一、细胞冷冻损伤机理的几个假说（论文文献综述）
倪沧皓[1]（2018）在《氢键协同弛豫对低温防护和血压调制的影响机理》文中提出对于生物体,糖是一种优异的低温防护剂,而盐与酸则对血压有调制作用。为了确定糖的低温防护效应和盐与酸对血压调制作用的机理,本论文基于水分子的中心对称四面体结构和氢键协同弛豫理论模型,利用拉曼光谱、傅里叶红外光谱和接触角测量等实验方法,结合差分声子计量谱学方法,通过探究糖、盐和酸三种溶质与水形成溶液时其内部溶质-溶剂相互作用,确定了三种溶液中O:H-O键的弛豫情况及其极化程度,本论文的具体研究内容如下:1)果糖、葡萄糖和海藻糖的加入都可以使溶液的冰点（TN）和熔点（Tm）降低。通过分析不同浓度糖溶液的拉曼光谱图,我们发现低频（ωL）和高频（ωH）都发生了红移,说明溶液中产生了分子极化作用和局域扭折作用,在两种作用下,O:H非键和H-O共价键同时键长伸长,键能变弱。ωL和ωH的红移共同造成了 TN和Tm的降低。同时糖溶液中H-O自由基悬键的减少和水合壳层的增加会有效的减缓分子运动,提高结构序,使溶液中的热涨落更小。TN的降低和更缓慢的溶液分子运动、更高的有序度、更小的热涨落都有效的阻止了冰晶的形成,起到了低温防护的作用。2)谷氨酸钠和氯化钠作为盐溶质,对O:H-O键产生了极化作用,使O:H非键伸长变弱,H-O共价键缩短变强。极化作用与溶质浓度呈正比关系。随着盐溶液浓度的增加,接触角也同时增加,这说明极化效应重排了水分子,提高了其表面张力和接触角。血液中过量的盐分所产生的极化效应最终会使血液结构更加有序,粘度更大,最终阻碍血液在血管中的流动而引起高血压。3)乙酸和抗坏血酸作为酸溶质,其溶质分子可以被视为可以产生分子极化的效果的偶极子,在分子极化的作用下,O:H非键伸长变弱,H-O共价键缩短变强,极化效应随着浓度的增加而逐渐饱和,这说明溶液中存在的溶质-溶质相互作用减少了酸分子与水分子之间的相互作用。随着酸溶液浓度的增加,接触角随之减小,这说明溶质-溶质相互作用弱化了分子极化,反氢键H←→和超氢键O:←→:O所具有的排斥力导致了氢键网络的脆化和碎片化,使得溶液中的退极化效应占据了主导地位,降低了其接触角和表面张力。摄入醋和维生素C后血液中产生退极化效应降低了血液的结构有序度和粘度,使血液在血管中的流动更加顺畅,从而起到降血压的作用。
马亚红,钟力生,胡慧玉,刘琳[2]（2012）在《交变电场作用下离子碰撞对NaCl溶液冰晶结构的影响》文中认为为了探索电场在生物材料低温保存中的作用机理,以质量分数0.9%NaCl溶液作为研究模型,将其置于低温环境中冷冻,同时施加交变电场干扰（Up-p=20 V,f=1 MHz）,通过电路测量不同频率点下电场干扰试样的电参数,并与对照组进行比较;建立了"离子碰撞"假说,对实验结果进行了解释分析。结果发现,交变电场干扰的溶液冻结后对外呈现的导电特性发生了很大的变化。由此分析得出,在外加交变电场的影响下,生理盐水在慢速冷冻过程中冰晶的组成结构发生了改变。
李洪蕾[3]（2011）在《神经干细胞低温保存的传质渗透特性研究》文中研究指明超低温冷冻保存神经干细胞（Neural Stem Cells, NSCs）对神经系统退行性疾病和组织损伤等疾病的临床治疗具有十分重要的意义。本文对神经干细胞的体外培养进行研究,通过细胞形态学观察、台盼蓝染色法、Hochest/PI荧光双重染色法及生长曲线的测定。证明了所培养的细胞具有增殖能力等神经干细胞的主要特性,保证了实验材料的生物活性,为后续实验提供充足的细胞来源。通过渗透压技术对冷冻保护剂（cryoprotective agent, CPA）的浓度进行实验测定。本文选取了两种冷冻保护剂,考察了冷冻保护剂种类、浓度、细胞密度等因素对神经干细胞的影响。实验结果表明,渗透压法是一种既简洁又准确的表征溶液中主要溶质浓度的方法；冷冻保护剂在导入过程中造成的细胞损伤主要为渗透损伤和毒性损伤,受二者共同作用存在冷冻保护剂最佳导入时间和最优导入方案。采用显微图像采集分析的方法,以氯化钠为神经干细胞的非渗透性溶质,成功获得悬浮神经干细胞渗透不变体积比为0.391。最后,分别应用K-K模型和经典两参数模型来表征CPA和水在神经干细胞中一维输运的物理过程。确定保护剂二甲基亚砜（DMSO）和乙二醇（EG）导入神经干细胞时的三个渗透参数Lp（水的胞膜渗透率）、ω（保护剂的胞膜渗透率）、σ（反射系数）值。结果分别为：K-K模型DMSO：Lp=0.172μm/minatm, co=8.980×10-2μm/s,σ=0.92; EG:Lp=0.198μm/min atm, co=7.880×10-2μm/s, a=0.90;2-P模型DMSO:Lp=0.168μm/min atm,ω=9.081×10-2μm/s; EG:Lp=0.174μm/min atm,ω=8.009×10-2μm/s。为进一步优化冷冻保护剂在神经干细胞中的导入和洗脱方案提供参考。
张蕾[4]（2009）在《玻璃化冷冻对脐血造血干/祖细胞活率与生物学特征的影响及导入平衡时间的设计》文中研究说明脐血是造血干/祖细胞的一个重要来源,可用于临床移植来恢复患者的髓系造血功能。脐血采集后至进入临床应用前,需要优良的冷冻技术来保持造血干细胞的活性与特征。目前,除了传统的慢速冻存法外,玻璃化法逐渐成为一种颇具应用前景的低温保存技术,而良好的干细胞低温保存方案不仅要保证一定的细胞活率,同时要维持干细胞的增殖及分化能力。本实验室在前期的研究中筛选出联合玻璃化保护剂配方,并对脐血来源的造血干/祖细胞进行了低温保存。为了评价该玻璃化冷冻方案的效果,本文首先用台盼蓝拒染法检测冻后细胞活率,并用流式细胞术测定CD34+细胞的百分含量,再对冻后的细胞进行短期的静态培养和长期的集落培养,综合考查冻后细胞的回收率与生物学特征。其次,由于导入过程是细胞发生损伤的主要环节,继而又对导入过程平衡时间进行了优化设计。实验方法主要采用显微摄像系统拍摄细胞照片,对导入过程不同时刻的细胞体积进行统计分析,并结合细胞活率的测定,确定适宜的导入平衡时间。结果表明:玻璃化冷冻复苏后,单个有核细胞平均回收率可达到81.5±1.7%,而传统的慢速冻存法,单个有核细胞回收率仅为74.7±2.6%,两者存在显着性差异。慢速冻存组CD34+细胞的回收率为52.3%,略高于玻璃化冻存组49.7%,但两者无显着性差异。虽然,CD34+细胞的回收率无显着差异。原代细胞,玻璃化冻后细胞和慢速冷冻后细胞在72小时内的生长状态良好,扩增倍数分别为2.7,2.3和1.9倍。各组细胞进行14天集落培养,均可形成典型的BFU-E,CFU-GM和CFU-GEMM集落,各实验组无显着性差异,玻璃化冻存组的集落回收率可达到90%以上。优化前导入平衡时间为等时间间隔,即每步导入之间均为90s,总时间为450s。细胞的体积皱缩到初始体积的35%以下,并无法有效恢复。细胞活率为88.1±3.0%。优化设计的平衡时间为前短后长的非等平衡时间间隔,即180s,180s,90s,90s和60s,总时间为600s。细胞的体积恢复至初始体积的63%,细胞活率为95.4+0.4%,具有显着提高。采用联合玻璃化保护剂对脐血造血干/祖细胞进行玻璃化冷冻保存,可以得到较高的细胞回收率,且成活细胞的功能性保持完好。对导入平衡时间进行优化设计,提出前长后短的非等时间间隔,有效地减少了导入过程细胞损失的情况。
于小川[5]（2009）在《冷冻保护剂低温连续导入方法及神经干细胞冻存的研究》文中提出神经干细胞（NSCs）因其移植后不具有致癌性等优点,已成为治疗神经系统退行性疾病和神经系统损伤的最优选择。为了更有效地利用神经干细胞,建立神经干细胞库,神经干细胞的低温保存技术受到了广泛的关注。目前,低温保存神经干细胞主要采用的是慢速冻存,但是这种方法的冻存效果以及冻存技术还有需要提高和完善的地方。玻璃化法作为一种新型的、简便的低温保存方法可以有效地克服慢速冻存的缺点,但是玻璃化法需要高浓度的保护剂（CPA）才能实现,保护剂导入导出过程会给细胞带来很大的渗透损伤和毒性损伤。本文对自主研发的升降式程序降温仪的关键单元的调试基础上,完善了具有低温处置、连续导入和连续降温等多功能的升降式程序降温仪,并对神经干细胞低温连续导入过程进行较为系统的实验研究。论文校验了低温热电偶,测试了冷冻容器内的保温性能,测试了冷冻容器内部径向温度分布,通过加装套筒减小容器直径,使容器内部不同高度的径向温度分布达到了设计要求。自主研发的升降式程序降温仪无论在控温精度和控温速率均满足实验要求。对神经干细胞单细胞悬液的联合玻璃化保护剂的低温连续导入及分步洗脱过程进行了研究。通过试验考察了平衡时间,连续降温速率和最佳导入速率等参数对神经干细胞单细胞悬液活性的影响。实验结果表明,在初始温度为-5℃,总接触时间为5min时,神经干细胞最佳降温速率率5℃/min,最佳导入速率为0.53ml/min。最后综合各种参数的影响,筛选出最优低温连续导入方案,即在降温速率为5℃/min,导入速率为0.53ml/min,初始温度为-5℃条件下,每步导入CPA体积为62μl,83μl,122μl,190μl,343μl;每步导入后对应的平衡时间为62s,52s,42s,32s,22s,能够保证神经干细胞活率为90.5%。
杨成,郭红延,顾晓明[6]（2008）在《肌肉组织工程的基础研究-肌肉冻伤模型的建立》文中认为目的为研究卫星细胞在表情肌修复中的作用,需要建立动物模型。本实验通过冷冻的原理建立肌肉冻伤模型,并研究该模型在肌肉组织工程研究中的可行性。方法取18只8周龄C57小鼠随机分6组,采用液氮冷冻头冷冻腓肠肌的中下部分,每次40s,通过2个冻融周期,建立C57小鼠腓肠肌的冻伤模型。分别于3天,1、2、4、6、8周取材,通过采用苏木精-伊红染色观察骨骼肌受冻伤后肌组织病理变化,研究肌肉在冻伤下的自我修复能力和冻伤后组织学变化,确定植入卫星细胞的最佳时机。结果实验证实冷冻条件下可以造成肌肉的完全性损坏,4周后肌肉的原有结构完全消失,8周后表现为均质的变性,没有再生现象。24周是移植细胞的最佳时机。结论冻伤后骨骼肌内未发生自体的修复,并且保留了肌肉原有的肌膜样结构,有利于研究植入卫星细胞的生物学活性,可以作为肌肉细胞移植的模型。
李一鸣[7]（2008）在《脐血干细胞玻璃化保存过程的研究》文中进行了进一步梳理脐血中含有丰富的造血干细胞,可以治疗白血病、恶性肿瘤、重型地中海贫血等多种疾病。脐带血中造血干细胞占有的比例甚至超过成人骨髓,是继骨髓和外周血之后新近发现的造血干细胞的又一来源。目前,脐血造血干细胞的低温保存主要采用的是慢速冻存方法,但是这种方法的冻存效果以及冻存技术还有需要提高和完善的地方。玻璃化法作为一种新型的、简便的低温保存方法可以有效地克服慢速冻存的缺点,但是玻璃化法需要高浓度的保护剂才能实现,这会给细胞带来很大的渗透损伤和毒性损伤。本文对联合玻璃化保护剂的特性,联合玻璃化保护剂的导入、洗脱程序以及脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程及其后期培养等方面的问题进行了系统的研究。首先对联合玻璃化保护剂的特性进行了研究。本实验所采用的联合玻璃化保护剂的组成为:25%DMSO、17%甲酰胺、10%1,2-丙二醇和6%聚乙二醇（w/v）。通过稀释的方法测定了不同浓度的联合玻璃化保护剂的渗透压值。通过冷台观察发现当降温速率低于30℃/min时,保护剂不能实现玻璃化。提高复温速率能够有效地缩短反玻璃化时间。其次对脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂的连续导入及分步洗脱过程进行了研究。通过采用分别在室温（20℃）与低温（1.5℃）下,不同导入时间的方法连续导入保护剂,并采用分五步,每步之间平衡60s的方法对保护剂进行洗脱。实验结果表明,在低温下,导入后细胞的活率高于室温导入,而最佳的导入时间为60s。洗脱后,细胞活率的分布情况与导入后基本一致,并且洗脱过程所造成的细胞损失相对较小。最后对脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程及其后期培养进行了研究。实验研究了降复温操作方法对细胞活率的影响,并与导入、洗脱过程进行比较。通过对洗脱保护剂后的细胞进行4天培养,全面观察了玻璃化保存过程后细胞的生长情况。结果表明,当前采用的玻璃化低温保存程序是一套简单有效的方法,可以满足实验要求。通过对细胞的后期培养,进一步证明60s为保护剂连续导入最佳时间。并且,导入温度对细胞的后期培养并无影响。
高志新[8]（2008）在《胶原包埋神经干细胞低温保存技术的研究》文中指出神经干细胞的低温保存对临床医学的细胞移植以及建立干细胞库有着极为重要的意义。本课题是在选用传统慢速冻存方法的同时将细胞包埋入鼠尾Ⅰ型胶原中,建立新型的冷冻体系。实验中采用单一的DMSO溶液作为冷冻保护剂并考察了不同浓度的DMSO导入过程中体系外部溶液主体浓度的变化,从而推算出胶原-细胞体系内部的DMSO平均浓度,进而确定最优的冷冻保护剂浓度以及胶原浓度。实验中选取的胶原浓度分别为0.5mg/ml,1.0mg/ml和1.5mg/ml,DMSO浓度分别为15%（v/v）,20%（v/v）和25%（v/v）。根据体系外部冷冻保护剂的浓度变化确定保护剂的平衡时间,并通过物质守恒方程推算出体系内部冷冻保护剂平均浓度在8%～15%（v/v）之间的实验组进行慢冻保存。本文同时考察了降温速率对细胞复苏状态的影响。文中选取了1℃/min、3.4℃/min和18.6℃/min三个降温速率对神经干细胞进行低温保存,并进行冷冻复苏后0h和24h的细胞活率比较、流式细胞凋亡检测和ATPase活力检测以及复苏细胞的诱导分化和免疫组化（Nestin,βtubulinⅢ,GFAP及RIP）检测。实验结果表明神经干细胞在胶原层中状态良好,通过物质守恒方程筛选胶原系统内部冷冻保护剂浓度适宜神经干细胞低温保存的实验条件。胶原体系冷冻保护剂平衡时间要远大于细胞悬液的平衡时间,起到了缓渗的作用。对6组实验条件进行慢速冷冻保存,用胶原包埋的神经干细胞复苏后活率明显高于其他单纯的细胞悬液的冷冻保存,1℃/min和3.4℃/min的降温速率均可以达到较高的细胞复苏率。其中1.5mg/ml胶原+20%DMSO条件下冻存复苏后可得到88.5%的活率。从复苏后细胞的凋亡状态来看,采用胶原包埋的方法冷冻复苏后健康细胞在78.5%～86.7%,有5%左右的细胞进入早期和晚期凋亡。传统的方法健康细胞仅为38.5%,而且大多数细胞进入凋亡期。胶原包埋方法复苏细胞的ATP酶活性高于传统冷冻方法。经过免疫组化的检测,复苏后的细胞为Nestin阳性细胞,保持了良好的干细胞性能,其可分化为神经元（βtubulinⅢ阳性）,星形胶质细胞（GFAP阳性）,少突胶质细胞（RIP阳性）细胞。
潘广生[9]（2007）在《工程骨低温保存中CPA的导入过程研究》文中提出低温保存技术是一种长时间保存细胞和组织的有效方法，在许多领域都得到了广泛的应用。而临床医学的发展和需求，使得工程组织和生物活体器官的低温保存成为当今生物医学工程研究的最前沿课题。目前在全球进行的移植手术中，骨移植的数量仅次于输血居第二位。若能将低温保存技术成功应用于保存治疗大体积骨缺损所需的组织工程骨，则可使骨缺损的临床治疗更加便利，大大减轻病人的痛苦和损失。因此，组织工程骨的超低温保存有着辉煌的发展前景和广泛的应用价值。本文首先对来自Sprague-Dawley（SD）大鼠颅盖骨的细胞进行了原代和传代培养，并对其形态学及特异性等生物学性能进行了检测，确定所培养的细胞是成骨细胞，并通过纯化确保没有其他细胞的污染，为后续的实验提供数量充足的骨组织工程种子细胞，也为实验的准确性和可重复性提供了保证。接着，应用显微摄像技术测定细胞的体积变化，实验确定了成骨细胞的渗透不变体积比为0.261，实验回归确定了成骨细胞对于DMSO的K-K模型渗透参数为：Lp=1.8×10-13m3·N-1·s-1；ω=8.5×10-11mol·N-1·s-1；σ=1.5。利用实验得到的K-K模型的参数，对成骨细胞的DMSO导入过程细胞体积的变化进行模拟优化，研究了导入过程对细胞损伤的机制和控制方法。结果表明，低浓度保护剂导入过程体积损伤和渗透损伤很小，可以采用一步导入法。高浓度保护剂导入，分步导入和连续梯度导入皆优于一步导入，都能显着减轻保护剂导入过程对细胞造成的体积损伤和渗透损伤；而分步导入又以四步较好；连续梯度导入可采用线性梯度和S型曲线梯度导入方式。最后，利用FLUENT软件对灌注系统灌注时支架内部的受力和流场分布情况进行了模拟分析，提出了灌注时不对细胞造成机械损伤的中部空隙灌注模式。
刘铭彦[10]（2007）在《玻璃化法低温保存脐血造血干细胞的研究》文中进行了进一步梳理脐血中含有丰富的造血干细胞，是继骨髓和外周血之后新近发现的造血干细胞的又一来源。为了更有效地利用脐血造血干细胞，脐血造血干细胞的低温保存便成为一个重要的课题。目前，脐血造血干细胞的低温保存主要采用的是慢速冻存方法，但是这种方法的冻存效果以及冻存技术还有需要提高和完善的地方；玻璃化法作为一种新型的、简便的低温保存方法可以有效地克服慢速冻存的缺点，但是玻璃化法需要高浓度的保护剂才能实现，这会给细胞带来很大的渗透损伤和毒性损伤。本文对联合玻璃化保护剂的特性，联合玻璃化保护剂的导入、洗脱程序以及脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程等方面的问题进行了较为系统的研究。首先对联合玻璃化保护剂的特性进行了研究。联合玻璃化保护剂的组成为：25％DMSO、17％甲酰胺、10％1，2-丙二醇和6％聚乙二醇（w／v）。通过稀释的方法测定了不同浓度的联合玻璃化保护剂的渗透压值。通过冷台观察发现当降温速率低于30℃／min时，保护剂不能实现玻璃化。提高复温速率能够有效地减少反玻璃化过程中冰晶的数量，抑制冰晶的生长。同时经实验确定，采用一步导入方法进行保护剂导入时会对造血干细胞造成严重的渗透损伤和毒性损伤。其次对脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂的导入洗脱过程进行了优化。通过采用分五步、不同平衡时间的方法对导入洗脱过程进行优化，同时考察在洗脱过程中添加不同浓度的海藻糖对洗脱效果的影响。实验结果表明：五步导入每步之间平衡90s和五步洗脱每步之间平衡60s得到了最佳的造血干细胞活率。在洗脱过程中添加0.5M海藻糖能够有效地提高造血干细胞活率。最后对脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程进行了研究。考察了降、复温速率对玻璃化后造血干细胞活率的影响。同时对造血干细胞的玻璃化低温保存和慢速冻存进行了比较分析。实验结果表明：提高降、复温速率都能有效地提高玻璃化后的造血干细胞活率。玻璃化后的造血干细胞活率高于慢速冻存后的造血干细胞活率。
二、细胞冷冻损伤机理的几个假说（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、细胞冷冻损伤机理的几个假说（论文提纲范文）
（1）氢键协同弛豫对低温防护和血压调制的影响机理（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 水简介 |
| 1.2 低温防护简介 |
| 1.2.1 低温防护 |
| 1.2.2 低温损伤 |
| 1.2.3 低温防护剂 |
| 1.2.4 糖作为低温防护剂的研究现状 |
| 1.3 日常摄入的盐和酸对血压的调控 |
| 1.3.1 高血压的影响与预防 |
| 1.3.2 盐和酸对血压'调控的研究现状 |
| 1.4 拉曼光谱、红外光谱和表面张力 |
| 1.4.1 拉曼光谱 |
| 1.4.2 红外光谱 |
| 1.4.3 表面张力 |
| 1.5 本论文的选题依据和主要内容 |
| 1.5.1 本论文的选题依据 |
| 1.5.2 本论文的主要内容 |
| 第2章 理论模型和实验方法 |
| 2.1 基本原理 |
| 2.1.1 水的基本结构和氢键 |
| 2.1.2 氢键协同弛豫 |
| 2.1.3 准固态相边界的迁移效应 |
| 2.2 理论建模 |
| 2.2.1 糖分子与水分子的相互作用 |
| 2.2.2 盐离子与水分子的相互作用 |
| 2.2.3 酸分子与水分子的相互作用 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验仪器与设备 |
| 2.3.2 溶液样品制备 |
| 2.3.3 实验数据采集 |
| 2.4 差分声子计量谱 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 三种糖溶液的低温防护作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 三种糖溶液的拉曼光谱与温度的关系 |
| 3.3 三种糖溶液的拉曼光谱与浓度的关系 |
| 3.4 拉曼光谱表征糖溶质对冰点的调制作用 |
| 3.5 拉曼光谱表征糖溶质对熔点的调制作用 |
| 3.6 三种糖溶液的低温防护机理 |
| 3.7 本章小结 |
| 第4章 味精(C_5H_8NNaO_4)和食盐(NaCl)的血压调制作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 C_5H_8NNaO_4和NaCl溶液拉曼光谱与浓度的关系 |
| 4.3 C_5H_8NNaO_4和NaCl溶液红外光谱与浓度的关系 |
| 4.4 C_5H_8NNaO_4和NaCl溶液对表面张力的调制作用 |
| 4.5 C_5H_8NNaO_4和NaCl对血压的调制作用 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 乙酸(C_2H_4O_2)和抗坏血酸(C_6H_8O_6)的血压调制作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 C_2H_4O_2和C_6H_8O_6溶液拉曼光谱与浓度的关系 |
| 5.3 C_2H_4O_2和C_6H_8O_6溶液红外光谱与浓度的关系 |
| 5.4 C_2H_4O_2和C_6H_8O_6溶液对表面张力的调制作用 |
| 5.5 C_2H_4O_2和C_6H_8O_6对血压的调制作用 |
| 5.6 本章小结 |
| 第6章 总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 工作展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历与攻读硕士期间发表的学术论文 |
（2）交变电场作用下离子碰撞对NaCl溶液冰晶结构的影响（论文提纲范文）
| 1 引 言 |
| 2 实验部分 |
| 2.1 实验准备 |
| 2.2 测量方法 |
| 2.3 实验过程 |
| 3 结果及分析 |
| 3.1 实验结果 |
| 3.2 机理分析 |
| 4 结 论 |
（3）神经干细胞低温保存的传质渗透特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 神经干细胞的定义 |
| 1.2 神经干细胞的生物学特征 |
| 1.3 神经干细胞的应用 |
| 1.4 低温保存 |
| 1.4.1 低温保存技术发展史 |
| 1.4.2 低温损伤原理 |
| 1.4.3 低温冷冻保存方法 |
| 1.4.4 低温冷冻保护剂 |
| 1.5 玻璃化技术 |
| 1.5.1 实现玻璃化的途径 |
| 1.5.2 玻璃化法的步骤 |
| 1.6 神经干细胞的低温保存 |
| 1.7 本文工作思路及主要内容 |
| 2 神经干细胞的培养 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验药品与装置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 培养基的配制 |
| 2.2.2 神经干细胞的传代培养 |
| 2.2.3 细胞计数 |
| 2.2.4 神经干细胞生长曲线的测定 |
| 2.2.5 神经干细胞的死活鉴定 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 神经干细胞的传代培养 |
| 2.3.2 神经干细胞生长曲线的测定 |
| 2.3.3 神经干细胞完整性及活性鉴定 |
| 2.4 小结 |
| 3 实验测定保护剂导入过程的渗透特性 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验药品和装置 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 渗透压法 |
| 3.3.2 实验过程及步骤 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 DMSO浓度对导入过程的影响 |
| 3.4.2 乙二醇浓度对导入过程的影响 |
| 3.4.3 两种保护剂的对比 |
| 3.5 小结 |
| 4 神经干细胞渗透不变体积的测定 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 Boyle-Van't Hoff关系式 |
| 4.3 细胞渗透不变体积的实验测定 |
| 4.3.1 实验仪器设备 |
| 4.3.2 实验材料 |
| 4.3.3 实验操作过程 |
| 4.3.4 实验结果与讨论 |
| 4.4 小结 |
| 5 模型参数的回归 |
| 5.1 概述 |
| 5.2 K-K模型与两参数模型 |
| 5.3 渗透参数的实验测定 |
| 5.3.1 实验仪器装置 |
| 5.3.2 实验材料 |
| 5.3.3 实验操作步骤 |
| 5.3.4 实验结果与讨论 |
| 5.4 模型参数的回归 |
| 5.4.1 细胞体积变化的计算 |
| 5.4.2 参数回归 |
| 参考文献 |
| 附录A K-K模型计算程序 |
| 附录B 2-P模型计算程序 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（4）玻璃化冷冻对脐血造血干/祖细胞活率与生物学特征的影响及导入平衡时间的设计（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 脐血造血干/祖细胞 |
| 1.1.1 造血干/祖细胞的定义 |
| 1.1.2 造血干/祖细胞的生物学特征 |
| 1.1.3 脐血造血干/祖细胞的特点和应用 |
| 1.2 低温保存 |
| 1.2.1 低温保存技术的发展 |
| 1.2.2 低温损伤机理及其假说 |
| 1.2.3 冷冻保护剂 |
| 1.2.4 玻璃化技术 |
| 1.2.5 造血干细胞的低温保存 |
| 1.2.6 本文工作思路及主要内容 |
| 2 脐血来源的造血干/祖细胞分离 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 脐血来源 |
| 2.1.2 实验药品与装置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验试剂配制 |
| 2.2.2 造血干/祖细胞的分离 |
| 2.2.3 台盼蓝拒染法检测细胞活率 |
| 2.2.4 单个有核细胞短期静态培养 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 3 玻璃化冷冻对造血干/祖细胞的活率和生物学特征的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 细胞来源 |
| 3.1.2 实验仪器与药品 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 台盼蓝拒染法检测细胞活率 |
| 3.2.2 检测玻璃化冷冻过程各操作后的细胞活率 |
| 3.2.3 流式细胞术检测CD34~+细胞数目 |
| 3.2.4 冷冻复苏后细胞生长曲线的测定 |
| 3.2.5 集落培养 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 玻璃化冷冻后单个有核细胞的回收率 |
| 3.3.2 玻璃化冷冻过程各操作环节后单个有核细胞的回收率 |
| 3.3.3 玻璃化冷冻后CD34~+细胞的回收率 |
| 3.3.4 冷冻复苏后细胞的生长曲线 |
| 3.3.5 玻璃化冷冻后造血干/祖细胞的集落形成能力 |
| 4 玻璃化冷冻方案导入过程中细胞体积的皱缩与恢复 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 联合玻璃化保护剂的配制 |
| 4.2.2 联合玻璃化保护剂渗透压的测定 |
| 4.2.3 单个有核细胞原始体积的测定 |
| 4.2.4 保护剂导入过程不同时间细胞的体积测定 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 联合玻璃化保护剂的渗透压 |
| 4.3.2 单个有核细胞原始体积 |
| 4.3.3 平衡时间为90s的分步导入过程中细胞体积变化 |
| 5 导入过程平衡时间的优化设计 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 第一步导入联合玻璃化保护剂后细胞体积变化的测定 |
| 5.2.2 第一步导入联合玻璃化保护剂后细胞活率的检测 |
| 5.2.3 第二步导入联合玻璃化保护剂后细胞体积变化的测定 |
| 5.2.4 第二步导入联合玻璃化保护剂后细胞活率的检测 |
| 5.2.5 后续的导入过程研究 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 第一步导入平衡时间的确定 |
| 5.3.2 第二步导入平衡时间的确定 |
| 5.3.3 第三步导入平衡时间的确定 |
| 5.3.4 第四步导入平衡时间的确定 |
| 5.3.5 第五步导入平衡时间的确定 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A 单个有核细胞尺寸统计 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（5）冷冻保护剂低温连续导入方法及神经干细胞冻存的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 低温保存技术的概述 |
| 1.2 低温冷冻保存的方法 |
| 1.2.1 慢速冻存法 |
| 1.2.2 玻璃化保存法 |
| 1.3 低温冷冻保护剂 |
| 1.4 低温损伤机理及假说 |
| 1.5 渗透压 |
| 1.6 神经干细胞的低温保存 |
| 1.6.1 神经干细胞概述 |
| 1.6.2 低温保存神经干细胞及其需要解决的问题 |
| 1.7 神经干细胞的收集、培养 |
| 1.8 神经干细胞的观察及其冻存后的鉴定 |
| 1.8.1 低温保存前的细胞观察 |
| 1.8.2 细胞复苏后的鉴定 |
| 1.9 小结 |
| 2 神经干细胞的原代、传代培养 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验药品及试剂 |
| 2.2.3 实验装置 |
| 2.2.4 实验试剂及其配制方法 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 神经干细胞的原代、传代培养 |
| 2.3.2 神经干细胞生长曲线的测定 |
| 2.3.3 神经干细胞免疫组织化学鉴定 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 神经干细胞的原代、传代培养 |
| 2.4.2 神经干细胞的生长曲线 |
| 2.4.3 神经干细胞的免疫组织化学鉴定 |
| 2.5 小结 |
| 3 升降式程序降温仪 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 实验设备 |
| 3.2.1 升降式程序降温仪 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 热电偶校正实验 |
| 3.3.2 液氮容器内径向温度场分布实验 |
| 3.3.3 程序降温仪的保温性能实验 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 热电偶的校正 |
| 3.4.2 对比不同深度加装套筒前后降温仪的径向温度场 |
| 3.4.3 程序降温仪的保温性能 |
| 3.5 小结 |
| 4 神经干细胞单细胞悬液低温连续导入过程的研究 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验药品和试剂 |
| 4.2.2 实验仪器装置 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 联合保护剂的配制 |
| 4.3.2 恒定温度下的最佳导入时间的确定 |
| 4.3.3 恒定在不同温度下的连续导入 |
| 4.3.4 不同降温速率的连续导入 |
| 4.3.5 相同降温速率不同导入终了平衡时间的连续导入 |
| 4.3.6 联合保护剂渗透压测定 |
| 4.3.7 分步连续导入的设计和优化 |
| 4.3.8 不同温度的分步连续导入 |
| 4.3.9 不同降温速率的分步连续导入 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 恒定温度下的最佳导入时间的确定 |
| 4.4.2 恒定在不同温度下的连续导入 |
| 4.4.3 不同降温速率的连续导入 |
| 4.4.4 相同降温速率不同导入终了平衡时间的连续导入 |
| 4.4.5 CPA渗透压标准曲线 |
| 4.4.6 分步连续导入的设计和优化 |
| 4.4.7 不同温度的分步连续导入 |
| 4.4.8 不同降温速率的分步连续导入 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（6）肌肉组织工程的基础研究-肌肉冻伤模型的建立（论文提纲范文）
| 资料和方法 |
| 结 果 |
| 1.大体观察: |
| 2.组织学观察: |
| 讨 论 |
| 1.用于肌卫星细胞移植肌肉损伤模型的要求: |
| 2.冷冻原理: |
| 3.肌肉冻伤模型: |
（7）脐血干细胞玻璃化保存过程的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 低温保存概述 |
| 1.2 低温冷冻保存的方法 |
| 1.2.1 慢速冻存法 |
| 1.2.2 玻璃化冻存法 |
| 1.3 低温损伤机理及其假说 |
| 1.4 冷冻保护剂及其保护机理 |
| 1.4.1 冷冻保护剂概述 |
| 1.4.2 渗透性冷冻保护剂 |
| 1.4.3 非渗透性冷冻保护剂 |
| 1.4.4 新型冷冻保护剂:抗冻蛋白 |
| 1.5 玻璃化的实现 |
| 1.5.1 冷冻保护剂导入阶段 |
| 1.5.2 降温复温阶段 |
| 1.5.3 冷冻保护剂洗脱阶段 |
| 1.5.4 低温断裂及反玻璃化 |
| 1.6 渗透压 |
| 1.7 脐血及脐血造血干细胞的低温保存 |
| 1.7.1 脐血及脐血造血干细胞概述 |
| 1.7.2 脐血及脐血造血干细胞的临床应用 |
| 1.7.3 脐血的采集及保存 |
| 1.7.4 脐血造血干细胞的分离及低温保存 |
| 1.8 小结 |
| 2 脐血的采集及造血干细胞的分离和培养 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 脐血来源 |
| 2.2.2 实验装置 |
| 2.2.3 实验药品及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验试剂的配制 |
| 2.3.2 细胞计数法 |
| 2.3.3 脐血的采集 |
| 2.3.4 造血干细胞的分离和原代培养 |
| 2.3.4 脐血造血干细胞的传代培养 |
| 2.4 小结 |
| 3 脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂特性的研究 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验装置 |
| 3.2.2 实验药品及试剂 |
| 3.2.3 联合玻璃化保护剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 联合玻璃化保护剂渗透压值的测定 |
| 3.3.2 降温速率对联合玻璃化保护剂玻璃化形成能力影响的研究 |
| 3.3.3 复温速率对联合玻璃化保护剂反玻璃化时间影响的研究 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 联合玻璃化保护剂的渗透压值 |
| 3.4.2 降温速率对联合玻璃化保护剂玻璃化形成能力的影响 |
| 3.4.3 复温速率对联合玻璃化保护剂反玻璃化时间的影响 |
| 3.5 小结 |
| 4 脐血造血干细胞玻璃化保护剂连续导入过程及分步洗脱过程的研究 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验装置 |
| 4.2.2 实验药品及试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 联合玻璃化保护剂连续导入时间范围的初步确定 |
| 4.3.2 联合玻璃化保护剂连续导入最佳时间的确定及常温与低温导入效果的对比实验 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 联合玻璃化保护剂连续导入时间范围的初步确定 |
| 4.4.2 联合玻璃化保护剂连续导入最佳时间的确定及常温与低温导入效果的对比实验 |
| 4.5 小结 |
| 5 脐血造血干细胞玻璃化低温保存及后期培养 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验装置 |
| 5.2.2 实验药品及试剂 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 脐血造血干细胞的玻璃化低温保存 |
| 5.3.2 脐血造血干细胞玻璃化保存的后期培养 |
| 5.4 实验结果与讨论 |
| 5.4.1 脐血造血干细胞的玻璃化低温保存 |
| 5.4.2 脐血造血干细胞玻璃化保存的后期培养 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A 英文缩略语 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（8）胶原包埋神经干细胞低温保存技术的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 低温保存技术的概述 |
| 1.2 低温冷冻保存的方法 |
| 1.2.1 慢速冻存法 |
| 1.2.2 玻璃化保存法 |
| 1.3 低温冷冻保护剂 |
| 1.4 低温损伤机理及假说 |
| 1.5 神经干细胞的低温保存 |
| 1.5.1 神经干细胞概述 |
| 1.5.2 低温保存神经干细胞及其需要解决的问题 |
| 1.5.3 胶原蛋白的概述及其在低温保存中的应用 |
| 1.6 神经干细胞的收集、培养 |
| 1.7 神经干细胞的观察及其冻存后的鉴定 |
| 1.7.1 低温保存前的细胞观察 |
| 1.7.2 细胞复苏后的鉴定 |
| 1.8 小结 |
| 2 神经干细胞的原代、传代培养 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验药品及试剂 |
| 2.2.2 实验动物 |
| 2.2.3 实验装置 |
| 2.2.4 实验试剂及其配制方法 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 神经干细胞的原代，传代培养 |
| 2.3.2 神经干细胞生长曲线的测定 |
| 2.3.3 神经干细胞免疫组织化学鉴定 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 神经干细胞的原代、传代培养 |
| 2.4.2 神经干细胞的生长曲线 |
| 2.4.3 神经干细胞的免疫组织化学鉴定 |
| 3 胶原包埋神经干细胞的冷冻保护剂渗透过程研究 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验药品 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 胶原蛋白包埋神经干细胞方法 |
| 3.3.2 渗透过程影响因素的级差分析 |
| 3.3.3 实验条件初步筛选 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 神经干细胞在胶原中的生长状态 |
| 3.4.2 渗透过程的影响因素 |
| 3.4.3 实验条件初步确定 |
| 3.5 小结 |
| 4. 胶原包埋神经干细胞的慢速冻存 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验仪器 |
| 4.2.2 实验药品 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 胶原酶的筛选 |
| 4.3.2 细胞计数法 |
| 4.3.3 神经干细胞的慢速冻存 |
| 4.3.4 神经干细胞的复苏及活率计算 |
| 4.3.5 复苏后细胞的生长状态 |
| 4.3.6 复苏后细胞凋亡流式检测(AnnexinV/PI双标) |
| 4.3.7 ATPase活力检测 |
| 4.3.8 免疫组化检测 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 细胞收获方法的优化 |
| 4.4.2 神经干细胞的复苏 |
| 4.4.3 复苏后细胞的生长状态 |
| 4.4.4 复苏后神经干细胞凋亡流式检测 |
| 4.4.5 复苏后细胞ATPase活力检测 |
| 4.4.6 复苏后的神经干细胞免疫组化鉴定 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A 英文缩略语 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（9）工程骨低温保存中CPA的导入过程研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 低温保存 |
| 1.1.1 低温保存发展史 |
| 1.1.2 低温保存方法 |
| 1.1.2.1 慢速冻存 |
| 1.1.2.2 玻璃化法 |
| 1.1.3 低温保护剂 |
| 1.1.4 低温损伤 |
| 1.2 组织工程骨 |
| 1.2.1 工程骨种子细胞 |
| 1.2.2 工程骨支架材料 |
| 1.2.3 工程骨体外构建 |
| 1.2.4 工程骨临床应用 |
| 1.3 工程组织的低温保存 |
| 1.3.1 组织工程皮肤的低温保存 |
| 1.3.2 组织工程软骨的低温保存 |
| 1.3.3 其他工程组织的低温保存 |
| 1.4 组织工程骨的低温保存 |
| 1.4.1 组织工程骨低温保存现状 |
| 1.4.2 组织工程骨低温保存面临的问题 |
| 1.4.2.1 成骨细胞低温保存问题 |
| 1.4.2.2 组织工程骨尺寸问题 |
| 1.4.2.3 支架与细胞共存问题 |
| 1.4.3 尝试解决传质问题 |
| 2 成骨细胞的获取 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 实验装置与材料 |
| 2.2.1 仪器设备 |
| 2.2.2 实验试剂及药品 |
| 2.2.3 实验所需溶液和试剂的配制 |
| 2.3 成骨细胞的获取 |
| 2.3.1 主要实验材料 |
| 2.3.2 成骨细胞原代培养 |
| 2.3.3 成骨细胞传代培养 |
| 2.3.4 细胞计数 |
| 2.3.5 成骨细胞的纯化 |
| 2.3.6 成骨细胞死活鉴定 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 原代培养 |
| 2.4.2 传代培养 |
| 2.4.3 细胞计数 |
| 2.4.4 成骨细胞死活鉴定 |
| 2.5 小结 |
| 3 成骨细胞渗透不变体积实验确定 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 Boyle-Van't Hoff关系式 |
| 3.3 V_b实验测定 |
| 3.3.1 实验仪器设备 |
| 3.3.2 主要实验材料 |
| 3.3.3 实验过程 |
| 3.3.4 图像数据处理 |
| 3.3.5 实验结果 |
| 3.4 小结 |
| 4 K-K模型渗透参数确定 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 K-K模型 |
| 4.3 渗透参数的确定实验 |
| 4.3.1 实验仪器设备 |
| 4.3.2 主要实验材料 |
| 4.3.3 实验过程 |
| 4.3.4 实验结果 |
| 4.4 参数回归 |
| 4.3.1 细胞体积变化率 |
| 4.3.2 细胞原始体积确定 |
| 4.3.3 参数估算 |
| 4.3.4 模型参数实验验证 |
| 4.4 小结 |
| 5 K-K模型模拟优化冷冻保护剂导入过程 |
| 5.1 概述 |
| 5.2 方法及模型参数 |
| 5.3 计算结果与讨论 |
| 5.3.1 低浓度导入 |
| 5.3.2 玻璃化浓度导入 |
| 5.3.2.1 一步导入 |
| 5.3.2.2 分步导入 |
| 5.3.2.3 连续梯度导入 |
| 5.4 小结 |
| 6 工程骨支架CPA导入研究 |
| 6.1 概述 |
| 6.2 工程骨支架 |
| 6.3 扩散传质 |
| 6.3.1 DMSO扩散系数确定 |
| 6.3.2 MATHEMATICA模拟一维扩散 |
| 6.4 灌注传质 |
| 6.4.1 软件和方法 |
| 6.4.1.1 GAMBIT和FLUENT |
| 6.4.1.2 流场的物理和简化模型 |
| 6.4.1.3 参数设置 |
| 6.4.2 计算结果与讨论 |
| 6.4.2.1 灌注室 |
| 6.4.2.2 支架孔道 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A 符号说明 |
| 附录B K-K模型计算程序 |
| 附录C Vb确定实验细胞面积值 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（10）玻璃化法低温保存脐血造血干细胞的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 低温保存概述 |
| 1.2 低温保存方法 |
| 1.2.1 慢速冷冻法 |
| 1.2.2 玻璃化冷冻法 |
| 1.3 低温损伤机理及其假说 |
| 1.4 冷冻保护剂及其保护机理 |
| 1.4.1 冷冻保护剂概述 |
| 1.4.2 渗透性冷冻保护剂 |
| 1.4.3 非渗透性冷冻保护剂 |
| 1.4.4 新型冷冻保护剂:抗冻蛋白 |
| 1.5 玻璃化的实现 |
| 1.5.1 冷冻保护剂导入阶段 |
| 1.5.2 降温复温阶段 |
| 1.5.3 冷冻保护剂洗脱阶段 |
| 1.5.4 低温断裂及反玻璃化 |
| 1.6 渗透压 |
| 1.7 脐血及脐血造血干细胞的低温保存 |
| 1.7.1 脐血及脐血造血干细胞概述 |
| 1.7.2 脐血及脐血造血干细胞的临床应用 |
| 1.7.3 脐血的采集及保存 |
| 1.7.4 脐血造血干细胞的分离及低温保存 |
| 1.8 小结 |
| 2 脐血的采集及造血干细胞的分离和培养 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 脐血来源 |
| 2.2.2 实验装置 |
| 2.2.3 实验药品及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验试剂的配制 |
| 2.3.2 细胞计数法 |
| 2.3.3 脐血的采集 |
| 2.3.4 造血干细胞的分离 |
| 2.3.5 脐血造血干细胞的传代培养 |
| 2.4 小结 |
| 3 脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂特性的研究 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验装置 |
| 3.2.2 实验药品及试剂 |
| 3.2.3 联合玻璃化保护剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 联合玻璃化保护剂渗透压值的测定 |
| 3.3.2 降温速率对联合玻璃化保护剂玻璃化形成能力的影响 |
| 3.3.3 复温速率对联合玻璃化保护剂反玻璃化情况的影响 |
| 3.3.4 联合玻璃化保护剂一步导入过程中损伤的研究 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 联合玻璃化保护剂的渗透压值 |
| 3.4.2 降温速率对联合玻璃化保护剂玻璃化形成能力的影响 |
| 3.4.3 复温速率对联合玻璃化保护剂反玻璃化情况的影响 |
| 3.4.4 联合玻璃化保护剂一步导入过程所造成的损伤 |
| 3.5 小结 |
| 4 脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂导入洗脱过程的优化研究 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验装置 |
| 4.2.2 实验药品及试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 联合玻璃化保护剂导入过程的优化 |
| 4.3.2 联合玻璃化保护剂洗脱过程的优化 |
| 4.3.3 洗脱后细胞悬液渗透压值的测定 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 五步导入每步之间最佳平衡时间的确定 |
| 4.4.2 五步洗脱每步之间最佳平衡时间以及海藻糖添加浓度的确定 |
| 4.4.3 洗脱后细胞悬液的渗透压值 |
| 4.5 小结 |
| 5 脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程的初步研究 |
| 5.1 概述 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验装置 |
| 5.2.2 实验药品及试剂 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 降温速率对玻璃化后细胞活率的影响 |
| 5.3.2 复温速率对玻璃化后细胞活率的影响 |
| 5.3.3 脐血造血干细胞的玻璃化低温保存 |
| 5.3.4 玻璃化低温保存和慢速冻存的比较 |
| 5.4 实验结果与讨论 |
| 5.4.1 降温速率对玻璃化后细胞活率的影响 |
| 5.4.2 复温速率对玻璃化后细胞活率的影响 |
| 5.4.3 脐血造血干细胞的玻璃化低温保存 |
| 5.4.4 玻璃化低温保存与慢速冻存的比较 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A 英文缩略语 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
四、细胞冷冻损伤机理的几个假说（论文参考文献）
- [1]氢键协同弛豫对低温防护和血压调制的影响机理[D]. 倪沧皓. 湘潭大学, 2018(02)
- [2]交变电场作用下离子碰撞对NaCl溶液冰晶结构的影响[J]. 马亚红,钟力生,胡慧玉,刘琳. 低温工程, 2012(06)
- [3]神经干细胞低温保存的传质渗透特性研究[D]. 李洪蕾. 大连理工大学, 2011(09)
- [4]玻璃化冷冻对脐血造血干/祖细胞活率与生物学特征的影响及导入平衡时间的设计[D]. 张蕾. 大连理工大学, 2009(10)
- [5]冷冻保护剂低温连续导入方法及神经干细胞冻存的研究[D]. 于小川. 大连理工大学, 2009(10)
- [6]肌肉组织工程的基础研究-肌肉冻伤模型的建立[J]. 杨成,郭红延,顾晓明. 现代口腔医学杂志, 2008(05)
- [7]脐血干细胞玻璃化保存过程的研究[D]. 李一鸣. 大连理工大学, 2008(08)
- [8]胶原包埋神经干细胞低温保存技术的研究[D]. 高志新. 大连理工大学, 2008(08)
- [9]工程骨低温保存中CPA的导入过程研究[D]. 潘广生. 大连理工大学, 2007(02)
- [10]玻璃化法低温保存脐血造血干细胞的研究[D]. 刘铭彦. 大连理工大学, 2007(02)