 miRNA表达验证 |
| 2.3 结果和分析 |
| 2.3.1 取样策略 |
| 2.3.2 总RNA质量和文库质量 |
| 2.3.3 转录组的耐盐基因预测 |
| 2.3.4 miRNA鉴定 |
| 2.3.5 miRNA表达谱及其验证 |
| 2.3.6 miRNA差异表达分析 |
| 2.3.7 miRNA靶基因预测 |
| 2.4 讨论和小结 |
| 2.4.1 盐胁迫处理的实验设计 |
| 2.4.2 柽柳候选耐盐基因 |
| 2.4.3 miRNA调控网络 |
| 2.4.4 本章小结 |
| 第三章 柽柳盐胁迫响应 miRNA 筛选和验证 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 实验试剂和仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 总RNA提取纯化 |
| 3.2.2 miRNA和靶基因荧光定量分析 |
| 3.2.3 miRNA从头预测流程 |
| 3.2.4 miRNA前体克隆 |
| 3.3 结果和分析 |
| 3.3.1 胁迫响应的miRNA筛选 |
| 3.3.1.1 候选靶基因筛选 |
| 3.3.1.2 候选miRNA筛选 |
| 3.3.2 候选miRNA鉴定 |
| 3.3.2.1 miRNA判定标准 |
| 3.3.2.2 候选miRNA的 de novo预测 |
| 3.3.2.3 候选miRNA克隆验证 |
| 3.4 讨论和小结 |
| 3.4.1 目前miRNA鉴定中的问题 |
| 3.4.2 大规模miRNA de novo预测 |
| 3.4.3 少量候选miRNA的验证策略 |
| 3.4.4 本章小结 |
| 第四章 miRNA 靶基因验证和克隆分析 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 实验试剂和仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 双荧光素酶报告载体构建 |
| 4.2.2 荧光素化学发光检测 |
| 4.2.3 靶基因克隆 |
| 4.2.4 内含子扩增 |
| 4.2.5 表达分析 |
| 4.3 结果和分析 |
| 4.3.1 双荧光素酶报告系统优化 |
| 4.3.1.1 适用于植物的35S-pmirGLO |
| 4.3.1.2 转染体系和检测方法 |
| 4.3.2 靶基因验证 |
| 4.3.2.1 SBP-MRE验证 |
| 4.3.2.2 NAC-MRE验证 |
| 4.3.3 柽柳SBP克隆分析 |
| 4.3.3.1 基因结构 |
| 4.3.3.2 蛋白质序列分析 |
| 4.3.3.3 系统发育分析 |
| 4.3.3.4 表达特性分析 |
| 4.3.4 柽柳NAC克隆分析 |
| 4.3.4.1 基因结构 |
| 4.3.4.2 蛋白质序列分析 |
| 4.3.4.3 系统发育分析 |
| 4.3.4.4 表达特性分析 |
| 4.4 讨论和小结 |
| 4.4.1 DLR用于靶基因验证的优越性 |
| 4.4.2 功能验证的靶基因筛选 |
| 4.4.3 本章小结 |
| 第五章 抗性靶基因功能验证 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 植物材料 |
| 5.1.2 实验试剂和仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 靶位点消除 |
| 5.2.2 亚细胞定位 |
| 5.2.3 拟南芥遗传转化 |
| 5.2.4 耐盐性测定和分析 |
| 5.3 结果和分析 |
| 5.3.1 抗性靶基因构建 |
| 5.3.2 亚细胞定位 |
| 5.3.3 阳性植株分子检测 |
| 5.3.4 耐盐性评价 |
| 5.3.4.1 适合的盐胁迫浓度 |
| 5.3.4.2 种子和苗期的耐盐性 |
| 5.3.4.3 植株的耐盐性 |
| 5.4 讨论和小结 |
| 5.4.1 tch-mi R156 正调控耐盐性 |
| 5.4.2 tch-mi R164 正调控耐盐性 |
| 5.4.3 本章小结 |
| 第六章 结论和创新点 |
| 6.1 本研究主要结论 |
| 6.2 本研究创新点 |
| 6.3 研究展望 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（9）工业大麻耐盐候选基因GDH2和NACs的克隆及功能分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 植物基因功能研究方法概述 |
| 1.1.1 RNA干扰与植物基因功能鉴定 |
| 1.1.1.1 RNA干扰的工作机制及特征 |
| 1.1.1.2 RNA干扰在植物上的应用 |
| 1.1.2 过表达与植物基因功能验证 |
| 1.1.3 转基因技术是基因功能验证(RNA干扰、过表达)的基础 |
| 1.1.4 根癌农杆菌介导的植物遗传转化研究进展 |
| 1.1.5 转基因植物的鉴定 |
| 1.1.6 转基因技术在植物上的应用 |
| 1.2 国内外植物耐盐基因研究现状和发展趋势 |
| 1.2.1 盐胁迫对植物生长和生理生化的影响 |
| 1.2.2 植物耐盐相关基因的功能研究进展 |
| 1.2.2.1 NAC家族基因的研究进展 |
| 1.2.2.2 谷氨酸脱氢酶(GDH)基因的研究进展 |
| 1.3 国内外麻类作物基因功能研究 |
| 1.3.1 盐对大麻的影响 |
| 1.3.2 麻类转基因研究 |
| 1.3.3 大麻的基因功能研究 |
| 1.4 论文研究的主要内容、目的及意义 |
| 1.4.1 研究目的和意义 |
| 1.4.2 主要内容 |
| 1.4.3 技术路线 |
| 第二章 工业大麻疑似耐盐基因表达分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.2.2.1 工业大麻的盐胁迫处理 |
| 2.2.2.2 RNA提取 |
| 2.2.2.3 cDNA第一链的合成 |
| 2.2.2.4 引物的扩增和验证 |
| 2.2.2.5 工业大麻疑似耐盐基因的表达分析 |
| 2.2.3 数据分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 RNA的提取 |
| 2.3.2 内参基因引物的扩增产物分析 |
| 2.3.3 内参基因引物表达的稳定性分析 |
| 2.3.4 内参基因在样品中的平均表达水平 |
| 2.3.5 候选内参基因在不同盐浓度下的相对表达量 |
| 2.3.6 内参基因的选择 |
| 2.3.6.1 geNorm分析 |
| 2.3.6.2 NormFinder分析 |
| 2.3.7 工业大麻疑似耐盐基因表达分析 |
| 2.3.7.1 工业大麻GDH2基因(CsGDH2)的表达分析 |
| 2.3.7.2 工业大麻NAC家族基因(CsNACs)的表达分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 内参基因的筛选 |
| 2.4.2 工业大麻疑似耐盐基因的时空表达 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 工业大麻疑似耐盐基因的原核表达 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 pEASY-Blunt E1原核表达载体的构建 |
| 3.2.1.1 大麻cDNA的获得 |
| 3.2.1.2 引物设计及扩增 |
| 3.2.1.3 目的片断与pEASY-Blunt E1质粒的连接 |
| 3.2.1.4 转化及阳性克隆检测 |
| 3.2.2 原核表达SDS-PAGE检测 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 原核表达载体的构建 |
| 3.3.2 蛋白诱导表达 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 工业大麻谷氨酸脱氢酶基因(CsGDH2)的克隆及功能分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 盐胁迫处理 |
| 4.2.2 NaCl对大麻谷氨酸脱氢酶活性的影响 |
| 4.2.3 总RNA提取及cDNA的合成 |
| 4.2.4 引物设计及基因克隆 |
| 4.2.4.1 过表达序列的引物设计及其克隆 |
| 4.2.4.2 RNAi序列的引物设计及干扰序列的克隆 |
| 4.2.5 生物信息学分析 |
| 4.2.6 CsGDH2表达载体的构建 |
| 4.2.6.1 过表达载体的构建及农杆菌转化 |
| 4.2.6.2 RNAi载体的构建及农杆菌转化 |
| 4.2.7 转化烟草及转基因苗的鉴定 |
| 4.2.7.1 过表达载体转化烟草 |
| 4.2.7.2 转基因阳性苗的初步筛选 |
| 4.2.7.3 转基因阳性苗的PCR鉴定 |
| 4.2.7.4 转基因烟草的耐盐性分析 |
| 4.2.8 过表达拟南芥株系的获得和鉴定 |
| 4.2.8.1 花序侵染法转化拟南芥 |
| 4.2.8.2 转基因植株筛选 |
| 4.2.8.3 RT-PCR分析转基因植株 |
| 4.2.8.4 种子萌发率测定 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 不同盐浓度对谷氨酸脱氢酶活性的影响 |
| 4.3.2 CsGDH2克隆 |
| 4.3.3 CsGDH2基因的生物信息学分析 |
| 4.3.3.1 理化性质 |
| 4.3.3.2 磷酸化位点和保守结构域分析保守结构域 |
| 4.3.3.3 亚细胞定位、信号肽和导肽、跨膜区分析 |
| 4.3.3.4 蛋白结构域分析 |
| 4.3.3.5 CsGDH2蛋白氨基酸序列的相似性和同源性 |
| 4.3.4 过表达载体的构建及农杆菌转化 |
| 4.3.5 RNAi载体的构建及农杆菌转化 |
| 4.3.5.1 RT-PCR扩增CsGDH2 RNAi片断 |
| 4.3.5.2 RNAi表达载体的构建 |
| 4.3.5.3 CsGDH2 RNAi载体直接导入农杆菌 |
| 4.3.6 农杆菌介导CsGDH2过表达载体转化烟草 |
| 4.3.6.1 CsGDH2基因转化烟草 |
| 4.3.6.2 PCR扩增检测转基因植株 |
| 4.3.7 CsGDH2基因过表达载体转化烟草的形态与生理 |
| 4.3.7.1 转基因烟草的形态 |
| 4.3.7.2 转基因烟草的生理指标 |
| 4.3.8 过表达拟南芥株系的筛选和鉴定 |
| 4.3.8.1 过表达拟南芥株系的筛选 |
| 4.3.8.2 RT-PCR鉴定过表达拟南芥株系 |
| 4.3.8.3 过表达拟南芥株系种子在盐胁迫下的萌发率 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 大麻GDH2基因的克隆 |
| 4.4.2 CsGDH2表达载体转化农杆菌 |
| 4.4.3 CsGDH2基因过表达对转基因苗的影响 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 工业大麻NAC家族基因(CsNACs)的克隆及功能分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 材料与试剂 |
| 5.2.2 胁迫处理 |
| 5.2.3 总RNA提取及cDNA第一链合成 |
| 5.2.4 引物设计及基因克隆 |
| 5.2.4.1 过表达序列的引物设计及其克隆 |
| 5.2.4.2 RNAi序列的引物设计及干扰序列的克隆 |
| 5.2.5 生物信息学分析 |
| 5.2.6 CsNACs表达载体的构建 |
| 5.2.6.1 过表达载体的构建及农杆菌转化 |
| 5.2.6.2 CsNACs RNAi载体的构建及农杆菌转化 |
| 5.2.7 CSNACs转化烟草及转基因苗的鉴定 |
| 5.2.7.1 过表达载体转化烟草 |
| 5.2.7.2 转基因阳性苗的初步筛选 |
| 5.2.7.3 转基因阳性苗的PCR鉴定 |
| 5.2.7.4 转基因烟草的耐盐性分析 |
| 5.2.8 过表达拟南芥株系的获得和鉴定 |
| 5.2.8.1 花序侵染法转化拟南芥 |
| 5.2.8.2 转基因植株筛选 |
| 5.2.8.3 RT-PCR分析转基因植株 |
| 5.2.8.4 种子萌发率测定 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 CsNACs的克隆 |
| 5.3.2 CsNACs推测蛋白的结构及其特性分析 |
| 5.3.3 CsNACs蛋白氨基酸序列的进化树分析 |
| 5.3.4 CsNACs过表达载体的构建及农杆菌转化 |
| 5.3.5 RNAi载体的构建及农杆菌转化 |
| 5.3.5.1 RT-PCR扩增CsNACs的RNAi片断 |
| 5.3.5.2 RNAi载体构建 |
| 5.3.5.3 CsNACs的RNAi载体直接导入农杆菌 |
| 5.3.6 农杆菌介导CsNACs过表达载体转化烟草 |
| 5.3.6.1 CsNACs转化烟草 |
| 5.3.6.2 PCR扩增检测转基因植株 |
| 5.3.7 CsNACs过表达载体转化烟草的形态与生理 |
| 5.3.7.1 转基因烟草的形态 |
| 5.3.7.2 转基因烟草的生理指标 |
| 5.3.8 CsAACs过表达拟南芥株系的筛选和鉴定 |
| 5.3.8.1 过表达拟南芥株系的筛选 |
| 5.3.8.2 RT-PCR鉴定过表达拟南芥株系 |
| 5.3.8.3 过表达拟南芥株系种子在盐胁迫下的萌发率 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 NAC家族基因的生物信息学分析 |
| 5.4.2 NAC转录因子家族及其功能 |
| 5.4.3 大麻NAC基因(CsNA Cs)的功能研究 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 大麻组培技术初步探索 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 试验材料 |
| 6.2.1 弱毒苗的获得 |
| 6.2.2 无菌苗的获得方式 |
| 6.2.3 外植体的获取及愈伤、芽分化诱导 |
| 6.2.4 大麻外植体抗生素敏感性试验初步探索 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 无菌苗的获取 |
| 6.3.2 不同外植体愈伤和芽分化诱导 |
| 6.3.2.1 以下胚轴作为外植体的愈伤诱导 |
| 6.3.2.2 以叶片作为外植体的愈伤诱导 |
| 6.3.2.3 不同激素配比对芽分化诱导的影响 |
| 6.3.2.4 最佳诱导愈伤培养基对茎尖愈伤诱导的影响 |
| 6.3.3 头孢霉素(Cef)对大麻叶片愈伤组织诱导的影响 |
| 6.3.4 潮霉素(Hyg)对大麻叶片愈伤组织诱导的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 第七章 全文结论与论文创新性分析 |
| 7.1 全文结论 |
| 7.2 论文创新性 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间完成的科研成果 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
（10）蛋白磷酸酶TOPP4参与拟南芥盐胁迫响应初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1.1 盐胁迫对植物生长发育的影响 |
| 1.2 植物抗盐机理 |
| 1.2.1 离子平衡 |
| 1.2.2 渗透调节 |
| 1.2.3 抗氧化机制 |
| 1.2.4 盐胁迫与激素信号传递 |
| 1.3 PPI 蛋白磷酸酶研究进展 |
| 1.3.1 蛋白磷酸酶分类 |
| 1.3.2 PP1家族研究进展 |
| 1.4 本研究的目的和意义 |
| 第二部分 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验试剂和仪器 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 拟南芥材料培养 |
| 2.3.2 拟南芥基因组DNA的提取 |
| 2.3.3 拟南芥总RNA的提取 |
| 2.3.4 定量PCR检测基因表达水平 |
| 2.3.5 定量PCR反应体系 |
| 2.3.6 酵母双杂交实验 |
| 2.3.7 pull-down实验 |
| 2.3.8 GUS染色 |
| 2.3.9 DAB染色 |
| 2.3.10 MDA的测定 |
| 2.3.11 酶切-连接方式构建载体 |
| 2.3.12 Gateway方式构建载体 |
| 第三部分 结果与分析 |
| 3.1 topp4-1和topp4-3 对盐胁迫更敏感 |
| 3.2 topp4-1和topp4-3 对渗透胁迫更敏感 |
| 3.3 topp4-1和topp4-3对Li Cl和KCl胁迫表现出与Col相似的表型 |
| 3.4 topp4-1及topp4-3 对碱性胁迫表型与Col相似 |
| 3.5 topp4-1和topp4-3 中过氧化物清除机制正常 |
| 3.6 盐胁迫诱导基因TOPP4表达 |
| 3.7 TOPP4 能够部分恢复酵母AXT3K的盐敏感缺陷表型 |
| 3.8 盐胁迫诱导topp4-1和topp4-3 中过氧化物异常积累 |
| 3.9 盐胁迫下topp4-1中盐应答基因表达异常 |
| 3.10 TOPP4与SOS信号途径中的多个因子存在互作 |
| 3.11 离子通道 HKT 介导突变体 topp4-1 中 Na~+转运 |
| 3.12 PP1家族其它成员参与盐胁迫应答过程 |
| 第四部分 讨论与展望 |
| 4.1 TOPP4参与调控植物盐胁迫应答过程 |
| 4.2 topp4-1和topp4-3对H_2O_2 和碱性胁迫表型与Col相似 |
| 4.3 PP1家族其它成员参与调控植物盐胁迫应答过程 |
| 参考文献 |
| 在学期间研究成果 |
| 致谢 |
四、Identification and characterization of a salt tolerance-responsive gene(AtGRP9)of Arabidopsis（论文参考文献）
- [1]亚麻荠WRKY转录因子家族的鉴定及其介导盐胁迫响应的功能研究[D]. 宋亚楠. 山西农业大学, 2021
- [2]毛竹CPA家族的鉴定及PheNHX2的功能分析[D]. 吴林. 安徽农业大学, 2021(02)
- [3]杨树转录因子PtERF004耐盐胁迫功能分析[D]. 黄娟娟. 山西农业大学, 2021
- [4]刚毛柽柳ThPHD3基因调控盐胁迫应答分子机制研究[D]. 王培龙. 东北林业大学, 2021
- [5]尿素代谢途径对盐逆境下拟南芥种子萌发和苗期生长的影响研究[D]. 王丽丽. 东北林业大学, 2020(02)
- [6]刚毛柽柳耐盐ThCOLs转录因子基因克隆与筛选[D]. 雷晓锦. 东北林业大学, 2020
- [7]拟南芥IAR4调控盐胁迫下主根生长的分子机制[D]. 付阳. 华中农业大学, 2019(01)
- [8]柽柳miRNA调控耐盐性的分子机理研究[D]. 王建文. 南京林业大学, 2019(06)
- [9]工业大麻耐盐候选基因GDH2和NACs的克隆及功能分析[D]. 胡华冉. 云南大学, 2019
- [10]蛋白磷酸酶TOPP4参与拟南芥盐胁迫响应初步研究[D]. 沈杰. 兰州大学, 2017