一、规模化猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流行病学调查（论文文献综述）
李相府[1]（2020）在《改进“葛根芩连汤”在治疗禽大肠杆菌病中的应用研究》文中研究表明大肠杆菌是家禽养殖中常见病原之一,可引起家禽的急性败血症或多组织器官炎症,一旦感染会给养殖户带来极大的损失。临床上,对大肠杆菌病的治疗多采用抗菌药物治疗,但该方法在近年来的运用中遇到了新的挑战。“超级细菌”等的出现使越来越多的人认识到抗菌治疗的副作用--细菌的耐药谱扩大。一方面细菌抗药性降低了抗菌治疗的效果,另一方面抗菌药物用量增加易引起动物机体内的药物残留,对人类的身体健康造成危害,对公共卫生安全造成威胁。近年来,随着“无抗时代”的到来,中草药受到更多的重视,越来越多的学者开始关注中草药在细菌性疾病防治中的作用。在禽类大肠杆菌病的防治工作中,中草药及其复方制剂的疗效较好,尤其是中草药黄连、黄芩、金银花,对抑制和杀灭大肠杆菌效果明显。中草药使用后药物残留较少,且不易产生耐药性,对畜禽产品质量无影响。这既能更好地满足用户需求,也符合我国生态绿色养殖的行业要求,具有广阔的应用前景。本研究通过建立禽大肠杆菌人工感染模型,在前人中草药防控禽大肠杆菌病的研究基础上,对经典中草药组方“葛根苓连汤”进行了筛选、改良与疗效试验,以期为禽大肠杆菌病的防控提供新的思路和借鉴。1.“葛根芩连汤”组方的优化筛选研究通过腹腔注射不同浓度的大肠杆菌建立大肠杆菌小鼠感染模型;在前人中草药防控大肠杆菌病的研究基础上,对经典中草药组方“葛根芩连汤”改良,形成了5个组方;分别在大肠杆菌攻毒后1h、6h和12h连续3次给药,评价不同组方的疗效。结果显示,在9.75×108CFU/ml的菌液浓度下,腹腔注射0.5 ml剂量攻毒后,小鼠全部发病,死亡迅速,死亡时间集中在攻毒后24-48 h内,选择该剂量建立小鼠感染模型。攻毒后组方Ⅰ（金银花、葛根、黄芩、黄连、白芍、炙甘草）给药达到了 70%的治愈率,位列5个组方中最高,且未在肝脏和心脏组织中分离到攻毒菌株。因此选择最优组方1进行鸡大肠杆菌病的治疗研究。2.改进“葛根芩连汤”对人工诱发鸡大肠杆菌病的治疗研究通过肌肉注射不同浓度的鸡源大肠杆菌观察感染鸡的发病和死亡率情况,建立鸡感染大肠杆菌模型;鸡感染大肠杆菌出现症状后分别使用高（1.5 ml/kg体重）、中（1.0ml/kg体重）、低剂量（0.5ml/kg体重）的改进“葛根芩连汤”饮水给药,并使用氟苯尼考作为治疗对照组,连用5天,评估药物治疗效果。结果显示,选用攻毒浓度为细菌培养液10-4倍稀释液,剂量为0.5ml/只,感染鸡约有半数死亡,为最佳攻毒剂量;改进“葛根芩连汤”高剂量组、中剂量组对人工感染鸡大肠杆菌病均有一定的治愈效果,与氟苯尼考疗效相当;高、中剂量改进“葛根芩连汤”组治疗评价指标均无显着性差异,因此以中剂量的“葛根芩连汤”为推荐剂量。
冯世文,李军,李常挺,许力士,潘艳,胡帅,钟舒红,贺会利[2]（2020）在《广西规模化猪场猪源大肠杆菌耐药表型和耐药基因检测及相关性分析》文中指出对广西规模化猪场分离的120株猪源大肠杆菌进行了头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和酰胺醇类药物耐药表型检测,并通过PCR检测菌株的β-内酰胺酶基因(blaTEM、blaCTX-M)、氟喹诺酮类耐药基因（qnrA、oqxA、oqxB）、氨基糖苷类耐药基因（aac（6′）-Ib-cr）、大环内酯类耐药基因（ermB）和酰胺醇类耐药基因（floR）携带情况。耐药性检测结果显示,猪源大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星具有高敏感率（>74.0%）,而耐药率最高为四环素类84.2%,酰胺醇类为70.8%,氟喹诺酮类为68.9%,氨基糖苷类为49.4%,大环内酯类为43.3%,最低为头孢菌素类31.4%。猪源大肠杆菌最低对1种药物耐药,最高对18种药物耐药,111株为多重耐药菌,以11耐（15株）、8耐（13株）和7耐（12株）为主,共有82种耐药谱型。耐药基因检测结果显示,8个耐药基因的阳性率均≥50.0%,其中阳性率最高为blaTEM基因（91.7%）,最低为aac（6′）-Ib-cr基因（50.0%）,共存在53种基因组合类型,主要为blaTEM+blaCTX-M+qnrA+oqxA+oqxB+aac（6′）-Ib-cr+ermB+floR（14株,11.7%）和blaTEM+blaCTX-M+qnrA+oqxA+oqxB+ermB+floR（13株,10.8%）。耐药基因和耐药表型相关性分析结果显示,blaTEM和blaCTX-M与大肠杆菌对头孢氨苄耐药情况极显着相关（P<0.01）,blaCTX-M与大肠杆菌对头孢拉啶和头孢曲松耐药情况极显着相关（P<0.01）,qnrA、oqxA、oqxB和aac（6′）-Ib-cr基因与大肠杆菌对诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星耐药极显着相关（P<0.01）,aac（6′）-Ib-cr基因与大肠杆菌对庆大霉素和卡那霉素耐药极显着相关（P<0.01）,floR基因与大肠杆菌对氟苯尼考耐药情况极显着相关（P<0.01）。本研究结果表明广西规模化猪场猪源大肠杆菌仅对极少数抗菌药物具有较高敏感率,多重耐药情况严重,具有丰富的耐药谱型,携带多种耐药基因且具有复杂的基因组合类型,所携带的耐药基因与其耐药表型具有一定的相关性。
张丙周[3]（2020）在《副猪嗜血杆菌LuxS/AI-2群体感应系统研究》文中提出猪细菌性疾病是一类由多种细菌性病原引起的疾病,其病原具有种类众多、血清型多、毒力因子复杂、传播能力强、耐药问题突出以及多种病原混合感染等特点,严重危害着我国猪群的健康。病原感染具有明显的时空分布,开展病原学调查有助于制定准确防的控策略。近些年,由于抗生素滥用导致的耐药问题愈发严重,细菌病防控也变得越来越困难,逐渐成为限制我国养殖业发展的关键因素,建立在敏感药物筛选基础上的合理用药可有效防控疾病,且提升猪产品的食用安全性。副猪嗜血杆菌是临床上危害猪群健康最严重的细菌性病原之一,能够引起猪只多发性浆膜炎、脑膜炎、支气管肺炎和关节炎等临床疾病,其致病因子众多,致病机制复杂。因此,副猪嗜血杆菌详细的致病机制仍然有待深入研究。群体感应系统是一种调控细菌自身功能与细菌之间信号交流的重要功能系统,对细菌生理特性、生物膜形成、细菌耐药性和毒力等特性的调节发挥着重要的作用,但并未见其在副猪嗜血杆菌中的报道。因此,本试验开展了群体感应系统与副猪嗜血杆菌致病机制的研究,希望为副猪嗜血杆菌病防控提供新思路。本研究首先调查了我国猪场常见细菌性病原的流行情况,并分析了其流行规律和耐药现状;然后以副猪嗜血杆菌为研究对象,阐述了群体感应系统与副猪嗜血杆菌生物学功能、生物膜形成和毒力等特性的相关性;进一步利用RNA-Seq技术研究了群体感应系统导致副猪嗜血杆菌特性变化的可能机制;最后发现了群体感应系统调节副猪嗜血杆菌抵抗热应激的可能分子机制和群体感应系统AI-2分子的受体蛋白Rbs B1。主要研究结果如下:1.猪场细菌性病原的流行特征及耐药性研究为了给猪场常见细菌病提供有效的防控指导,试验调查分析了我国猪场常见细菌性病原及其流行规律和耐药机制。2013-2017年,从全国16个不同省份的9661个猪场收集了44,175份临床样品。通过细菌分离鉴定,可知存在于我国猪场的主要细菌性病原有猪链球菌（38.0%）、副猪嗜血杆菌（21.9%）、多杀性巴氏杆菌（7.7%）、致病性大肠杆菌（14.4%）、胸膜肺炎放线杆菌（0.7%）、支气管败血波氏杆菌（3.4%）、沙门氏菌（5.1%）和红斑丹毒丝菌（2.0%）。其中猪链球菌（15.3%-18.6%）、致病性大肠杆菌（4.3%-9.9%）、胸膜肺炎放线杆菌（0.1%-0.5%）和沙门氏菌（1.6%-3.7%）的分离率呈现逐年增高的趋势,而副猪嗜血杆菌（11.6%-7.3%）和红斑丹毒丝菌（1.6%-0.6%）的分离率则出现了一定的下降,但是猪链球菌和副猪嗜血杆菌仍然是我国猪场分离率最高的两种细菌性病原。血清型分型结果显示,猪链球菌的最主要血清型仍然为血清2型,但血清2型菌株的分离率自2013年至2017年减少了约20%;副猪嗜血杆菌的流行优势血清型则由血清4型变为血清5型。季节性流行特征结果显示猪链球菌和副猪嗜血杆菌在炎热季节分离率较高,而多杀性巴氏杆菌则在2-4月份及10月份分离率较高。细菌耐药性试验结果显示,猪链球菌、副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌对常见的8种类型（氨基糖苷类、大环内酯类、林可霉素类、四环素类、多粘菌素,磺胺类,β-内酰胺类和喹诺酮类抗生素）抗生素均表现出了较高的耐药率,而且多数细菌耐药率呈现出了逐年增高的现象。2.副猪嗜血杆菌Lux S/AI-2群体感应系统的功能研究通过分析不同菌株的基因组,发现群体感应系统广泛存在于多数细菌之中。为了探索群体感应系统对副猪嗜血杆菌的调控作用,构建了副猪嗜血杆菌的lux S基因缺失株（Δlux S）和互补菌株（C-lux S）,并利用亲本菌株和这两株重组菌株比较分析了群体感应系统对副猪嗜血杆菌在生长特性、生物膜形成和毒力的影响。结果发现,副猪嗜血杆菌群体感应系统缺失后,其抵抗热应激和氧化应激的能力分别减弱了23.0%和25.7%,不同温度下细菌自身凝集能力和凝集红细胞的能力极显着减弱,粘附PK-15细胞的能力下降了约117倍,对小鼠的致病力下降约10倍,在小鼠不同组织的定植能力也均显着减弱,但是细菌抵抗渗透压应激的能力增强了23.7%,生物膜形成能力也显着增强。因此,群体感应系统广泛参与了副猪嗜血杆菌多种生理功能的调节。3.副猪嗜血杆菌群体感应系统缺失株转录组学研究在副猪嗜血杆菌生长的稳定期前期收集了HPS2、Δlux S和C-lux S菌株,提取RNA后,去除宿主DNA。经RNA-Seq测序,获得了HPS2、Δlux S和C-lux S菌株转录样本的大量Reads。再通过数据过滤、序列比对和转录差异基因的富集等分析发现,与HPS2菌株相比,Δlux S菌株出现了232个上调表达基因和212个下调表达基因,主要参与了碳代谢、RNA降解、三羧酸循环（TCA）等生物过程和转运、多种蛋白水解酶活性、离子跨膜运输、跨膜信号接收和信号受体活性等生物功能。同时,转录组学结果显示群体感应系统参与了副猪嗜血杆菌抵抗热应激的可能分子机制以及发现了参与群体感应系统功能调节的rbs B1基因。4.群体感应系统调控副猪嗜血杆菌抵抗热应激的研究HPS2、Δlux S和C-lux S菌株的转录组学结果显示,参与HPS热应激调节的多种基因均出现了转录水平的差异表达。本试验利用定量检测的方法,验证了这些基因的转录水平。结果发现,与HPS2菌株相比,Δlux S菌株的rse A基因出现了显着的转录上调,rpo E,rse B,deg S,clp P和htr A基因出现了显着的转录下调,初步验证了副猪嗜血杆菌利用群体感应系统调控htr A基因的转录水平,进而调控其抵抗热应激的分子机制。为了进一步验证rse A和rpo E基因在调控副猪嗜血杆菌热应激中的作用,构建了副猪嗜血杆菌Δrse A和Δrpo E基因缺失株,证明了在副猪嗜血杆菌调控热应激中的rse A和rpo E基因分别发挥了负向调控作用和正向调控作用。5.受体蛋白Rbs B1在副猪嗜血杆菌群体感应系统中的作用HPS2、Δlux S和C-lux S菌株的转录组结果也显示,与HPS2菌株相比,Δlux S菌株的rbs B1基因出现了显着的表达下调。通过同源序列分析发现,副猪嗜血杆菌的rbs B1基因与具有群体感应系统的放线共生放线杆菌（IDH781菌株）以及流感嗜血杆菌（86-028NP菌株）rbs B1基因序列同源性分别高达72.4%和73.3%。因此,我们猜测rbs B1基因在副猪嗜血杆菌中可能发挥着与放线共生放线杆菌和流感嗜血杆菌的rbs B1基因类似的功能。试验利用构建的副猪嗜血杆菌rbs B1基因缺失株Δrbs B1和原核表达蛋白Rbs B1,证明了Rbs B1蛋白为副猪嗜血杆菌群体感应系统中AI-2分子的受体蛋白。试验结果显示,AI-2分子的浓度在Δrbs B1菌中的降低速度显着低于HPS2亲本菌株,而且AI-2分子的吸收与转运与Rbs B1蛋白的含量之间存在剂量依赖关系。该发现进一步完善了副猪嗜血杆菌群体感应系统的调控通路。综上所述,本文发现了2013-2017年我国部分猪场中常见细菌性病原的感染特点、耐药现状,为细菌病防控提供了参考;发现副猪嗜血杆菌存在群体感应系统,且该系统与副猪嗜血杆菌自身多种重要特性的改变密切相关;阐明了副猪嗜血杆菌抵抗热应激的可能分子机制以及发现了群体感应系统的受体蛋白,该研究为群体感应系统的深入研究奠定了基础。
黄萃[4]（2020）在《江西猪源致病性ETEC耐药性与耐药性消除研究》文中提出产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是引起仔猪腹泻的主要传染性病原菌,给目前我国养猪业的健康发展造成了重大影响。抗生素的应用使ETEC感染性疾病得到了有效地控制,但随着抗生素的滥用,耐药性问题日趋严重。本试验对江西地区3个猪场的105份样品进行细菌分离培养,经PCR鉴定及测序分析,最终分离得到90株大肠杆菌。根据Gen Bank中ETEC基因序列,设计合成STb、LT、K88和K99的特异性引物,成功建立双重PCR检测方法,检测出40株ETEC,其中K88检出率最高（34.44%）,说明江西地区ETEC主要流行的毒力因子为K88;选取携带不同毒力基因的菌株进行致病性试验,结果显示ETEC分离株均有致病性,且与毒力因子密切相关。选取18种抗生素对ETEC进行药敏试验,并对bla TEM、Sul1、tetA和qnrA等14种耐药基因进行PCR扩增。结果显示,3个猪场的ETEC耐药情况严重,对四环素和多西环素耐药率高达100%,对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、复方新诺明、恩诺沙星的耐药率达80%以上;且所有菌株均为多重耐药株,耐药谱在9耐～18耐,其中14耐所占比例最大。在14种耐药基因中,共检测出11种耐药基因,其中bla TEM、TetA和Tet C基因检出率最高（100%）,其次为Flo R、Sul2、aac（3’）-Ⅱ、ant（3’）-Ⅰ、qnr A、qnr B、qnr S和bla CTX-M基因,而bla SHV、Tet B和Sul1基因未检出。说明江西地区以bla TEM、TetA和Tet C基因为主要流行的耐药因子。选用10种中药对6株ETEC耐药菌进行体外抑菌试验,结果显示五味子、乌梅和五倍子对ETEC的抑菌效果较好。用影印培养法对ETEC进行耐药性消除试验,耐药性消除效果为五味子>五倍子>乌梅。比较菌株耐药性消除前后的变化发现,中药作用后的ETEC质粒条带出现丢失;3种中药的消除子对不同的抗生素恢复了敏感性;菌株的TetA基因经五倍子和乌梅作用后均被消除,经五味子作用后部分被消除,而Tet C基因均未被消除,表明3种中药对耐药基因的消除效果存在差异。本试验获得了江西地区猪源ETEC毒力因子和耐药性的基本流行情况,研究了中药对耐四环素类致病性ETEC的消除作用,为指导江西地区猪源ETEC的临床用药以及耐药性的解决提供了有效依据。
冯世文,李军,潘艳,贺会利,彭昊,钟舒红,胡帅,杨威[5]（2020）在《广西不同养殖模式猪源大肠杆菌耐药表型差异性分析》文中研究指明为调查广西不同养殖模式的猪源大肠杆菌耐药表型差异,为合理使用抗菌药物防治猪大肠杆菌病和减缓耐药菌株产生提供参考,采用体外分离培养和体外药敏试验的方法,分离了广西不同养殖模式的猪源大肠杆菌,并进行耐药表型检测和差异性分析。结果显示,大规模养猪场、中小规模养猪场和散养户的猪源大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星的敏感率高于70%,而对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、利福平、林可霉素和复方新诺明的耐药率均高于90%。大规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星的耐药率极显着低于散养户（P<0.01）,对氧氟沙星、庆大霉素和氟苯尼考的耐药率显着低于散养户（P<0.05）;中小规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星、强力霉素和氟苯尼考的耐药性显着低于散养户（P<0.05）;散养户大肠杆菌对环丙沙星、卡那霉素和壮观霉素的耐药率极显着高于大规模养猪场和中小规模养猪场（P<0.01）,而对头孢噻肟的耐药率极显着低于大规模养猪场和中小规模养猪场（P<0.01）。大规模养殖场、中小规模养殖场和散养户大肠杆菌的多重耐药指数（MARI）分别为0.62、0.63和0.68。14～23耐,散养户（44株）极显着高于大规模养猪场（30株）（P<0.01）,显着高于中小规模养猪场（39株）（P<0.05）。结果表明,3种养殖模式的猪源大肠杆菌的耐药情况不同,但均存在严重的耐药问题,且以多重耐药为主。
李孟[6]（2019）在《河南省猪源大肠杆菌耐药性调查及部分耐药基因分布特征研究》文中进行了进一步梳理大肠杆菌病是猪群中常见多发的细菌性疾病,是严重危害仔猪安全的重要传染病之一,目前防治该病的主要手段是使用抗生素,因此导致耐药现象越来越严重。大肠杆菌是人与动物的重要共生病原菌,动物源耐药菌的大量出现与广泛流行,不仅严重影响到畜禽养殖业的持续健康发展,而且严重威胁动物性食品安全和人类健康。为指导临床科学选用抗生素,迫切需要对河南地区大肠杆菌临床耐药性进行监测,尤其是对氟苯尼考、头孢噻呋、粘杆菌素的主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1分布特征进行研究。因此,本文开展了河南省猪源大肠杆菌耐药性调查研究。1.本课题对2013年～2018年分离的856株猪源大肠杆菌进行了 8类13种抗菌药物的药物敏感性试验。结果显示,所有菌株均有不同程度的耐药,且对四环素、多西环素、磺胺异恶唑、复方新诺明、氨苄西林一直保持较高的耐药率（90%左右）;对其他药物耐药率依次为:氟苯尼考（79.8%）、大观霉素（74.8%）、恩诺沙星（45.6%）、氧氟沙星（32.2%）、粘杆菌素（31.1%）、阿莫西林/棒酸（30.0%）、庆大霉素（25.5%）、头孢噻呋（15.5%）;对粘杆菌素的耐药率从2013年～2015年持续增高,到2015年达到最高（56.6%）,2015年之后开始下降直到2018年的0%。2.建立了猪源大肠杆菌中对临床常用药物氟苯尼考、头孢噻呋、粘杆菌素的主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的多重PCR检测方法。通过对多重PCR体系的引物及退火温度等参数的优化,并考察了方法的灵敏度、特异性和重复性等。该方法的灵敏度为1.46× 105 CFU/mL,并且具有较高的特异性和稳定性,与单重PCR的符合率在98%左右,与传统的单重PCR相比,该多重PCR技术快速高效实用性强,为检测大肠杆菌临床常用药的耐药基因提供了新的技术手段。3.利用所建立的多重PCR检测方法,对分离的856株大肠杆菌主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1进行检测。结果显示,floR基因检出率为67.9%（581/856）,其中郑州72.3%、开封84.9%、许昌82.3%、焦作48.5%;CTX-M基因检出率为8.4%（72/856）,其中郑州2.1%、焦作6.3%、开封16.5%、许昌15.7%;mcr-1基因检出率为27.6%（236/856）,其中郑州10.2%、焦作7.2%、开封45.6%、许昌43.8%。对不同地域用药习惯对大肠杆菌耐药基因分布和流行影响进行了分析研究,探明了不同地域用药习惯对耐药基因的分布和流行所产生的影响。通过本课题的研究,调查了 2013年～2018年河南省猪源大肠杆菌临床耐药情况,建立了猪源大肠杆菌分别对氟苯尼考、头孢噻呋、粘杆菌素主要耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的多重PCR检测方法,初步掌握了河南省猪源大肠杆菌floR、CTX-M、mcr-1基因的分布特征,将对猪源大肠杆菌耐药性风险评估和临床科学用药提供参考,进而为保障食品安全、公共卫生安全和生态环境安全提供技术支撑。
张鹏[7]（2019）在《安徽部分猪场产肠毒素大肠杆菌分离鉴定、生物学特性及灭活疫苗的初步研究》文中研究指明仔猪黄白痢多发生于仔猪初生及断奶前后,是规模化猪场最常见的猪病之一,也是最难根治的一种传染病。发病仔猪临床表现为食欲不振,消瘦,拉稀薄的黄痢或黏稠的白痢,严重甚至会引起死亡。该病主要病原是产肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）,ETEC的主要致病因子是两种肠毒素,分别是耐热肠毒素（heat stable enterotoxin,ST）和不耐热肠毒素（heat labile enterotoxin,LT）,它们会引起仔猪腹泻,甚至死亡,严重影响养猪业的健康发展。由于ETEC具有较高的耐药性和致病性,其对养猪业的威胁需要引起高度重视。本研究经调查安徽部分地区规模化猪场仔猪黄白痢流行情况,分析ETEC致病因子、耐药情况以及血清型等生物特性,制备相应的灭活疫苗,研究其对小鼠免疫效果,为安徽部分地区规模化猪场ETEC的有效防治提供依据。1安徽部分地区猪场仔猪ETEC的分离鉴定及血清型分析在安徽6个地区17个规模化猪场采集初生到断奶后仔猪新鲜粪便、直肠拭子等479份,经麦康凯琼脂（MacConkey agar,Mac）增菌划线、单菌落形态鉴定、16SrRNA和特异性毒力基因的PCR鉴定及测序,分离得到110株ETEC,其中同时含有ST和LT基因的6株,仅含ST基因的97株,仅含LT基因的7株。通过PCR和血清凝集试验对110株ETEC菌株进行血清型鉴定,共定型52株,占总菌株数的47.3%。鉴定出的血清型主要有O8、O20、O128、O15、O25、O114、O3、O9、O137和O141等13种血清型,其中O8,O20,O128为优势血清型,分别占26.9%（14/52）,21.2%（11/52）和11.5%（6/52）。在6个地域均存在优势血清型。2安徽部分地区猪场仔猪ETEC耐药性及毒力测定使用13种药敏纸片对110株ETEC进行耐药分析,试验结果表明,多重耐药分布广泛,10重耐药及其以上的菌株占比为38.1%（42/110）,多集中于安徽中南部地区猪场。大部分对红霉素,强力霉素,阿莫西林,甲氧苄啶/磺胺甲恶唑和四环素等高度耐药,耐药率均高达90%以上,如:红霉素94.5%（104/110）,强力霉素100%（110/110）,阿莫西林 91.8%（101/110）,甲氧苄啶/磺胺甲恶唑 94.5%（104/110）和四环素97.3%（107/110）。有51.8%（57/110）的菌株对头孢噻肟敏感,47.3%（52/110）的菌株对恩诺沙星敏感,对多粘菌素B的敏感率最高,达90%（99/110）。对31株优势血清型ETEC菌株进行毒力测定,其中O8血清型菌株14株,O20血清型菌株11株,O128血清型菌株6株,腹腔注射剂量为5×107CFU/只,每株菌攻毒6只小鼠。试验结果显示,O8血清型中有7株强毒株,O20血清型中有8株强毒株,O128有4株强毒株。选择O8强毒株FXYD4-1进行半数致死量（LD50）和最低致死量（MLD）的测定,结果显示O8强毒株FXYD4-1的LD50为5.1 × 106 CFU/只,MLD为 3×107CFU/只。3仔猪黄白痢灭活疫苗制备及对小鼠的免疫效果研究用优势血清型的强毒株和弱毒株分别制备单价灭活疫苗,其中包括O8血清型强毒株FXYD4-1和弱毒株QJZX2制成的疫苗、O20血清型强毒株FDDS1和弱毒株FXYQ1制成的疫苗以及O128血清型强毒株QJXW2-2和弱毒株YQBYZ2-4制成的疫苗,分别以2×108CFU/只腹腔免疫四周龄小鼠,一免后两周二免,二免后一周攻毒,攻毒菌株选择优势血清型强毒株,攻毒剂量为5×107CFU/只,结果表明,血清型O8强毒株FXYD4-1灭活苗对小鼠的保护率在66.7%（2/6）以上;而血清型O20弱毒株FXYQ1制备的灭活疫苗对小鼠的保护率在83.3%（1/6）以上;FXYD4-1和FXYQ1制备的灭活疫苗对O128血清型菌株攻毒小鼠的保护率均达100%。因此,进一步选取O8血清型强毒株FXYD4-1和O20血清型弱毒株FXYQ1混合制成二价灭活苗,对小鼠进行腹腔免疫,免疫剂量为2×108CFU/只,结果显示二价灭活苗对小鼠的保护率在50%以上（3/6）。对免疫前后小鼠血清中的抗体效价测定,表明一免后抗体效价有所上升,二免抗体效价显着高于一免抗体效价。
杨德鸿[8]（2018）在《苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌（ETEC）流行病学调查及灭活疫苗初步研究》文中认为产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是导致猪场仔猪发生腹泻的一种重要致泻性致病菌,感染后引起初生到保育期间仔猪腹泻和黄白痢,也是目前规模化猪场难以根除的一种肠道致病菌。发病仔猪主要临床表现为腹泻、脱水、消瘦、拉黄痢或白痢,严重可引起死亡,且具有传染性,是一种十分重要的猪大肠杆菌病。经临床调查发现仔猪黄白痢是发生频率最高的猪大肠杆菌病,其病原ETEC存在普遍高耐药性和高致病性,严重危害养猪业健康发展。本研究通过调查苏北地区规模化猪场ETEC流行情况,分析其血清型、耐药性和致病力等生物学特性,研制具有广谱免疫保护效果的O抗原灭活疫苗,对苏北地区规模化猪场ETEC进行监测及有效防控。1苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌分离鉴定从苏北地区21个规模化猪场采集初生到30日龄仔猪的新鲜粪样、直肠棉拭子及小肠样共562份,经平板划线、菌落形态观察,其中528份病料分离出792株疑似大肠杆菌。通过显微形态观察、PCR鉴定菌株特异性致病型、16S rRNA测序鉴定确定为ETEC菌株有141株,占总病料数的25.1%。使用PCR方法结合37种标准O抗原血清进行玻板凝集试验鉴定141株ETEC菌株的血清型;用14种常见抗生素标准药敏纸片,分析分离菌株耐药性和敏感性,并做整体耐药性分析;小鼠攻毒试验鉴定分离菌株致病力;研制灭活苗,并进行小鼠免疫保护试验分析灭活疫苗免疫保护效果。使用常规血清型鉴定玻板凝集试验结合PCR分子生物学鉴定方法,使用7种多价O抗原血清和37种单因子ETEC常见O抗原血清,对分离出的141株ETEC菌株进行血清型鉴定。试验结果表明,所分离的141株ETEC菌株具有较多的O抗原血清型,定型85株,占ETEC菌株总数的60.3%,1株自凝,2株出现多价凝集而单价不凝;其中08、0101和0128为优势血清型,分别占定型菌株数的29.4%、20%和占11.8%,占ETEC菌株总数的17.7%、12.1%、7.1%;三个优势血清型占定型菌株数的61.2%,占ETEC菌株总数的36.9%。其他血清型包括09、03、020、0148、0149、0111、0138、0139、0141、025、0115、0119、0153、045、089 等 15 种。2苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌生物学特性分析对所分离141株ETEC菌株肠毒素和毒力岛等相关毒力因子进行鉴定,试验结果表明所有ETEC分离菌株均含有ST基因,有25%的菌株含有LT基因,有25%的菌株含有Ler基因,含有Irp2、fyuA、eaeA基因的菌株占10%。药敏试验对141株ETEC进行14种药敏片的耐药性分析,得出所分离的ETEC对新霉素、红霉素、四环素、庆大霉素、强力霉素、阿莫西林、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑高度耐药,分别为 95%（134/141）、100%（141/141）、99.3%（140/141）、80.9%（114/141）、100%（141/141）、92%（130/141）、96.5%（136/141）,耐药菌株比例均在 80%以上;有 50.4%的ETEC对恩诺沙星敏感（71/141）,中等敏感的为多粘菌素B占66%（93/141）、头孢噻肟占51.8%（73/141）;多重耐药主要集中在8耐、9耐、10耐、11耐,占总ETEC的68%（96/141）,分别为 17%（24/141）、16.3%（23/141）、19%（27/141）、15.6%（22/141）,拥有10重耐药性的菌株占比最大。动物实验使用常规的ICR小鼠,小鼠攻毒试验通过初筛141株ETEC致病力,得到9株高致病力菌株,均能以1×107CFU致死小鼠。然后分别筛选优势血清型08和0101强毒株,以5×107CFU攻毒小鼠,发现08血清型中有8株为强毒株,占08血清型菌株总数的38.1%,0101血清型中有5株为强毒株,占0101血清型菌株总数的27.8%;综合初筛和单因子O抗原血清型强毒株筛选结果,测定08血清型一强毒株的半数致死量（LD50）为1.4×107CFU;最低致死量（MLD）为3×107CFU。3苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌灭活疫苗的初步研究优势血清型单价灭活疫苗小鼠免疫效果结果显示,单价灭活疫苗对同种血清型的强毒株具有完全的保护,保护率为100%;用优势血清型的2株强毒株经灭活制成二价灭活ETEC疫苗,免疫小鼠能形成有效的保护效果,对两种优势血清型所有强毒株的保护率均在83%以上,对高浓度感染也具有较高保护率,且免疫无应激死亡,对其他血清型强毒株也有部分保护效果。比较免疫前后小鼠血清抗体效价,发现二免后血清抗体效价上升较快,但一免后攻毒小鼠也能形成有效保护;比较不同免疫剂量的免疫效果发现,以2×108CFU免疫小鼠的效果最佳;比较不同致病力菌株灭活疫苗的免疫保护效果发现,三种不同致病力菌株制备的灭活疫苗均能对小鼠形成有效保护。本研究通过对苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌的流行病学调查,发现其优势血清型,整体耐药性,并初步研制出可用于防控分离株中大部分致病性ETEC的二价灭活疫苗,给养殖生产业提供了可行的监测和防控参考。
王振玲[9]（2014）在《北京地区仔猪腹泻相关病原调查及大肠杆菌和轮状病毒特性的研究》文中研究说明仔猪腹泻是养猪生产的一类常见疾病,严重阻碍养猪业发展。引起仔猪腹泻的病因复杂多样,如非传染性病因和传染性病原感染等,其中以细菌和病毒感染较为常见,而且病原种类多,病情复杂,发病率高。为深入了解北京地区规模化猪场仔猪腹泻病原流行状况,本研究对2010年8月至2013年12月期间采集的400份腹泻样本进行病毒和细菌检测,并进一步对本实验分离的大肠杆菌和轮状病毒的生物学特性进行研究：从采集的400份仔猪腹泻样本中成功分离到132株细菌,经生化特性检测和16S rRNA基因序列分析,分属于16个细菌种。相关病毒抗原PCR检测结果显示：猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性样本23份,猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）6份,猪轮状病毒（RV）58份,总计87份。其中,RV阳性率最高,为66.7%。采用胶体金法对部分时段的轮状病毒抗原调查结果显示,仔猪RV感染阳性率为17.7%,且每年的12月和次年1月份感染率最高,可达40%。0～7日龄仔猪易感,感染率为30.6%。用轮状病毒抗原阳性病料接种Marc-145细胞,成功分离到一株轮状病毒。在细胞培养中可引起细胞病变。采用抗轮状病毒特异性血清进行间接免疫荧光染色,显示感染细胞质中存在特异性荧光。感染细胞超薄切片电镜观察可见有典型的轮状病毒粒子。利用RT-PCR扩增病毒部分基因和测序,结果显示分离株为A群G亚型轮状病毒。对初生仔猪进行致病性试验结果显示,仔猪感染后表现为典型轮状病毒感染临床症状及病理组织学变化。对分离到的64株大肠杆菌进行O抗原血清型分型,结果定型42株菌,22株未定型。定型菌株主要为8种血清型,分别为O101（18.8%）、O8（11.0%）、O20（11.0%）、O64（12.5%）、O45（4.6%）、 O149（4.6%）、O2（1.5%）、O89（1.5%）、对64株大肠杆菌携带的毒力因子进行PCR鉴定,研究结果显示主要携带的毒力因子为sta, stx2e, astA和eaeA等,50%菌株携带astA和eaeA因子,而30%以上的菌株携带sta和stx2e因子。选取携带多个毒力因子的两株大肠杆菌进行全基因组测序分析,结果显示菌株A基因组约为5.5Mb,菌株B基因组约为5.6Mb,两株菌分别含有5743和5829个开放阅读框（Open reading frame）。对其进行蛋白注释发现两株菌膜转运蛋白的基因差异较大,菌种A为241个,菌种B为342个。进一步分析发现两株细菌膜蛋白基因差异主要体现在Ⅳ型结合转运系统（1ncl1型）。在Ⅳ型转运系统中,菌株B携带的VirB3蛋白编码基因,可参与细菌纤毛侵袭宿主细胞膜的过程,与菌种A存在一定差异。综上所述,本研究通过对北京地区仔猪腹泻的病原学及流行病学调查,较全面的了解了北京地区仔猪腹泻性疾病的流行情况及相关致病病原,并通过对主要病原体的分离和鉴定,进一步明确了主要病原体的生物学特性。本研究的结果将为北京地区仔猪腹泻性疾病的预防和控制提供数据参考,同时为进一步的仔猪腹泻性疾病疫苗的研发提供数据支持。
王克领,张青娴,徐引弟,郎利敏,张立宪,李海利,朱文豪,游一,郑万录[10]（2014）在《河南地区猪源性大肠杆菌血清型鉴定与耐药性调查》文中指出为了解河南省规模化猪场大肠杆菌的流行概况,无菌采集疑似大肠杆菌感染的病死猪病料185份,经常规细菌培养、生化试验及致病性试验,分离到86株大肠杆菌;对分离菌株进行血清型鉴定,确定了67株大肠杆菌血清型,分属15个血清型,主要以O8、O9、O161、O107为主。测定了已鉴定血清型的67株大肠杆菌对15种常用抗菌药物的耐药性,结果显示,对阿米卡星、黏菌素、头孢曲松钠、头孢噻呋敏感率高的菌株较多;对环丙沙星、多西环素、阿莫西林、四环素、磺胺甲恶唑耐药的菌株达80%以上,对四环素和磺胺甲恶唑耐药的菌株比例最高,分别为88.1%、89.6%;67株菌株均表现不同程度的多重耐药,每种菌株至少对3种受试药物耐药,53.7%的菌株对9种以上药物耐药。表明河南地区的猪源大肠杆菌耐药现象严重,耐药谱广。
二、规模化猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流行病学调查（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、规模化猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流行病学调查（论文提纲范文）
（1）改进“葛根芩连汤”在治疗禽大肠杆菌病中的应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第1章 文献综述 |
| 1 禽大肠杆菌病 |
| 1.1 禽大肠杆菌病简介 |
| 1.2 禽大肠杆菌病的流行特点 |
| 1.3 禽大肠杆菌病的危害 |
| 1.4 禽致病性大肠杆菌的耐药性 |
| 1.5 禽大肠杆菌病的耐药性质粒 |
| 2 中草药在防治禽大肠杆菌病中的应用 |
| 2.1 抑制和杀灭大肠杆菌 |
| 2.2 消除细菌耐药性 |
| 2.3 抗炎作用 |
| 2.4 增强机体免疫 |
| 3 “葛根芩连汤”在防治大肠杆菌病中的应用 |
| 4 目的意义 |
| 第2章 “葛根芩连汤”组方的优化筛选研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 供试药品 |
| 1.3 攻毒菌株 |
| 1.4 培养基及试剂 |
| 1.5 主要仪器和设备 |
| 1.6 大肠杆菌人工感染小鼠模型的建立 |
| 1.7 组方筛选试验 |
| 1.8 数据处理 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 大肠杆菌小鼠感染模型的建立 |
| 2.2 组方的筛选试验 |
| 3 讨论 |
| 3.1 中药的抗菌性 |
| 3.2 人工感染大肠杆菌小鼠模型的治疗效果试验 |
| 4 小结 |
| 第3章 改进“葛根芩连汤”对人工诱发鸡大肠杆菌病的治疗研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 试验菌种 |
| 1.4 实验仪器 |
| 1.5 大肠杆菌攻毒剂量的确定 |
| 1.6 治疗试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 鸡大肠杆菌最佳攻毒剂量的测定 |
| 2.2 治疗试验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 鸡大肠杆菌病的治疗药物 |
| 3.2 鸡大肠杆菌病辨证施治 |
| 3.3 改进“葛根芩连汤”对鸡大肠杆菌病的治疗作用 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）广西规模化猪场猪源大肠杆菌耐药表型和耐药基因检测及相关性分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 菌株来源 |
| 1.2 主要试剂和药物 |
| 1.3 药敏试验 |
| 1.4 耐药基因的PCR检测 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 猪源大肠杆菌耐药情况 |
| 2.2 猪源大肠杆菌耐药谱及耐药谱型 |
| 2.3 耐药基因检测分析 |
| 2.4 耐药基因组合类型 |
| 2.5 耐药基因与耐药表型相关性分析 |
| 3 讨论 |
（3）副猪嗜血杆菌LuxS/AI-2群体感应系统研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表(Abbreviation) |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 猪场细菌性疾病概述 |
| 1.1.1 我国猪细菌性疾病的流行特点 |
| 1.1.2 猪链球菌病 |
| 1.1.3 副猪嗜血杆菌病 |
| 1.1.4 猪萎缩性鼻炎 |
| 1.1.5 猪大肠杆菌病 |
| 1.1.6 猪传染性胸膜肺炎 |
| 1.1.7 仔猪副伤寒 |
| 1.1.8 猪丹毒 |
| 1.2 细菌耐药性概述 |
| 1.2.1 细菌耐药现状 |
| 1.2.2 细菌耐药机制 |
| 1.2.2.1 由细菌膜和外排泵介导的耐药 |
| 1.2.2.2 抗生素结构的改变 |
| 1.2.2.3 抗生素作用靶点改变 |
| 1.2.2.4 细菌状态改变 |
| 1.2.3 减少细菌耐药性的策略 |
| 1.3 细菌群体感应系统概述 |
| 1.3.1 群体感应系统简介 |
| 1.3.2 Lux S/AI-2 群体感应系统 |
| 1.3.3 群体感应系统与细菌生物膜 |
| 1.3.4 群体感应系统与细菌的环境压力应激 |
| 1.3.5 群体感应系统与细菌毒力 |
| 1.3.6 群体感应系统的受体分子 |
| 1.3.7 群体感应系统的临床意义 |
| 1.4 转录组学技术研究及应用 |
| 1.4.1 转录组学概述 |
| 1.4.2 RNA-Seq在转录组学研究中的应用 |
| 1.5 细菌热应激调控的分子机制 |
| 1.6 立题依据 |
| 第二章 猪场病原菌感染调查及耐药性研究 |
| 2.1 研究的目的与意义 |
| 2.2 试验材料 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.2.3 培养基的配置 |
| 2.2.4 PCR引物 |
| 2.2.4.1 细菌鉴定引物 |
| 2.2.4.2 猪链球菌分型引物 |
| 2.2.4.3 副猪嗜血杆菌分型引物 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 样品收集 |
| 2.3.2 细菌分离 |
| 2.3.3 PCR鉴定 |
| 2.3.3.1 细菌种属的PCR鉴定 |
| 2.3.3.2 猪链球菌和副猪嗜血杆菌的血清型鉴定 |
| 2.3.4 药敏试验 |
| 2.3.5 数据分析 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 样品来源的地区分布 |
| 2.4.2 样品的组织种类 |
| 2.4.3 病原菌的组成及分离率 |
| 2.4.4 猪链球菌、副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌的季节性分布 |
| 2.4.5 猪链球菌和副猪嗜血杆菌的血清型 |
| 2.4.6 猪链球菌、副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌的耐药性 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 样品信息分析 |
| 2.5.2 病原菌的流行特点分析 |
| 2.5.3 猪链球菌、副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌的季节性感染特点 |
| 2.5.4 猪链球菌的副猪嗜血杆菌的血清型特征 |
| 2.5.5 猪链球菌、副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌的耐药率比较 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 副猪嗜血杆菌Lux S/AI-2 群体感应系统的功能研究 |
| 3.1 研究的目的与意义 |
| 3.2 试验材料 |
| 3.2.1 主要试剂 |
| 3.2.2 主要质粒、菌株和细胞 |
| 3.2.3 试验动物 |
| 3.2.4 主要仪器 |
| 3.2.5 培养基配置 |
| 3.2.6 各类PCR引物 |
| 3.2.6.1 副猪嗜血杆菌luxS基因缺失菌株构建引物 |
| 3.2.6.2 HPS基因缺失互补菌株构建引物 |
| 3.2.6.3 HPS基因缺失菌株和互补菌株验证引物 |
| 3.2.6.4 其他引物 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 luxS基因序列同源性分析 |
| 3.3.2 副猪嗜血杆菌luxS基因缺失和互补菌株的构建及验证 |
| 3.3.2.1 副猪嗜血杆菌基因组提取 |
| 3.3.2.2 质粒小量提取 |
| 3.3.2.3 质粒大量提取 |
| 3.3.2.4 重组质粒p K18mobsacb-UKD的构建及验证 |
| 3.3.2.5 自然转化 |
| 3.3.2.6 重组质粒p SHK3-C-lux S的构建及验证 |
| 3.3.2.7 副猪嗜血杆菌无细胞提取物(CFEs)提取 |
| 3.3.2.8 CFEs体外甲基化质粒 |
| 3.3.2.9 电转化感受态细胞制备 |
| 3.3.2.10 电转化步骤与转化子鉴定 |
| 3.3.3 AI-1和AI-2分子的检测 |
| 3.3.4 HPS2、Δlux S和 C-lux S菌株生长曲线的测定 |
| 3.3.5 压力应激试验 |
| 3.3.6 生物膜形成试验 |
| 3.3.7 自身凝集试验 |
| 3.3.8 红细胞凝集试验 |
| 3.3.8.1 2%健康猪红细胞悬浮液的制备 |
| 3.3.8.2 血凝试验 |
| 3.3.9 粘附试验 |
| 3.3.10 半数致死量试验(LD50) |
| 3.3.11 小鼠组织载菌量的测定 |
| 3.3.12 透射电子显微镜样品准备及形态观察 |
| 3.3.13 统计学分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 luxS基因在不同菌株中的同源性 |
| 3.4.2 副猪嗜血杆菌luxS基因缺失株和互补株的构建及验证 |
| 3.4.3 AI-1和AI-2分子的活性检测 |
| 3.4.4 HPS2、Δlux S和 C-lux S菌株生长曲线的测定 |
| 3.4.5 压力应激试验 |
| 3.4.6 ΔluxS菌株生物膜形成能力显着增强 |
| 3.4.7 ΔluxS菌株自身凝集能力显着减弱 |
| 3.4.8 ΔluxS菌株血凝能力显着减弱 |
| 3.4.9 Δlux S菌株粘附PK-15 细胞的能力减弱 |
| 3.4.10 ΔluxS菌株毒力显着减弱 |
| 3.4.11 HPS2、Δlux S和 C-lux S菌株的组织载菌量 |
| 3.4.12 HPS2、Δlux S和 C-lux S菌株的形态观察 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 LuxS基因序列同源性分析 |
| 3.5.2 luxS基因缺失和互补菌株的构建策略分析 |
| 3.5.3 luxS基因缺失株和互补株的生长特性比较 |
| 3.5.4 Lux S基因参与HPS调控环境应激 |
| 3.5.5 副猪嗜血杆菌群体感应系统AI-2分子的表达规律 |
| 3.5.6 副猪嗜血杆菌luxS基因与生物膜的关系 |
| 3.5.7 群体感应系统与副猪嗜血杆菌毒力 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 副猪嗜血杆菌群体感应系统缺失株转录组学及其抵抗热应激机制研究 |
| 4.1 研究的目的与意义 |
| 4.2 试验材料 |
| 4.2.1 主要试剂 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.2.3 实验数据分析软件 |
| 4.2.4 试验菌株 |
| 4.2.5 PCR引物 |
| 4.2.5.1 定量检测引物 |
| 4.2.5.2 副猪嗜血杆菌rse A和 rpo E基因缺失株构建引物 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 RNA-Seq测序样品的准备 |
| 4.3.2 细菌RNA的提取 |
| 4.3.3 RNA样品中DNA的去除 |
| 4.3.4 反转录cDNA |
| 4.3.5 RNA-Seq测序与分析 |
| 4.3.5.1 总RNA样品检测 |
| 4.3.5.2 文库构建 |
| 4.3.5.3 库检和测序 |
| 4.3.5.4 生物信息分析 |
| 4.3.6 荧光定量PCR |
| 4.3.7 副猪嗜血杆菌rse A和 rpo E基因缺失株的构建及生长曲线的测定 |
| 4.3.8 热应激试验 |
| 4.3.9 统计学分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 RNA样品的质量检测 |
| 4.4.1.1 RNA样品的浓度测定 |
| 4.4.1.2 RNA样品的电泳检测 |
| 4.4.1.3 RNA测序样品的选择 |
| 4.4.2 测序数据质量评估 |
| 4.4.3 参考序列比对分析 |
| 4.4.4 基因表达水平分析 |
| 4.4.5 RNA-Seq样品质量评估 |
| 4.4.6 RNA-Seq差异表达基因 |
| 4.4.7 RNA-Seq差异基因GO富集 |
| 4.4.8 差异基因KEGG富集分析 |
| 4.4.9 差异基因的RT-q PCR验证 |
| 4.4.10 副猪嗜血杆菌rseA基因缺失株和rpoE基因缺失株的构建及验证 |
| 4.4.11 HPS2,Δrse A和 Δrpo E菌株的生长特性 |
| 4.4.12 rse A和 rpo E基因对副猪嗜血杆菌抵抗热应激的影响 |
| 4.4.13 副猪嗜血杆菌热应激相关调节基因的转录水平 |
| 4.5 讨论 |
| 4.5.1 转录组测序样品的准备 |
| 4.5.2 测序数据的处理和质量评估 |
| 4.5.3 基因表达水平分析 |
| 4.5.4 差异表达基因功能分析 |
| 4.5.5 差异基因富集分析 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 受体蛋白RbsB1在副猪嗜血杆菌群体感应系统中的作用 |
| 5.1 研究的目的与意义 |
| 5.2 试验材料 |
| 5.2.1 主要试剂 |
| 5.2.2 主要质粒菌株 |
| 5.2.3 主要仪器 |
| 5.2.4 主要培养基的配置 |
| 5.2.5 主要PCR引物 |
| 5.2.5.1 HPS2 rbs B1 基因缺失株构建引物 |
| 5.2.5.2 PCR引物 |
| 5.3 试验方法 |
| 5.3.1 rbsB1基因序列的同源性分析 |
| 5.3.2 副猪嗜血杆菌rbsB1基因缺失株的构建、验证及生长曲线的测定 |
| 5.3.3 RbsB1蛋白的表达 |
| 5.3.3.1 重组质粒pet28a-rbs B1 的构建 |
| 5.3.3.2 RbsB1蛋白的诱导表达 |
| 5.3.3.3 RbsB1蛋白的纯化 |
| 5.3.3.4 RbsB1蛋白的检测 |
| 5.3.4 rbsB1基因转录水平的定量检测 |
| 5.3.5 AI-2分子的检测 |
| 5.3.6 统计学分析 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 rbsB1基因在不同菌株中的同源性 |
| 5.4.2 rbsB1基因在不同菌株中的转录水平 |
| 5.4.3 副猪嗜血杆菌rbsB1基因缺失株的构建及验证 |
| 5.4.4 HPS2和Δrbs B1 菌株生长曲线的测定 |
| 5.4.5 RbsB1蛋白的表达与鉴定 |
| 5.4.6 HPS2和Δrbs B1 菌株培养上清中AI-2 分子的表达水平 |
| 5.4.7 Rbs B1 蛋白与AI-2 分子的相互作用 |
| 5.5 讨论 |
| 5.5.1 rbsB1基因的同源性分析 |
| 5.5.2 Rbs B1 受体蛋白与群体感应系统AI-2 分子的相互作用 |
| 5.6 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 基本信息 |
| 致谢 |
（4）江西猪源致病性ETEC耐药性与耐药性消除研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 综述 |
| 1 大肠杆菌病 |
| 1.1 大肠杆菌概述 |
| 1.2 致病性大肠杆菌 |
| 1.3 致病性大肠杆菌的分类 |
| 1.4 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) |
| 1.5 检测技术 |
| 1.6 致病性大肠杆菌的防治方法 |
| 2 猪源大肠杆菌耐药性研究 |
| 2.0 猪源大肠杆菌耐药现状 |
| 2.1 猪源大肠杆菌的耐药机制 |
| 2.2 β-内酰胺类的耐药基因及耐药机制 |
| 2.3 氨基糖苷类的耐药基因及耐药机制 |
| 2.4 四环素类的耐药基因及耐药机制 |
| 2.5 氯霉素类的耐药基因及耐药机制 |
| 2.6 磺胺类的耐药基因及耐药机制 |
| 2.7 喹诺酮类的耐药基因及耐药机制 |
| 2.8 大肠杆菌耐药性的检测方法 |
| 3 中药消除大肠杆菌耐药性的研究 |
| 3.1 中药对大肠杆菌的抑菌作用 |
| 3.2 中药对耐药性大肠杆菌的抑制作用 |
| 3.3 中药对大肠杆菌耐药性的消除作用 |
| 4 选题目的、意义和主要内容 |
| 第二章 猪源ETEC的分离鉴定及致病性检测 |
| 1 材料 |
| 1.1 参考菌株 |
| 1.2 病料来源 |
| 1.3 主要培养基 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 大肠杆菌的分离鉴定 |
| 2.2 大肠杆菌16SrDNA鉴定 |
| 2.3 单重PCR检测方法的建立 |
| 2.4 双重PCR检测方法的建立 |
| 2.5 分离菌双重PCR的检测与测序分析 |
| 2.6 小鼠致病性试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 大肠杆菌分离鉴定结果 |
| 3.2 不同地区大肠杆菌的分离情况 |
| 3.3 单重PCR检测方法的建立 |
| 3.4 双重PCR检测方法的建立 |
| 3.5 大肠杆菌分离株毒力基因检测结果 |
| 3.6 小鼠致病性试验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 猪源大肠杆菌的分离鉴定 |
| 4.2 双重PCR检测方法的建立 |
| 4.3 猪源ETEC分离株毒力基因的检测 |
| 4.4 菌株毒力基因与其致病性的相关性分析 |
| 5 小结 |
| 第三章 猪源ETEC耐药性的检测与分析 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验菌株 |
| 1.2 主要培养基 |
| 1.3 主要试剂与药品 |
| 1.4 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 药敏试验 |
| 2.2 耐药基因的检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 药敏试验结果 |
| 3.2 40株ETEC分离株多重耐药性分析 |
| 3.3 耐药基因检测结果 |
| 3.4 耐药基因序列测定情况 |
| 3.5 14种耐药基因总体检出率 |
| 3.6 耐药表型与耐药基因的相关性分析 |
| 3.7 菌株毒力与耐药性的相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 猪源ETEC耐药性分析 |
| 4.2 ETEC耐药基因检测与分析 |
| 4.3 菌株耐药表型和基因型的关系 |
| 4.4 菌株毒力与耐药性的关系 |
| 5 小结 |
| 第四章 中药对猪源ETEC耐药性的消除 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验菌株 |
| 1.2 主要培养基 |
| 1.3 主要药品及试剂 |
| 1.4 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 主要实验材料的制备 |
| 2.2 中药水煎液对ETEC的抑菌作用 |
| 2.3 四环素对ETEC的 MIC测定 |
| 2.4 ETEC对四环素耐药消除剂的筛选 |
| 2.5 ETEC耐药性的消除 |
| 2.6 耐药性消除前后菌株的变化 |
| 3 结果 |
| 3.1 中药水煎液对ETEC的抑菌作用 |
| 3.2 四环素对ETEC的 MIC检测结果 |
| 3.3 ETEC对四环素耐药消除剂的筛选 |
| 3.4 中药对ETEC的耐药性消除结果 |
| 3.5 中药作用前后ETEC的质粒检测结果 |
| 3.6 ETEC耐药性消除前后的耐药表型比较 |
| 3.7 ETEC耐药性消除前后MIC的比较 |
| 3.8 ETEC耐药性消除前后耐药基因的比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中药对大肠杆菌的抑菌作用 |
| 4.2 中药对ETEC耐药性的消除作用 |
| 4.3 中药作用后ETEC质粒条带的变化 |
| 4.4 中药作用后ETEC耐药表型的变化 |
| 4.5 中药作用后ETEC的 MIC变化 |
| 4.6 中药作用后ETEC耐药基因的变化 |
| 4.7 中药消除细菌耐药性的不足 |
| 5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间发表文章 |
（5）广西不同养殖模式猪源大肠杆菌耐药表型差异性分析（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 1.1样品采集 |
| 1.2主要试剂 |
| 1.3大肠杆菌分离鉴定 |
| 1.4药敏试验 |
| 1.5数据处理分析 |
| 2结果与分析 |
| 2.1大肠杆菌分离鉴定 |
| 2.2耐药表型检测结果 |
| 2.3猪源大肠杆菌在不同养殖模式中的耐药性差异分析 |
| 2.4猪源致病性大肠杆菌在不同养殖模式中的多重耐药性差异比较 |
| 3讨论 |
（6）河南省猪源大肠杆菌耐药性调查及部分耐药基因分布特征研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| 第一章 综述 |
| 1 大肠杆菌概述 |
| 1.1 病原学 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.3 临床症状 |
| 1.4 致病性 |
| 2 猪源大肠杆菌耐药性研究进展 |
| 2.1 耐药现状 |
| 2.2 多重耐药现状 |
| 3 猪源大肠杆菌耐药基因的研究进展 |
| 3.1 耐药基因floR的研究进展 |
| 3.2 耐药基因CTX-M的研究进展 |
| 3.3 耐药基因mcr-1的研究进展 |
| 4 细菌耐药性检测方法研究进展 |
| 5 细菌耐药性的危害 |
| 6 研究目的意义 |
| 第二章 河南省猪源大肠杆菌的临床耐药性调查 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 样本 |
| 2.1.2 标准菌株 |
| 2.1.3 试剂 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 样本采集 |
| 2.2.2 预增菌 |
| 2.2.3 大肠杆菌分离纯化 |
| 2.2.4 大肠杆菌鉴定 |
| 2.2.5 微量肉汤稀释法抗菌药物敏感性实验 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 大肠杆菌分离鉴定结果 |
| 3.2 大肠杆菌分离株的耐药率 |
| 3.2.1 同一年份不同地区大肠杆菌的耐药率 |
| 3.2.2 不同年份同一地区大肠杆菌的耐药率 |
| 3.3 大肠杆菌的耐药谱 |
| 3.3.1 2013年大肠杆菌耐药谱 |
| 3.3.2 2014年大肠杆菌耐药谱 |
| 3.3.3 2015年大肠杆菌耐药谱 |
| 3.3.4 2016年大肠杆菌耐药谱 |
| 3.3.5 2017年大肠杆菌耐药谱 |
| 3.3.6 2018年大肠杆菌耐药谱 |
| 3.4 大肠杆菌的多重耐药情况 |
| 4 讨论 |
| 4.1 猪源大肠杆菌对常用抗菌药的耐药率 |
| 4.2 猪源大肠杆菌的耐药谱和多重耐药情况 |
| 4.3 猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药临床表型特征 |
| 4.4 猪源大肠杆菌头孢噻呋耐药临床表型特征 |
| 4.5 猪源大肠杆菌粘杆菌素耐药临床表型特征 |
| 5 小结 |
| 第三章 猪源大肠杆菌耐药基因floR、CTX-M、mcr-1多重PCR检测方法的建立 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌株 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 引物设计 |
| 2.2.2 大肠杆菌模板DNA的制备 |
| 2.2.3 单基因PCR的扩增及测序 |
| 2.2.4 多重PCR方法的建立 |
| 2.2.5 多重PCR方法的验证 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 单基因PCR扩增和测序结果 |
| 3.2 多重PCR方法条件优化 |
| 3.2.1 引物浓度优化结果 |
| 3.2.2 退火温度优化结果 |
| 3.2.3 循环次数优化结果 |
| 3.3 多重PCR方法验证 |
| 3.3.1 多重PCR特异性实验结果 |
| 3.3.2 多重PCR敏感性实验结果 |
| 3.3.3 多重PCR灵敏度实验结果 |
| 3.3.4 多重PCR重复性实验结果 |
| 3.3.5 多重PCR符合性实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 河南省猪源大肠杆菌耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的分子流行病学调查 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌株 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 细菌培养 |
| 2.2.2 模板DNA的制备 |
| 2.2.3 耐药基因的检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 耐药基因的PCR检出结果 |
| 3.2 耐药基因的分子流行病学分析 |
| 3.2.1 同一年份不同地区大肠杆菌的耐药基因检出率 |
| 3.2.2 不同年份同一地区大肠杆菌的耐药基因分析 |
| 3.2.3 耐药基因与耐药表型相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
（7）安徽部分猪场产肠毒素大肠杆菌分离鉴定、生物学特性及灭活疫苗的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略符号 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 产肠毒素大肠杆菌概述 |
| 1 仔猪黄白痢特征 |
| 2 ETEC的致病因子研究进展 |
| 2.1 病原学 |
| 2.2 血清型 |
| 2.3 致病因子 |
| 3 ETEC的耐药性研究进展 |
| 3.1 ETEC的耐药性现状 |
| 3.2 ETEC的耐药机制 |
| 4 ETEC疫苗的研究概况 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第二章 仔猪ETEC的分离及血清型鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 采集样本 |
| 1.2 试验仪器与试剂 |
| 1.3 引物 |
| 1.4 样本处理 |
| 1.5 分离鉴定 |
| 1.6 血清型鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 样品采集与菌株分离 |
| 2.2 ETEC菌株的鉴定 |
| 2.3 血清型鉴定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 仔猪ETEC的耐药性及毒力测定 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试验仪器与试剂 |
| 1.3 药敏试验 |
| 1.4 ETEC菌株的致病力测定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 药敏试验 |
| 2.2 致病力测定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 ETEC灭活疫苗对小鼠的保护效果研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试验仪器与试剂 |
| 1.3 灭活疫苗制备方法 |
| 1.4 单价灭活疫苗免疫效果评估 |
| 1.5 二价灭活疫苗免疫效果评估 |
| 1.6 抗体效价测定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同优势血清型单价灭活苗对小鼠的保护效果 |
| 2.2 二价灭活苗对小鼠的保护效果 |
| 2.3 抗体效价测定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 硕士期间发表论文 |
| 致谢 |
（8）苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌（ETEC）流行病学调查及灭活疫苗初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略符号 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 产肠毒素大肠杆菌概述 |
| 1 仔猪腹泻特征 |
| 2 产肠毒素大肠杆菌的研究进展 |
| 2.1 病原学 |
| 2.2 形态特征及培养特点 |
| 2.3 鉴定方法 |
| 2.4 血清型 |
| 2.5 毒力因子 |
| 2.6 产肠毒素大肠杆菌的致病机制 |
| 3 大肠杆菌耐药性的研究进展 |
| 3.1 大肠杆菌耐药现状 |
| 3.2 大肠杆菌的耐药机制 |
| 3.3 大肠杆菌耐药性检测技术 |
| 4 猪大肠杆菌疫苗的研究进展 |
| 4.1 大肠杆菌灭活疫苗概况 |
| 5 仔猪腹泻的防治措施 |
| 5.1 饲养管理 |
| 5.2 药物防治 |
| 5.3 免疫防控 |
| 6 结语 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第二章 产肠毒素大肠杆菌的分离鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 临床采样 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.3 培养基 |
| 1.4 参考菌株 |
| 1.5 引物 |
| 1.6 病料处理 |
| 1.7 分离鉴定 |
| 1.8 血清型鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 采样与疑似菌株的分离 |
| 2.2 分离鉴定 |
| 2.3 血清型鉴定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 产肠毒素大肠杆菌生物学特性分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 菌株和动物 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 培养基 |
| 1.4 引物 |
| 1.5 毒力基因的检测 |
| 1.6 药敏试验 |
| 1.7 致病力测定试验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 毒力基因检测 |
| 2.2 药敏试验 |
| 2.3 致病力测定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 产肠毒素大肠杆菌灭活疫苗初步研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 菌株和动物 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 培养基 |
| 1.4 灭活疫苗的制备方法 |
| 1.5 最适免疫剂量测定 |
| 1.6 单价灭活疫苗的免疫效果评估 |
| 1.7 二价灭活疫苗的免疫效果评估 |
| 1.8 血清抗体效价测定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 最适免疫剂量测定 |
| 2.2 不同致病力菌株免疫效果比较 |
| 2.3 单价灭活疫苗免疫效果评估 |
| 2.4 二价灭活疫苗免疫效果评估 |
| 2.5 血清抗体效价比较 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 致谢 |
（9）北京地区仔猪腹泻相关病原调查及大肠杆菌和轮状病毒特性的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写表 |
| 图表清单 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 文献综述 |
| 1.1.1 规模化猪场仔猪腹泻的病原概述 |
| 1.1.2 仔猪源大肠杆菌 |
| 1.1.3 猪轮状病毒 |
| 1.2 本课题的研究内容及技术路线 |
| 1.2.1 研究内容 |
| 1.2.2 技术路线 |
| 1.2.3 论文选题的意义和目的 |
| 第二章 北京地区规模化猪场仔猪腹泻相关病原调查 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 调查范围 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 相关溶液的配制 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 病例来源及检测 |
| 2.2.2 细菌学检测 |
| 2.2.3 病毒学检测 |
| 2.3 试验结果 |
| 2.3.1 细菌学检测 |
| 2.3.2 病毒学检测 |
| 2.3.3 混合感染检测 |
| 2.4 讨论与分析 |
| 2.4.1 细菌性仔猪腹泻 |
| 2.4.2 病毒性仔猪腹泻 |
| 第三章 北京地区仔猪大肠杆菌生物学特性及其毒力因子检测 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 分离毒株及参考毒株 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 相关溶液的配制 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 细菌分离及纯化 |
| 3.2.2 待检菌株的生化鉴定 |
| 3.2.3 大肠杆菌O血清型鉴定 |
| 3.2.4 大肠杆菌主要毒力因子检测 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.3.1 大肠杆菌的培养特性与形态特征 |
| 3.3.2 大肠杆菌生化特性 |
| 3.3.3 血清型鉴定 |
| 3.3.4 毒力因子检测 |
| 3.4 讨论与分析 |
| 3.4.1 仔猪致病性大肠杆菌的血清型 |
| 3.4.2 仔猪致病性大肠杆菌的毒力因子 |
| 第四章 仔猪腹泻大肠杆菌全基因组测序及分析 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 分离毒株及参考毒株 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 相关溶液的配制 |
| 4.1.4 主要仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 细菌分离及纯化 |
| 4.2.2 细菌基因组提取 |
| 4.2.3 细菌测序方法 |
| 4.2.4 基因组序列拼接及质检标准 |
| 4.2.5 基因预测和注释 |
| 4.2.6 基因组多序列比对 |
| 4.2.7 两株细菌膜蛋白功能相关基因比较 |
| 4.3 试验结果 |
| 4.3.1 基因组拼接结果统计 |
| 4.3.2 两株细菌比较特异基因分析 |
| 4.3.3 两株细菌ORF注释及基因功能分析 |
| 4.3.4 两株细菌SNP和InDel分析 |
| 4.3.5 基因组多序列比对分析 |
| 4.3.6 两株细菌膜蛋白基因分析 |
| 4.4 讨论与分析 |
| 第五章 北京地区猪轮状病毒感染的流行病学调查 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 调查范围 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 相关溶液的配制 |
| 5.1.4 主要仪器 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 病例来源及检测 |
| 5.2.2 病猪的临床症状 |
| 5.2.3 病猪的病理变化观察 |
| 5.2.4 病猪的病理组织学观察 |
| 5.3 猪轮状病毒感染的流行病学调查结果 |
| 5.3.1 猪轮状病毒感染的发病季节及发病日龄调查 |
| 5.3.2 猪轮状病毒感染的临床症状 |
| 5.3.3 猪轮状病毒感染的病理变化 |
| 5.3.4 猪轮状病毒感染的病理组织学观察 |
| 5.4 讨论与分析 |
| 第六章 北京地区猪轮状病毒的分离、鉴定及致病性研究 |
| 6.1 试验材料 |
| 6.1.1 细胞及病料来源 |
| 6.1.2 主要试剂 |
| 6.1.3 相关溶液的配制 |
| 6.1.4 主要仪器 |
| 6.2 试验方法 |
| 6.2.1 病料的采集 |
| 6.2.2 病毒的分离培养 |
| 6.2.3 病毒的鉴定 |
| 6.2.4 对仔猪致病性试验 |
| 6.3 试验结果 |
| 6.3.1 轮状病毒的分离 |
| 6.3.2 轮状病毒的鉴定 |
| 6.3.3 轮状病毒感染仔猪试验 |
| 6.4 讨论与分析 |
| 6.4.1 病料的采集时间 |
| 6.4.2 胰酶浓度摸索 |
| 6.4.3 细胞超薄切片电镜观察 |
| 6.4.4 猪轮状病毒基因序列测定与比对 |
| 第七章 总结 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录：菌株B中69个特有参与膜转运相关基因序列 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）河南地区猪源性大肠杆菌血清型鉴定与耐药性调查（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 供试动物 |
| 1.2 主要试剂及材料 |
| 1.3 细菌分离及纯培养 |
| 1.4 细菌鉴定 |
| 1.4.1 生化试验 |
| 1.4.2 致病性试验 |
| 1.5 细菌血清型鉴定 |
| 1.6 细菌耐药性试验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 细菌培养特性 |
| 2.2 细菌鉴定结果 |
| 2.2.1 生化试验结果 |
| 2.2.2 致病性试验结果 |
| 2.3 血清型鉴定 |
| 2.4 耐药性的检测结果 |
| 3 结论与讨论 |
| 3.1 河南地区规模化猪场猪大肠杆菌血清型特点 |
| 3.2 河南地区猪大肠杆菌耐药性 |
四、规模化猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流行病学调查（论文参考文献）
- [1]改进“葛根芩连汤”在治疗禽大肠杆菌病中的应用研究[D]. 李相府. 扬州大学, 2020(04)
- [2]广西规模化猪场猪源大肠杆菌耐药表型和耐药基因检测及相关性分析[J]. 冯世文,李军,李常挺,许力士,潘艳,胡帅,钟舒红,贺会利. 中国兽医学报, 2020(06)
- [3]副猪嗜血杆菌LuxS/AI-2群体感应系统研究[D]. 张丙周. 华中农业大学, 2020(02)
- [4]江西猪源致病性ETEC耐药性与耐药性消除研究[D]. 黄萃. 江西农业大学, 2020(07)
- [5]广西不同养殖模式猪源大肠杆菌耐药表型差异性分析[J]. 冯世文,李军,潘艳,贺会利,彭昊,钟舒红,胡帅,杨威. 湖北农业科学, 2020(01)
- [6]河南省猪源大肠杆菌耐药性调查及部分耐药基因分布特征研究[D]. 李孟. 河南农业大学, 2019(04)
- [7]安徽部分猪场产肠毒素大肠杆菌分离鉴定、生物学特性及灭活疫苗的初步研究[D]. 张鹏. 南京农业大学, 2019(08)
- [8]苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌（ETEC）流行病学调查及灭活疫苗初步研究[D]. 杨德鸿. 南京农业大学, 2018(07)
- [9]北京地区仔猪腹泻相关病原调查及大肠杆菌和轮状病毒特性的研究[D]. 王振玲. 中国农业大学, 2014(03)
- [10]河南地区猪源性大肠杆菌血清型鉴定与耐药性调查[J]. 王克领,张青娴,徐引弟,郎利敏,张立宪,李海利,朱文豪,游一,郑万录. 河南农业科学, 2014(09)