一、肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析（论文文献综述）
杨文瑜[1]（2020）在《人附睾分泌蛋白4（HE4）在肺癌恶性转化中的功能与作用机制》文中进行了进一步梳理人附睾分泌蛋白4（human epididymis protein 4,HE4）,最初,被认为是附睾中独有的表达产物,后来发现HE4在浆液性和子宫内膜样上皮性卵巢癌患者中过表达。据报道,HE4显着增强卵巢癌细胞的侵袭和转移能力,这与HE4上Lewis y抗原的高表达相关联。研究表明大多数肺癌高表达HE4蛋白,与肺癌病人的预后不良有关,但HE4在肺癌中的恶性转化机制尚不清楚。另有研究发现Lewis y抗原同样存在于表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）,高表达的Lewis y抗原增强EGFR磷酸化,并激活PI3K/AKT和RAF/MEK/MAPK信号通路,促使细胞增殖。而突变的EGFR是肺癌主要的诊断与治疗分子靶标,因此我们推测肺癌中高表达的HE4可能与EGFR信号通路有一定的相关性。通过本课题的研究,有望阐明HE4在肺癌发生和转移中的作用机制,并对肺癌的靶向治疗有可能提供一种新的治疗策略,具有重要的临床价值。本文采用Western Blotting分析了HE4在六种类型的肿瘤细胞株中的表达。利用RNA干扰技术（慢病毒介导的sh RNA）在三株具有代表意义的肺癌细胞株[PC-9（EGFR 19外显子缺失突变,对EGFR一二代抑制剂敏感）、H1975（EGFR二次点突变T790M,对EGFR一二代抑制剂具有显着耐药性）和A549（EGFR野生型,对EGFR抑制剂敏感性不高）]敲低HE4表达,检测敲低HE4后对肺癌细胞表型的影响,主要包括细胞增殖、克隆形成、周期、凋亡、转移和侵袭;其次检测了HE4敲低是否增敏靶向EGFR一线药物吉非替尼（gefitinib）在肺癌细胞增殖中的药效;最后通过q RT-PCR、免疫共沉淀及Western Blotting检测HE4与EGFR的转录调控、互作及敲低HE4后对EGFR相关信号通路的影响。结果表明HE4在肺癌、间皮瘤、卵巢癌、胃癌、结直肠癌和胃肠道间质瘤中均有不同程度表达;TCGA数据库分析发现与正常癌旁组织相比,HE4在肺腺癌病人中高表达,而在肺鳞癌中表达差异并不显着;体外实验表明在肺腺癌细胞株PC-9和H1975中敲低HE4失活了EGFR信号通路,从而显着抑制细胞的生长、克隆形成、伤口愈合、侵袭以及阻滞细胞于G1期;gefitinib与HE4 sh RNA对肺腺癌细胞的生长不具有协同性抑制效果;进一步研究发现肺腺癌细胞中HE4在两个层面调控EGFR表达:1)转录水平调节EGFR m RNA表达;2)HE4与EGFR存在蛋白互作。这些新的发现将对肺癌的治疗具有重要的临床意义,药物靶向HE4也可能成为一种新的肺癌治疗策略。
胡早秀[2]（2019）在《miR-339-5p在非小细胞肺癌中的作用及机制研究》文中指出[背景和目的]2018年发布的GLOBOCAN 2018全球癌症统计报告数据显示,肺癌的发病率和死亡率在全球癌症中均位居第一位。中国肺癌的发展趋势与全球肺癌类似,既是发病率最高的肿瘤,也是肿瘤相关死因之首。“宣威地区”在我国乃至世界都是肺癌的高发区,且因宣威肺癌中不吸烟女性肺腺癌的死亡率是中国平均水平的20倍等明显的区域特异性,使其在我国肺癌防治中具有特殊地位。我们课题组前期研究发现,宣威地区肺癌的高发生率和高死亡率与使用当地特殊燃煤引起的室内污染有关,该类室内污染环境可能会导致特异的miRNA谱,进而引起宣威肺癌。我们前期对24对宣威肺癌组织标本进行miRNA芯片检测,发现155条差异表达的miRNA,其中,miR-339-5p是上调表达的miRNA之一,根据已有研究报道,miR-339-5p在大部分肿瘤中的表达低于相对应的正常组织,而在肺癌中仅见一篇相关研究,但其表达出现了不一致结果且并未对miR-339-5p的作用机制进行进一步研究。鉴于以上情况,我们利用癌症和肿瘤基因图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库分析发现miR-339-5p在肺腺癌和肺鳞癌中均为高表达,前期细胞实验,我们同样发现miR-339-5p在肺癌细胞株中为高表达。因此,我们提出了几个问题:miR-339-5p在肺癌与正常肺组织中会出现差异表达吗?宣威肺癌和非宣威肺癌中的表达是否不一致?如果存在差异表达,miR-339-5p在肺癌的发生发展中起什么作用?机制又如何?本研究检测非小细胞肺癌（Non Small-Cell Lung Cancer,NSCLC）癌组织和配对正常肺组织以及NSCLC血清和对照中miR-339-5p的表达水平,并分析miR-339-5p与临床因素的关系以及其诊断价值;同时通过体内外实验,探究下调miR-339-5p的表达水平以观察对细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠成瘤的影响;并初步研究miR-339-5p的靶基因及信号通路。通过以上研究探讨miR-339-5p在NSCLC中扮演的角色及其作用机制,以期能够进一步为肺癌的防治诊疗工作拓展新的方法。第一部分miR-339-5p在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其临床意义[目的]分析组织芯片和TCGA中miR-339-5p表达相关数据,同时检测非小细胞肺癌患者组织样本（癌组织、癌旁）和血清样本（肺癌患者、非癌患者）的miR-339-5p表达水平,分析其表达与临床因素之间的关系,探讨miR-339-5p在非小细胞肺癌（NSCLC）中的作用和临床意义。[方法]1.分析前期芯片数据,探究miR-339-5p在宣威肺腺癌及配对远端正常肺组织中的表达情况。2.分析TCGA数据库数据,探究miR-339-5p在非小细胞肺癌（NSCLC）及正常肺组织中的表达情况。3.qPCR检测63例（30例宣威籍,33例非宣威籍）非小细胞肺癌（NSCLC）癌组织及其远端正常肺组织中miR-339-5p表达量,分析癌与正常组织的表达情况,结合患者临床病理特征（年龄,性别,吸烟状态,地区,组织学类型,淋巴结转移和分期）,对miR-339-5p的表达水平与患者临床病理特征进行相关性分析。最后分析miR-339-5p对肺癌组织的诊断价值。4.qPCR检测104例非小细胞肺癌和50例非癌血清样本中miR-339-5p表达量,探讨其是否适宜作为非小细胞肺癌诊断的血清标记物。[结果]1.前期宣威肺腺癌芯片数据显示,与正常肺组织相比,有155条miRNA出现差异表达（65条上调,90条下调）,其中miR-339-5p为上调表达（FC=2.0189,p=0.0001,FDR=0.0017）。2.TCGA数据库数据显示,与正常肺组织相比,肺腺癌（Fold Change=2.334,p=2.618×10-11<0.001）和肺鳞状细胞癌（Fold Change=1.589,p=4.323 ×10-6<0.001）中miR-339-5p的表达均上调。3.在63例（30例宣威籍,33例非宣威籍）NSCLC中,与配对正常肺组织相比,miR-339-5p在癌组织的表达量明显增高（p=0.007<0.01）。临床病理特征分析,miR-339-5p高表达者淋巴结转移率更高（p=0.02<0.05）,而miR-339-5p的表达水平与年龄,性别,吸烟状态,地区,组织学类型和分期的相关性分析均无统计学意义（p>0.05）。应用MedCalc软件对肺癌组织中 miR-339-5p 进行 ROC（Receiver Operation Characteristic Curve,受试者工作特征曲线）分析,当截值（cutoffvalue）为0.1195时,miR-339-5p达到最高诊断效率,其敏感性为55.6%,特异性为74.6,AUC（Area Underthe Curve,曲线下面积）为0.639。4.血清miR-339-5p在非小细胞肺癌和非癌对照组中的表达差异无统计学意义（p=0.07>0.05）。[结论]1.miR-339-5p在非小细胞肺癌组织中高表达,且与淋巴结转移有关;miR-339-5p在宣威非小细胞肺癌组织中的表达量与非宣威非小细胞肺癌组织的表达量差异无统计学意义。2.miR-339-5p在肺癌组织的诊断中仅有较低的准确性,对肺癌组织的诊断有一定参考价值。3.miR-339-5p在NSCLC和非癌对照组中血清中的表达无显着差异,其可能不适合作为NSCLC诊断的血清标记物。第二部分 miR-339-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系生物学行为的影响[目的]探索下调miR-339-5p对非小细胞肺癌细胞系SPC-A1、XWLC-05增殖、迁移、侵袭等生物学功能的影响。[方法]1.运用qPCR技术检测正常支气管上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞株SPC-A1、A549、XWLC-05、YTLMC、GLC 的 miR-339-5p 表达量,筛选出 miR-339-5p高表达的肺癌细胞株。2.将miR-339-5p inhibitor转染对SPC-A1、XWLC-05细胞中,测定转染效率,筛选稳定转染的SPC-A1、XWLC-05细胞系,检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。[结果]1.与BEAS-2B细胞中miR-339-5p表达水平相比,miR-339-5p在肺癌细胞株SPC-A1、A549、XWLC-05、YTLMC、GLC 中均明显高表达（P<0.05）,其中SPC-A1的表达最高。2.成功转染miR-339-5p inhibitor后,与正常组和阴性对照相比,SPC-A1、XWLC-05细胞中的细胞miR-339-5p表达明显下降（p<0.05）。3.肺癌细胞系的生物学功能检测:（1）转染 miR-339-5p inhibitor 能抑制 SPC-A1、XWLC-05 细胞的增殖能力,差异有统计学意义（p<0.05）。（2）转染 miR-339-5p inhibitor 能抑制 SPC-A1、XWLC-05 细胞的迁移能力,差异有统计学意义（p<0.05）。（3）转染 miR-339-5p inhibitor 能抑制 SPC-A1、XWLC-05 细胞的侵袭能力,（p<0.05）。[结论]肺癌细胞株 SPC-A1、A549、XWLC-05、YTLMC、GLC 中 miR-339-5p均呈高表达,以SPC-A1最高;下调miR-339-5p可以抑制肺癌细胞SPC-A1、XWLC-05增殖、迁移、侵袭能力。miR-339-5p在非小细胞肺癌的发生发展中可能发挥促进作用,是促癌基因。第三部分mmiR-339-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）体内实验的研究[目的]探讨下调miR-339-5p对非小细胞肺癌细胞SPC-A1裸鼠成瘤的影响。[方法]1.通过慢病毒转染SPC-A1细胞,构建miR-339-5p低表达稳定转染细胞系和阴性对照稳定转染细胞系。2.在裸鼠腋下分别接种空白对照（Control）、阴性对照（NC）和miR-339-5p低表达（miR-339-5p inhibitor）细胞系,观察裸鼠一般情况,测量裸鼠瘤体大小。37天处死裸鼠,测瘤体大小,称瘤体重量。瘤体制成石蜡块,行HE染色,并通过免疫组化（immunohistochemistry,IHC）检测Ki-67的表达量。[结果]1.慢病毒转染SPC-A1细胞后,荧光显微镜观察细胞的转染效率大于50%,qPCR检测结果显示miR-339-5p在inhibitor组的表达明显低于NC组,差异有统计学意义（p<0.05）。2.在24天后,miR-339-5p低表达（miR-339-5p inhibitor）组瘤体体积小于阴性对照（NC）和空白对照（Control）,差异有统计学意义（p<0.05）;处死裸鼠后,miR-339-5p低表达（miR-339-5p inhibitor）组瘤体重量轻于阴性对照（NC）和空白对照（Control）组,差异有统计学意义（p<0.05）。3.Ki-67在低表达（miR-339-5p inhibitor）组的表达高于阴性对照（NC）和空白对照（Control）组,差异有统计学意义（P<0.05）。[结论]下调miR-339-5p表达可显着抑制非小细胞肺癌（NSCLC）细胞裸鼠成瘤能力及使 Ki-67 指数（immunoreactive score,IRS）降低。第四部分BCL6作为miR-339-5p直接基因的研究[目的]探讨BCL6是否为非小细胞肺癌中miR-339-5p的直接靶基因,并分析BCL6在肺癌组织及细胞中的表达情况以及其与预后的关系。[方法]1.生物信息学方法预测miR-339-5p的靶基因。2.荧光素酶报告基因系统检测BCL6是否为miR-339-5p的直接靶基因。3.蛋白印迹（Western blot）检测下调miR-339-5p后,肺癌细胞株SPC-A1中BCL6的表达变化。4.qPCR检测63例非小细胞肺癌（NSCLC）组织和其配对远端正常肺组织中BCL6的表达情况,回归分析其与miR-339-5p表达的相关性。5.利用GEPIA在线芯片数据,分析BCL6在非小细胞肺癌（NSCLC）和正常肺组织的表达情况。6.利用KM plotter软件分析BCL6表达与非小细胞肺癌（NSCLC）预后的关系。[结果]1.生物信息学预测BCL6为miR-339-5p的靶基因。2.荧光素酶报告系统证实miR-339-5p的直接靶基因是BCL6。3.下调SPC-A1细胞中的miR-339-5p表达后,蛋白印迹（Western blot）证实BCL6的表达上调。4.与远端正常肺组织相比,BCL6在63例非小细胞肺癌（NSCLC）中低表达（P<0.05）,且与 miR-339-5p 的表达呈负相关（R=0.236,P=0.044<0.05）。5.GEPIA分析结果显示:与正常肺组织相比,BCL6在肺腺癌和肺鳞癌中的表达均为低表达。6.KM plotter分析结果显示:BCL6高表达者总生存期（overall survival,OS）更长（HR=0.71,95%CI:0.6-0.84,p=6.2×10-5<0.001）,BCL6 高表达者有无进展生存期（progression-free survival,PFS）延长的趋势（HR=0.77,95%CI:0.58-1.01）,然而并未达到统计学差异（p=0.056>0.05）。[结论]miR-339-5p的直接靶基因是BCL6;BCL6在非小细胞肺癌（NSCLC）中低表达,且与miR-339-5p的表达呈负相关,提示miR-339-5p可能通过靶向BCL6来调控非小细胞肺癌（NSCLC）的发生发展。
贺利平[3]（2017）在《前列腺素D2合成酶在非小细胞肺癌中的表达及其作用机制研究》文中指出背景:不管是在国内还是在国外,肺癌的发病率和死亡率都位居恶性肿瘤的前列。非小细胞肺癌是肺癌最常见的类型,大约占据肺癌总发病率的百分之八十五左右。按照病理组织学类型的不同,非小细胞肺癌又可以分为非小细胞肺腺癌、非小细胞肺鳞癌以及肺大细胞癌。而肺腺癌以及肺鳞癌,是非小细胞肺癌最主要最常见的两个病理组织学类型。早期的非小细胞肺癌患者,在经过外科手术治疗以后,五年生存率可以达到大约百分之四十。但是,大约有百分之七十左右的非小细胞肺癌患者,在确诊的时候就已经属于中晚期,或者已经伴有局部的或者是远处的转移,错过了最佳的外科手术切除时机,导致预后不良。因此,探索和研究非小细胞肺癌的标志物,及其靶向治疗相关的基因,是十分必要的。研究方法:首先,使用GEO数据库的相关数据分析,初步研究前列腺素D2合成酶,在肺腺癌以及肺鳞癌中的蛋白表达情况。然后,从西安艾丽娜生物科技有限公司购买一块组织芯片,采用免疫组织化学染色对前列腺素D2合成酶,在肺腺癌以及肺鳞癌肿瘤组织中的蛋白表达情况,进行进一步的验证。结合GEO数据库和组织芯片的两个结果进行分析,以此来明确前列腺素D2合成酶,在肺腺癌以及肺鳞癌中的蛋白表达情况。其次,构建了过表达前列腺素D2合成酶的,属于肺腺癌细胞系的A549细胞与Calu-3细胞。以此来研究,在过表达了前列腺素D2合成酶以后,肺腺癌肿瘤细胞的生物行为学改变。最后,对可能相关的信号通路的相关蛋白质的表达变化情况进行检测,探讨前列腺素D2合成酶在非小细胞肺癌中起作用的分子机制。研究结果:GEO数据库和组织芯片的研究结果显示,前列腺素D2合成酶在非小细胞肺腺癌与非小细胞肺鳞癌肿瘤组织中的蛋白表达都是下调的,但是在这两个肿瘤组织中的蛋白表达无统计学差异。其与肺腺癌的肿瘤分期、患者预后具有显着相关性,而与肺鳞癌的分期及预后不具有显着相关性。细胞实验结果显示,过表达了前列腺素D2合成酶以后,A 549细胞与Calu-3细胞的侵袭能力受到了显着抑制,MAPK信号通路关键蛋白P38、ERK和JNK的表达出现了显着的下降。研究结论:（1）本研究发现了前列腺素D2合成酶,在非小细胞肺腺癌与非小细胞肺鳞癌肿瘤组织中的蛋白表达都是下调的,但是在这两个肿瘤组织中的蛋白表达无统计学差异;（2）前列腺素D2合成酶,与肺腺癌的肿瘤分期、患者预后具有显着相关性,而与与肺鳞癌的分期及预后不具有显着相关性,表明前列腺素D2合成酶可能肺腺癌中发挥有更为关键的作用;（3）在过表达了前列腺素D2合成酶以后,MAPK信号通路关键蛋白P38、ERK和JNK的表达出现了显着的下降,前列腺素D2合成酶对肺腺癌肿瘤侵袭的抑制,可能是通过对MAPK信号通路的抑制而起作用的。
肖平[4]（2015）在《LKB1对p21WAF1/CIP1的调控及相关机制研究》文中认为背景和目的:恶性肿瘤已经成为危害人类健康的疾病,世界卫生组织报告显示全球恶性肿瘤的发病率和死亡率均呈迅猛上升的趋势。在肿瘤的发生、发展的过程中,癌基因的激活或抑癌基因的失活起着十分重要的作用。近年来一个新的抑癌基因LKB1（Liver Kinase B1）在肿瘤学中的作用引起越来越多的关注。LKB1基因功能异常与全身多种肿瘤的发生密切相关,但绝大多数散发性肿瘤中,LKB1的突变是罕见的;而在NSCLC中LKB1的突变率高达30%。研究发现将LKB1转染至宫颈癌和恶性黑色素瘤等无LKB1表达的细胞系中,LKB1可以通过上调p21WAF1/CIP1的表达,将细胞周期阻滞在G1期,从而抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡。然而在LKB1突变率较高的NSCLC细胞中LKB1对p21WAF1/CIP1的调节作用尚不明确。此外,研究发现当细胞处于饥饿和体外分离的状态下,作为LKB1的下游激酶AMPK可以直接磷酸化p53 Ser15,增强p21WAF1/CIP1的表达,从而阻滞细胞周期的顺利进行。因此,LKB1是否通过其下游激酶AMPK磷酸化激活p53,从而增强p21WAF1/CIP1的表达尚不十分清楚。本研究首先在LKB1突变率较高的NSCLC细胞系中探讨LKB1对调节p21WAF1/CIP1的调节作用;其次,构建稳定表达LKB1sh RNA的同源细胞系;最后进一步探讨LKB1是否通过其下游激酶AMPK磷酸化激活p53,上调p21WAF1/CIP1的表达,阻滞细胞周期的顺利进行,为揭示肿瘤的发生发展提供理论基础。方法:（1）首先在NSCLC细胞系中选用LKB1突变型、p53野生型细胞（A549）转染LKB1质粒和LKB1-K78M激酶突变质粒,应用克隆形成实验检测LKB1对细胞生长的作用。其次选用LKB1突变型、p53野生型NSCLC细胞系（A549和H460）分别转染转染LKB1质粒、LKB1-K78M质粒和C2空白对照质粒,24小时后Western Blot检测p21WAF1/CIP1的表达变化;并应用流氏细胞仪检测细胞周期的变化水平;再次选用LKB1野生型、p53突变型NSCLC细胞系（H1299和Calu-1）,分别转染LKB1质粒和C2空白对照质粒,24小时后应用荧光定量PCR和Western Blot检测p21WAF1/CIP1的变化水平;最后应用同源细胞系H1299-411（LKB1 sh RNA）和H1299-PLKO.1,收集细胞沉淀,检测p21WAF1/CIP1的表达变化。（2）采用慢病毒载体系统将靶基因LKB1sh RNA转入HCT116细胞中,构建LKB1稳定抑制的同源细胞系HCT 116-LKB1sh RNA（HCT116 408）/HCT116-PLKO.1（HCT116 407）,并通过荧光定量PCR、Western Blot在m RNA和蛋白水平检测构建细胞系中LKB1的表达情况。（3）首先选用HCT 116 408（LKB1 knock down）/HCT 116 407（对照）这对同源细胞系,收集细胞沉淀,检测p21WAF1/CIP1的表达变化;应用HCT 116p53-/-/HCT116同源细胞系通过转染LKB1si RNA,24小时后Western Blot检测p21WAF1/CIP1的表达变化;其次选用HCT 116细胞系转染LKB1质粒、LKB1-K78M质粒和C2空白对照质粒,24小时后Western Blot检测p-AMPK、p-p53-Ser 15和p21WAF1/CIP1的表达变化;再次用25Mm 2-DG处理HCT116细胞,24h后Western Blot检测p21WAF1/CIP1的变化水平;最后通过对HCT 116 408（LKB1 knock down）/HCT 116 407（对照）和HCT 116p53-/-/HCT 116两对同源细胞系分别给予2-DG25Mm 24h处理后,Western Blot检测p-AMPK、p-p53-Ser 15和p21WAF1/CIP1的变化水平。结果:（1）通过克隆形成实验发现,与转入LKB1 K78M无激酶活性质粒相比,转入LKB1质粒的细胞克隆数明显减少,说明LKB1具有抑制细胞生长的作用。在LKB1突变型、p53野生型NSCLC细胞系中,转染LKB1的质粒上调p21WAF1/CIP1的表达,而空载体C2和无激酶活性的载体LKB1 K78M无此作用。同时,流式细胞结果显示与转染LKB1 K78M质粒和空白对照质粒相比,转染LKB1质粒的A549细胞G1期比例明显增加。在LKB1野生型、p53突变型NSCLC细胞系中,与空载体和无激酶活性的LKB1 K78M相比,转染LKB1质粒后在m RNA水平和蛋白水平均未见p21WAF1/CIP1的表达上调,并且流式细胞周期未见G1期比例增加。最后在p53缺失的NSCLC同源细胞系H1299-411和H1299-PLKO.1中的p21WAF1/CIP1表达也没有明显差异。（2）荧光定量PCR及Western Blot结果显示与对照细胞株HCT 116 407相比HCT116 408（LKB1sh RNA）中LKB1在m RNA水平和蛋白水平的表达水平明显降低,说明构建HCT116 408/HCT116 407同源细胞系成功。（3）HCT116 408（LKB1 sh RNA）和HCT116 407（对照）这对同源细胞系Western Blot结果显示LKB1表达下降后p21WAF1/CIP1的表达也下降。HCT116 p53-/-和HCT116这对同源细胞转染LKB1 Si RNA 48h后,Western Blot结果显示HCT116 p53-/-转染后p21WAF1/CIP1的表达没有明显变化,而HCT116转染LKB1 Si RNA后p21的表达明显下降。HCT116细胞外源性转入转染LKB1质粒、LKB1 K78M质粒和C2对照质粒,转染LKB1质粒的细胞与对照组相比,p-AMPK、p-p53-Ser 15和p21WAF1/CIP1的表达均上调;2-DG处理后的HCT116与对照组比较,p21WAF1/CIP1的表达明显上调;HCT116 408和HCT116 407同源细胞系,2-DG 25Mmol处理24h后,与未加药组相比HCT116 407细胞p-AMPK、p-p53-Ser 15和p21WAF1/CIP1的表达均上调,而HCT 116 408细胞p-AMPK、p-p53-Ser 15和p21WAF1/CIP1的表达未见明显变化。HCT116 p53-/-加入2-DG后与对照组HCT116相比,p21WAF1/CIP1的表达未见明显变化。结论:（1）在NSCLC细胞系中LKB1具有抑制细胞生长的作用;LKB1可以上调p21WAF1/CIP1的表达,将细胞周期阻滞在G1期,且此过程依赖激酶活性。（2）LKB1依赖p53上调p21WAF1/CIP1的表达。（3）LKB1调节p21WAF1/CIP1的机制是:LKB1通过其下游激酶AMPK磷酸化p53-Ser15,上调p21WAF1/CIP1的表达。
乌日汗,常福厚[5]（2015）在《基因多态性与吸烟交互作用致肺癌易感性的研究进展》文中研究说明肺癌是人类最常见的癌症之一。目前,肺癌的发病率和病死率在恶性肿瘤中居首位,致癌环境在肺癌的发病因素中起到重要的作用,但肿瘤的发生并不单纯取决于致癌环境,个体易感性在肿瘤的发生发展过程中有不可忽视的作用。越来越多的研究表明,肺癌的发生是遗传因素和环境因素交互作用的结果。本文对近年来基因多态性与吸烟交互作用与肺癌易感性的研究进行阐述,并对存在不同结果的原因及研究发展进行讨论。
关松磊[6]（2013）在《肺癌和食管癌外周血免疫调节因子及肿瘤相关抗原的自身抗体研究》文中进行了进一步梳理肺癌和食管癌是胸部的主要肿瘤，在我国，其发病率和死亡率居于前列。肺癌是肺部最常见的恶性肿瘤。肺癌和食管癌的治疗以外科手术切除为首选。手术后5年生存率可达50％以上。但由于缺乏早期的特异性诊断指标，多数病人就诊时已属晚期，失去根治性切除的机会。因此，对于肺癌和食管癌来讲，早期发现、早期诊断、早期治疗仍是当务之急，寻找和检测肺癌和食管癌中肿瘤诊断标志物的表达水平对于早期诊断具有重要意义。研究发现，自身抗体在肿瘤发病之前3-5年水平有所变化，说明自身抗体可能是肿瘤的超早期诊断标志。众所周知，CD4+CD25+FOXP3+Tregs在肿瘤的免疫耐受和免疫逃逸中扮演重要的作用，CD25，FOXP3，TGF-β1等免疫调节因子的自身抗体水平将直接影响Treg的功能，可能对肿瘤的发病可以起到很好的预测作用。经大量研究证实，肿瘤抑制蛋白P16（multiple tumor suppressor1，MTS），肿瘤抑制因子P53（Tumor suppressor p53，TP53），转录因子SOX2（SOX2），肿瘤相关基因蛋白（cancer-associated gene，CAGE）都与肿瘤的发生发展密切相关，属于肿瘤相关抗原。本项目拟选择CD25，FOXP3，TGF-β1为免疫调节分子，选择P16，TP53，SOX2，CAGE为肿瘤相关抗原，利用免疫信息学数据库和免疫学软件设计这7个分子的多肽抗原片段，利用ELISA法检测7个抗原在非小细胞肺癌和食管鳞癌患者外周血中相关抗体的水平，初步了解肿瘤患者外周血中免疫调节分子及肿瘤相关抗体的水平，并分析体内免疫调节分子的自身抗体与肿瘤相关抗体水平的关系，寻找肿瘤早期诊断标志物。本研究结果显示，在非小细胞肺癌和食管鳞癌患者外周血中，anti-CD25IgG和anti-FOXP3IgG可能是新的诊断标志物，且anti-FOXP3IgG在肺鳞癌中存在性别差异。anti-P16IgG水平的改变与非小细胞肺癌和食管鳞癌有一定的相关性，但阳性率偏低，需要继续深入研究P16的潜在诊断价值。虽然已经有大量的研究证实TGF-β1，P53，SOX2和CAGE在肺癌患者体内高表达，但是本研究结果表明，TGF-β1，P53，SOX2和CAGE的循环抗体在非小细胞肺癌和食管癌患者外周血中并没有明显的发生改变。anti-CD25IgG和anti-FOXP3IgG之间及与anti-P16IgG、anti-CAGE IgG、anti-SOX2IgG之间存在一定的相关性，表明CD25+FOXP3+Treg细胞对肿瘤相关分子存在一定的调节作用。Anti-CD25IgG、Anti-FOXP3IgG、Anti-P16IgG IgG水平的改变是NSCLC和ESCC的风险因素。在肿瘤患者中，CD25和FOXP3在细胞的表达是密切相关的，二者在免疫调节中起协同的作用，anti-P16IgG的水平与CD25及FOXP3的状态密切相关，说明二者的功能也要受到免疫调节细胞的影响。anti-CAGEIgG的水平与CD25，FOXP3及TGF-β1的状态密切相关，说明其同时接受免疫调节细胞和调节因子的影响。SOX2对免疫调节的反应在肿瘤患者体内和在健康人体内是相反的，此结果对于SOX2功能的进一步研究开发很有意义。TGF-β1和TP53在免疫调节和肿瘤发病过程中可能独立起作用，与FOXP3+CD4+CD25+Treg细胞的免疫调节作用互相影响不明显。由于两者在肿瘤发生中的作用非常重要，对肿瘤的作用很复杂，作用途径也很多，确切的结论需要大样本量的检测来进一步分析。
钟炜祥[7]（2011）在《广西地区非小细胞肺癌中K-ras基因表达与突变的研究》文中研究表明目的:研究广西地区非小细胞肺癌（ non-small cell lung cancer ,NSCLC）中K-ras基因的表达与突变,探讨K-ras基因的激活与广西地区NSCLC各临床病理特征的关系。方法:（1）选择广西地区86例NSCLC癌组织、31例癌旁组织及17例非肺癌组织的新鲜手术切除标本,用于K-ras基因mRNA表达的检测;进一步对此86例NSCLC癌组织及31例癌旁组织标本进行K-ras基因点突变的检测。（2）采用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction ,RT-PCR）法检测86例NSCLC癌组织、31例癌旁组织及17例非肺癌组织中K-ras基因的mRNA表达;通过聚合酶链反应-单链构象多态性（ polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism,PCR-SSCP）分析法与PCR-DNA序列分析法联合检测此86例NSCLC癌组织与31例癌旁组织中K-ras基因密码子12、13及61点突变。结果:（1）NSCLC癌组织中K-ras基因mRNA表达率为80.2%（69/86）,显着高于癌旁组织（51.6%,16/31）与肺良性病变组织（17.6%,3/17）（P值均<0.01）;癌旁组织中K-ras基因mRNA表达率高于肺良性病变组织,但差异没有统计学意义（P>0.0167）（注:0.0167是校准后的检验水准）。NSCLC中K-ras基因mRNA表达与年龄、性别、民族、吸烟史、组织病理类型、肿瘤细胞分化程度、TNM分期及淋巴结状态等均无相关性（P>0.05）。（2）应用PCR-SSCP分析法与PCR-DNA序列分析法联合检测86例NSCLC癌组织及31例癌旁组织中K-ras基因密码子12、13及61点突变,无1例发生K-ras基因点突变,即本研究选取的NSCLC病例组的K-ras基因突变率为0（0/86）。结论:（1）本研究选取的NSCLC病例组中K-ras基因mRNA表达率高,表明K-ras基因表达在肺癌的发生过程中是一个常见事件。K-ras基因的表达参与了广西地区NSCLC的发生过程,但与广西地区NSCLC的发展及不良预后无关;（2）本研究选取的NSCLC病例组中无1例出现K-ras基因密码子12、13及61点突变,表明广西地区NSCLC中K-ras基因突变率低下。K-ras基因野生型的比例高,提示广西地区NSCLC患者可能从表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂治疗中获益更大,预后相对较好;（3）广西地区NSCLC中K-ras基因的表达与突变具有其自身特点,提示NSCLC中K-ras基因的激活具有区域异质性。
蒋焱熠[8]（2011）在《非小细胞肺癌分子标志物及其临床相关性研究》文中提出背景和目的:肺癌是世界第一大恶性肿瘤,其发病率及死亡率居高不下,寻找肺癌早期标志物以及肺癌的预后标志物,将有助于肺癌的早期诊断和辅助指导肺癌的治疗。方法:本研究收集具有完整的临床和病理资料的非小细胞肺癌（NSCLC）标本196例,其中鳞癌88例,腺癌108例。应用组织芯片联合免疫组织化学技术,对20个蛋白的表达情况进行检测,分析其与临床病理参数的相关性。结果:对所测20个候选蛋白的分析发现,与癌旁形态学正常的组织相比,癌组织中uPA、ET-1、p53、ki67和EGFR显示较高频率的异常表达。其中,uPA阴性/弱、中度和高表达在鳞癌中的比例分别为13.3%、62.7%和24.0%,在腺癌中各为13.1%、52.4%和34.5%。ET-1在鳞癌中阴性/弱、中度和高表达分别为2.7%、41.9%和55.4%,在腺癌中各为10.6%、31.8%和57.6%。uPA高表达或与ET-1同时高表达的腺癌患者具有较长的术后生存时间（P = 0.012和0.016）。p53、ki67和EGFR在肺鳞癌强阳性率分别为59.3%、65.4%和67.9%,在肺腺癌强阳性率各为60.4%、44.0%和54.9%,而在癌旁形态学正常的组织表达率仅为14.0%、7.0%和12.2%。结论:uPA和ET-1蛋白联合很有可能作为一个有应用价值的非小细胞肺癌预后因子。p53、ki67、EGFR三种蛋白在肺癌组织高表达,而在手术切端组织不表达或仅微弱表达,很有可能作为肺癌诊断的重要分子标志。
顾其华[9]（2007）在《苯并芘肺内注射诱发大鼠肺肿瘤及绿茶的预防作用机制初步研究》文中研究指明目的：肺癌的发病率在工业化国家里持续居高不下，发展中国家的肺癌发病率仍在不断上升。因而人们转而注重肺癌的预防，希望通过化学预防策略降低肺癌的发病率。最佳的化学预防策略是通过日常饮食降低肺癌的发病风险。茶为全球最普遍的饮料之一，年消费量仅次于水，其中绿茶的防癌作用较好，有可能是最佳的肺癌预防饮料。但目前绿茶与肺癌的关系仍存在一定的争议，绿茶预防肺癌的机制尚未完全明确。另外，肺肿瘤动物模型是评价肺癌防治方案必不可少的工具，而目前所采用的肺癌裸鼠移植瘤模型以及采用致癌剂吸入、支气管内灌注、腹腔注射等方法构建的原发性肺肿瘤模型等均存在不同程度的不足。因此，本课题试以苯并芘油剂经皮穿刺肺内注射的方法建立大鼠肺肿瘤动物模型，并以此模型评价绿茶对肺癌的预防作用，在此基础上观察绿茶对大鼠肺肿瘤组织以及对苯并芘所致大鼠肺损伤的p53和Bcl-2基因表达的影响，以初步阐明绿茶预防肺癌的机制。方法：每次以含3，4-苯并芘2mg的苯并芘-玉米油混合剂0.2mL经皮肺穿刺注射于经戊巴比妥钠麻醉后的SD大鼠右肺，每2周处理1次，共4次。并以纯玉米油肺内注射4次作为阴性对照，苯并芘-玉米油皮下注射处理2次作为阳性对照。观察大鼠肿瘤的发生情况。在绿茶预防肺肿瘤的实验中，以3，4-苯并芘油剂经皮穿刺肺内注射构建大鼠原发性肺肿瘤模型，并以1％的绿茶作为大鼠的唯一饮料干预处理，对照组以水为唯一饮料，观察绿茶处理对大鼠成瘤率的影响，并以原位杂交和免疫组织化学方法检测绿茶对大鼠肺肿瘤组织p53和Bcl-2基因表达的影响。在此基础上，进一步采用原位杂交和免疫组织化学方法观察绿茶干预处理对肺内注射3，4-苯并芘油剂后第1周、第4周、第8周及第16周大鼠肺组织p53和Bcl-2基因表达的影响。结果：所有接受玉米油肺内注射的大鼠一年内均未发生肿瘤；皮下注射组局部恶性肿瘤发生率达100％，平均晚期肿瘤摘除时间为15.83周，中位时间为16周；苯并芘-玉米油肺内注射组大鼠一年内肺部恶性肿瘤发生率为70％左右，平均晚期肿瘤摘除时间为31.54周，中位时间为30周，苯并芘肺内注射较皮下注射更难以形成肿瘤。1％的绿茶使大鼠肺恶性肿瘤发生率下降为30％，绿茶干预组大鼠肺肿瘤组织p53表达上调、Bcl-2基因表达下调，且与对照组比较Bcl-2基因表达差异有统计学意义（P＜0.05）。肺内注射3，4-苯并芘油剂后第1周、第4周、第8周及第16周大鼠肺、支气管上皮细胞、粘膜下层细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞以及肺间质细胞等组织p53和Bcl-2基因均呈过量表达，但绿茶对苯并芘处理后大鼠各个时期肺组织的p53和Bcl-2基因表达均有影响，上调p53表达，下调Bcl-2表达，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：3，4-苯并芘油剂大鼠肺内注射是一种简便可靠的肺肿瘤模型构建方法。绿茶对苯并芘所致的肺恶性肿瘤具有明显的预防作用，上调p53和下调Bcl-2的表达是绿茶预防肺癌的重要机制。此外，肺自身具有较强的肿瘤防卫能力，绿茶很有可能通过另一种机制即通过调节肺“防卫细胞”的功能预防肺癌的发生。
徐艳[10]（2007）在《肺癌组织中TSG101、MDM2及P53联合检测的病理与临床意义》文中研究指明目的探讨TSG101、MDM2、P53蛋白表达与肺癌发生发展的关系。方法采用免疫组织化学方法检测临床71例肺癌组织标本中TSG101、MDM2及P53的表达，应用SPSS10.0软件对结果进行统计学分析。结果1、肺癌组中TSG101蛋白的低表达率为77.14％（54／70），MDM2蛋白的过表达率为88.41％（61／69），P53蛋白的总阳性率为44.12％（30／68）。2、P53-组中，TSG101和MDM2表达程度间成正相关（P=0.004），P53+组中，两者间无显着相关性。3、MDM2蛋白的过表达程度与组织学分级成正相关（P=0.001）；TSG101、P53的表达与之均无显着相关性；联合表达分析显示，P53-／MDM2+和TSG101-／MDM2+的组织学分级均相对较高（P=0.005、P=0.005）；MDM2蛋白的过表达程度与淋巴结转移与否成正相关（P=0.012）；TSG101、P53的表达与之均无显着相关性。结论1、TSG101表达下调与肺癌的发生有关。2、在肺癌组织中，存在P53、TSG101与MDM2相互作用环路。在P53没有突变的情况下，TSG101与MDM2的表达呈正相关关系；当P53突变时，这种关系消失。3、联合检测TSG101、MDM2和P53有助于判断肺癌的恶性程度。
二、肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析（论文提纲范文）
（1）人附睾分泌蛋白4（HE4）在肺癌恶性转化中的功能与作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略表 |
| 第一章 绪论 |
| 1 引言 |
| 1.1 肺癌 |
| 1.2 HE4 |
| 2 研究目的与意义 |
| 3 研究内容 |
| 4 技术路线 |
| 第二章 非小细胞肺癌细胞中HE4表达水平的检测 |
| 1 实验材料、试剂与仪器 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 试剂配制 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 蛋白样品的制备 |
| 2.2 Bradford法测蛋白质浓度 |
| 2.3 Western Blotting检测蛋白表达 |
| 2.4 TCGA数据库检索 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 不同类型肿瘤细胞系中HE4表达 |
| 3.2 HE4在肺腺癌中高表达 |
| 4 讨论 |
| 第三章 非小细胞肺癌细胞HE4的功能研究 |
| 1 实验材料与试剂 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 溶液配制 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 质粒扩增 |
| 2.1.1 TG1感受态细胞的制备 |
| 2.1.2 质粒转化与菌种保存 |
| 2.2 细胞的复苏、传代、分盘与冻存 |
| 2.3 慢病毒包装 |
| 2.4 慢病毒感染细胞 |
| 2.5 qRT-PCR |
| 2.6 细胞生长检测(MTT法) |
| 2.7 细胞周期检测 |
| 2.8 细胞凋亡检测 |
| 2.9 细胞划痕 |
| 2.10 克隆形成实验 |
| 2.11 细胞侵袭实验 |
| 2.12 统计分析方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 qRT-PCR检测HE4 敲低情况 |
| 3.2 shRNA敲低HE4 后检测HE4 蛋白表达 |
| 3.3 敲低HE4显着抑制肺癌细胞生长 |
| 3.4 敲低HE4抑制细胞增殖,阻滞细胞周期于G1期 |
| 3.5 敲低HE4显着抑制肺癌细胞克隆形成能力 |
| 3.6 敲低HE4抑制肺癌细胞迁移 |
| 3.7 敲低HE4抑制肺癌细胞侵袭 |
| 3.8 吉非替尼对瞬时敲低HE4的肺癌细胞生长的影响 |
| 4 讨论 |
| 第四章 HE4在肺癌恶性转化中的作用机理 |
| 1 实验材料与试剂 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 主要溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 q RT-PCR |
| 2.2 统计分析方法 |
| 2.3 免疫共沉淀(Co-IP) |
| 3 实验结果 |
| 3.1 敲低HE4后EGFR基因表达情况 |
| 3.2 敲低HE4 抑制EGFR下游信号通路 |
| 3.3 HE4与EGFR,p53 存在相互作用 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表论文 |
| 待投稿文章 |
| 致谢 |
（2）miR-339-5p在非小细胞肺癌中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表(以字母顺序排列) |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 miR-339-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 miR-339-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系生物学行为的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 miR-339-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)体内实验的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 BCL6作为miR-339-5p直接靶基因的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 miRNA在肺癌中作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（3）前列腺素D2合成酶在非小细胞肺癌中的表达及其作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 前列腺素D2合成酶在非小细胞肺癌中的表达及意义 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附：肺癌组织芯片样本信息 |
| 第二部分 过表达肺腺癌细胞PTGDS表达对细胞生物学行为的影响及机制研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）LKB1对p21WAF1/CIP1的调控及相关机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、LKB1在非小细胞肺癌中对p21~(WAF1/CIP1)的调控 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验细胞株及质粒 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器设备及用材 |
| 1.1.4 主要溶液及药品配制 |
| 1.1.5 方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 二、慢病毒载体构建稳定表达LKB1 shRNA的细胞系 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验质粒、菌株和细胞株 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要器材 |
| 2.1.4 主要溶液及药品配置 |
| 2.1.5 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 三、LKB1调节p21~(WAF1/CIP1)的机制的进一步探讨 |
| 3.1 .对像和方法 |
| 3.1.1 实验细胞和质粒 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要溶液及配置 |
| 3.1.4 方法 |
| 3.2 .结果 |
| 3.3 .讨论 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 LKB1/AMPK对p21~(WAF1/CIP1)调节的研究 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（5）基因多态性与吸烟交互作用致肺癌易感性的研究进展（论文提纲范文）
| 1 CYP 基因多态性与吸烟交互作用致肺癌易感性 |
| 1.1 CYP1A1 基因 Exon7 位点与吸烟交互作用致肺癌易感性 |
| 1.2 CYP1A1 基因 Msp1 位点与吸烟交互作用致肺癌易感性 |
| 1.3 CYP1A1 基因 Ile462Val 位点与吸烟交互作用致肺癌易感性 |
| 1.4 CYP2E1基因Rsa I /Pst I位点与吸烟交互作用致肺癌易感性 |
| 2 p53 基因与吸烟交互作用致肺癌易感性 |
| 3 Ras 基因家族 |
| 4 结论 |
（6）肺癌和食管癌外周血免疫调节因子及肿瘤相关抗原的自身抗体研究（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 肿瘤 |
| 1.1.1 肿瘤的流行病学现状 |
| 1.1.2 肿瘤的病因 |
| 1.1.3 肿瘤的诊断 |
| 1.1.4 肿瘤的治疗 |
| 1.2 肿瘤免疫 |
| 1.2.1 概述 |
| 1.2.2 免疫耐受与肿瘤发生 |
| 1.3 自身抗体 |
| 1.3.1 自身抗体的产生 |
| 1.3.2 自身抗体的分布 |
| 1.3.3 自身抗体的作用 |
| 1.3.4 自身抗体与免疫调节性 T 细胞的关系 |
| 1.3.5 肿瘤相关抗体 |
| 1.3.6 抗体的检测方法 |
| 1.4 抗原 |
| 1.4.1 抗原类型 |
| 1.4.2 抗原来源 |
| 1.4.3 多肽抗原设计 |
| 1.5 研究思路 |
| 1.5.1 立体依据 |
| 1.5.2 研究方法 |
| 1.5.3 研究目标 |
| 1.5.4 研究路线 |
| 第2章 实验方法 |
| 2.1 材料和仪器 |
| 2.1.1 实验样本 |
| 2.1.2 试剂与仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 抗原设计 |
| 2.3 抗体检测 |
| 2.3.1 试剂配制 |
| 2.3.2 操作过程 |
| 2.3.3 质控 |
| 2.3.4 数据分析 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 CD25(Interleukin-2 receptor subunit alpha，IL-2Rα) |
| 3.1.1 序列分析 |
| 3.1.2 MHC-Ⅱ识别 |
| 3.1.3 B 细胞表位预测 |
| 3.1.4 抗原性分析 |
| 3.1.5 抗体检测结果 |
| 3.2 FOXP3 |
| 3.2.1 抗原序列分析 |
| 3.2.2 MHC-Ⅱ识别 |
| 3.2.3 B 细胞表位预测 |
| 3.2.4 抗原性指标分析 |
| 3.2.5 抗体检测结果 |
| 3.3 P16 |
| 3.3.1 序列分析 |
| 3.3.2 MHC-Ⅱ识别 |
| 3.3.3 B 细胞表位预测 |
| 3.3.4 抗原性预测 |
| 3.3.5 抗体检测结果 |
| 3.4 CAGE |
| 3.4.1 序列分析 |
| 3.4.2 MHC-Ⅱ识别 |
| 3.4.3 B 细胞表位预测 |
| 3.4.4 抗原性分析 |
| 3.4.5 抗体检测结果 |
| 3.5 SOX-2 |
| 3.5.1 序列分析 |
| 3.5.2 MHC-Ⅱ识别 |
| 3.5.3 B 细胞表位预测 |
| 3.5.4 抗原性分析 |
| 3.5.5 抗体检测结果 |
| 3.6 TGF-β1 |
| 3.6.1 序列分析 |
| 3.6.2 MHC-Ⅱ识别 |
| 3.6.3 B 细胞表位预测 |
| 3.6.4 抗原性分析 |
| 3.6.5 抗体检测结果 |
| 3.7 TP53 |
| 3.7.1 序列分析 |
| 3.7.2 MHC-Ⅱ的识别 |
| 3.7.3 B 细胞表位预测 |
| 3.7.4 抗原性分析 |
| 3.7.5 抗体检测结果 |
| 3.8 相关性分析 |
| 3.8.1 anti-CD25 IgG 与其他抗体的相关性 |
| 3.8.2 anti-FOXP3 IgG 与其他抗体的相关性 |
| 3.8.3 anti- TGF-β1 IgG 与其他抗体的相关性 |
| 3.9 抗体合并预测值 |
| 3.9.1 NSCLC 的合并预测 |
| 3.9.2 ESCC 的合并预测 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 抗原多肽设计的基本原则 |
| 4.1.1 明确蛋白的结构和性质 |
| 4.1.2 免疫识别 |
| 4.1.3 识别区域的选择 |
| 4.1.4 连续的与不连续的识别区域 |
| 4.1.5 序列的长度 |
| 4.2 检测外周血抗体水平的临床意义 |
| 4.2.1 检测 anti-CD25 与 anti-Foxp3 抗体的意义 |
| 4.2.2 检测 anti-TGF-β1 抗体的意义 |
| 4.2.3 检测 anti-P16 抗体的意义 |
| 4.2.4 检测 anti-CAGE 抗体的意义 |
| 4.2.5 检测 anti-SOX2 抗体的意义 |
| 4.2.6 检测 anti-TP53 抗体的意义 |
| 4.3 研究存在不足 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（7）广西地区非小细胞肺癌中K-ras基因表达与突变的研究（论文提纲范文）
| 主要英文缩略词 中文摘要 英文摘要 前言 第一章 材料与方法 实验结果 第二章 材料与方法 实验结果 讨论 结论 参考文献 综述 参考文献 致谢 攻读硕士学位期间发表论文 |
（8）非小细胞肺癌分子标志物及其临床相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 标本 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 试剂 |
| 1.4 抗体 |
| 1.5 试剂的配制及使用 |
| 2 PCR 引物 |
| 3 方法 |
| 3.1 免疫组织化学方法 |
| 3.1.1 组织芯片制备 |
| 3.1.2 免疫组织化学具体步骤 |
| 3.1.3 免疫组织化学评价标准 |
| 3.1.4 免疫组化评价原则 |
| 3.1.5 免疫组织化学结果分析评判 |
| 3.2 基因突变分析方法 |
| 3.2.1 组织标本 DNA 的提取 |
| 3.2.2 PCR |
| 4 计算机分析软件 |
| 结果 |
| 1 非小细胞肺癌与预后相关的蛋白标志物筛选结果 |
| 1.1 uPA 蛋白在非小细胞肺癌中的表达打分表 |
| 1.2 ET-1 蛋白在非小细胞肺癌的表达打分表 |
| 1.3 uPA 及ET-1 蛋白在非小细胞肺癌表达统计结果 |
| 1.4 uPA 和ET-1 的表达联合检测与NSCLC 患者临床病理特征的相关性 |
| 1.5 uPA 和ET-1 及联合检测蛋白的表达与患者术后生存时间的关系 |
| 1.6 uPA 蛋白在非小细胞肺癌的免疫组化图 |
| 1.7 ET-1 蛋白在非小细胞肺癌的免疫组化图 |
| 2 非小细胞肺癌组织与手术切端组织差异表达蛋白筛选结果 |
| 2.1 P53 蛋白在非小细胞肺癌的表达情况 |
| 2.2 Ki67 蛋白在非小细胞肺癌的表达情况 |
| 2.3 EGFR 蛋白在非小细胞肺癌的表达情况 |
| 3 基因突变与非小细胞肺癌标志物筛选结果 |
| 讨论 |
| 1 非小细胞肺癌组织与手术切端组织差异表达蛋白筛选结果 |
| 2 非小细胞肺癌与预后相关的分子标志物筛 |
| 3 非小细胞肺癌标志物筛选后续工作 |
| 文献综述 肺癌分子标志物的研究进展 |
| 1 肿瘤标志物筛选思路及方法 |
| 1.1 基因组水平筛选的肺癌分子标志物 |
| 1.1.1 肺癌染色体的改变 |
| 1.1.2 基因的甲基化 |
| 1.1.3 癌基因的遗传改变 |
| 1.2 蛋白水平的肺癌分子标志物 |
| 1.2.1 当前已经应用临床的肺癌蛋白标志物 |
| 1.2.2 候选的肺癌蛋白标志物 |
| 2 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）苯并芘肺内注射诱发大鼠肺肿瘤及绿茶的预防作用机制初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 3,4-苯并芘肺内注射构建大鼠肺肿瘤模型的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二章 绿茶对苯并芘诱发大鼠肺肿瘤及p53、Bcl-2基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三章 绿茶对苯并芘所致大鼠肺损伤的保护作用及其机制初探 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 |
| 致谢 |
| 主要研究成果目录 |
（10）肺癌组织中TSG101、MDM2及P53联合检测的病理与临床意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 目录 |
| 1 前言 |
| 1.1 TSG101基因的相关研究 |
| 1.2 肺癌的发生机制仍处于研究阶段 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 样本及来源 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验流程 |
| 2.4 主要实验方法及过程 |
| 2.5 组织学分级及免疫组化结果判定 |
| 2.6 统计学分析方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 实验样本的相关临床病理参数 |
| 3.2 三种蛋白的免疫组化结果 |
| 3.3 相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 TSG101与肺癌的发生 |
| 4.2 肺癌组织中TSG101、MDM2、P53表达的相互关系 |
| 4.3 TSG101、MDM2、P53表达与肺癌临床病理资料分析 |
| 4.4 问题与展望 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 主要缩略词 |
| 在学期间发表的文章 |
| 致谢 |
四、肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析（论文参考文献）
- [1]人附睾分泌蛋白4（HE4）在肺癌恶性转化中的功能与作用机制[D]. 杨文瑜. 浙江理工大学, 2020(06)
- [2]miR-339-5p在非小细胞肺癌中的作用及机制研究[D]. 胡早秀. 昆明医科大学, 2019
- [3]前列腺素D2合成酶在非小细胞肺癌中的表达及其作用机制研究[D]. 贺利平. 武汉大学, 2017(01)
- [4]LKB1对p21WAF1/CIP1的调控及相关机制研究[D]. 肖平. 天津医科大学, 2015(05)
- [5]基因多态性与吸烟交互作用致肺癌易感性的研究进展[J]. 乌日汗,常福厚. 中南药学, 2015(03)
- [6]肺癌和食管癌外周血免疫调节因子及肿瘤相关抗原的自身抗体研究[D]. 关松磊. 吉林大学, 2013(08)
- [7]广西地区非小细胞肺癌中K-ras基因表达与突变的研究[D]. 钟炜祥. 广西医科大学, 2011(08)
- [8]非小细胞肺癌分子标志物及其临床相关性研究[D]. 蒋焱熠. 安徽师范大学, 2011(05)
- [9]苯并芘肺内注射诱发大鼠肺肿瘤及绿茶的预防作用机制初步研究[D]. 顾其华. 中南大学, 2007(01)
- [10]肺癌组织中TSG101、MDM2及P53联合检测的病理与临床意义[D]. 徐艳. 暨南大学, 2007(01)