一、雌二醇对拟痴呆小鼠学习记忆功能的影响（论文文献综述）
刘玥欣[1]（2021）在《基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究》文中研究说明目的:本研究基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽（Velvet antler peptide,VAP）对神经元修复及保护作用,阐释VAP改善轻度认知功能障碍（Mild Cognitive Impairment,MCI）作用机制,为临床鹿茸防治MCI提供依据。方法:本研究利用体内、体外实验,探讨VAP通过调控PI3K/AKT信号通路改善MCI作用机制。1 VAP鉴定及检测利用双缩脲法鉴定VAP理化性质;利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验（SDSPolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）测定VAP分子量;利用柱前衍生化-高效液相色谱法（Precolumn derivatization-High performance liquid chromatography,PD-HPLC）测定VAP不同成分含量。2基于网络药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制利用TCMID数据库、Pubchem数据库筛选鹿茸活性成分及靶点;利用OMIM数据库、Disgenet数据库、Genecards数据库筛选MCI作用靶点;利用Venny 2.1在线作图工具平台筛选鹿茸-MCI作用靶点;利用STRING 11.0蛋白质互作平台构建蛋白-蛋白相互作用（Protein-protein interaction,PPI）网络,利用Cytoscape 3.8.0网络拓扑属性分析软件,基于拓扑分析、聚类分析筛选PPI网络核心靶点;利用Cytoscape 3.8.0网络拓扑属性分析软件构建“中药-成分-靶点-疾病”网络模型,分析核心成分;利用R语言及Bioconductor生物信息软件,进行基因本体论（Gene ontology,GO）富集分析以及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）富集分析,对共同靶点所涉及的生物学过程、主要代谢通路等进行归纳。3基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制采用腹腔注射东莨菪碱法、单侧颈总动脉结扎法分别诱导不同MCI大鼠模型。利用旷场实验、Morris水迷宫实验观察VAP对不同MCI模型大鼠行为学变化的影响;利用苏木精-伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）观察VAP对不同MCI模型大鼠海马区病理学变化的影响;利用ELISA检测VAP对不同MCI模型大鼠血清中SOD、MDA、脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、睾酮（Testosterone,T）、皮质醇（Cortisol）含量变化的影响;利用Western Blot检测VAP对不同MCI模型大鼠海马区PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。4基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制利用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间二级质谱联用（UPLC-Q/TOF-MS）代谢组学技术对由腹腔注射东莨菪碱法复制的MCI模型大鼠脑组织、肾脏进行检测,分析各组间差异代谢物、代谢通路动态变化情况。5基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由冈田酸（Okadaic acid,OA）诱导的受损HT22细胞的作用机制利用OA诱导HT22细胞损伤建立模型,给药后,利用CCK-8法检测HT22细胞活性,WST-1法、可分光光度法检测HT22细胞中超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-PX）活力或含量变化的影响,Western Blot检测HT22细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平。结果:1 VAP鉴定及检测实验中选用的VAP理化性质为蛋白质,分子量约为3.2k Da,由17种氨基酸组成,其中必须氨基酸共有7种,含量为393.39±1.65g/kg,氨基酸总含量为826.55±10.75g/kg,不同成分含量稳定,可用于本实验研究。2基于网络药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制鹿茸中多数活性成分为VAP中的重要构建物质,利用交互网络发现鹿茸活性成分可能通过PI3K/AKT信号通路发挥改善MCI作用,作用机制可能与调控体内神经信号转导、神经元损伤、氧化应激过程、性激素类作用等途径相关,为本研究探讨VAP对MCI的改善作用提供方法与思路。3基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制VAP能够提高不同MCI模型大鼠学习、记忆能力,改善海马区固缩现象,增加不同MCI模型大鼠血清中SOD、BDNF、NGF、VEGF、T、Cortisol含量（P<0.05或P<0.01）,减少MDA含量（P<0.05或P<0.01）,升高Bcl-2、m TOR表达水平（P<0.05或P<0.01）,降低Bad、Bax、Caspase-3蛋白表达水平（P<0.05或P<0.01）,上调PI3K/AKT信号通路的表达（P<0.05或P<0.01）。4基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍作用机制可能与调控脑内叶酸及脂质代谢、环磷酸腺苷能量循环、氨基酸生物合成,以及肾脏中性激素分泌等多种途径相关。5基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由冈田酸（Okadaic acid,OA）诱导的受损HT22细胞的作用机制VAP能够提高受损HT22细胞存活率（P<0.01）,增强受损HT22细胞中SOD、GSH-PX活力（P<0.01）,减少MDA含量（P<0.01）,降低Bad、Bax、Caspase-3蛋白表达水平（P<0.01）,上调PI3K/AKT信号通路的表达（P<0.01）。结论:VAP可能通过“填精补髓”作用调控PI3K/AKT信号通路,拮抗由OA诱导的受损HT22细胞,并提高不同MCI模型大鼠学习、记忆能力,调节肾脏功能、促进神经元细胞生长、增殖与分化,保护中枢神经系统,作用机制可能与调控脑内叶酸及脂质代谢、环磷酸腺苷能量循环、氨基酸生物合成,以及肾脏中性激素分泌等多种途径相关。
于礼潇[2]（2020）在《雌二醇对绝经模型小鼠认知功能的影响》文中认为目的:探索雌二醇对绝经模型小鼠空间学习记忆能力的影响,及其分子机制的研究以探索雌激素对认知功能的保护作用。方法:随机选取9-10周龄雌性昆明小鼠40只,通过手术切除双侧卵巢,建立绝经模型小鼠,术后将其随机分为四组,每组10只,分别以不同剂量苯甲酸雌二醇进行腹腔注射30天:A组（小剂量组10μg/kg/d）、B组（中剂量组100μg/kg/d）、C组（高剂量组1000μg/kg/d）,并选取D组为模型对照组。30天后进行水迷宫实验对其空间学习记忆能力进行检测。免疫组化检测海马CA1区:脑源性神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor,BDNF）、N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基2B亚单位（NR2B subunit of N-methyl-D-aspartic acid receptor,NR2B）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）凋亡蛋白的表达。结果:1、在水迷宫实验的定位航行实验中:与模型对照组D组比较,A、B、C三组小鼠其逃避潜伏期均显着缩短（P<0.05）,与A组比较,B组和C组小鼠的逃避潜伏期均显着缩短（P<0.05）;与C组比较,A组和B组小鼠的逃避潜伏期明显更长（P<0.05）;在空间探索实验中:与模型对照组D组比较,A、B、C三组小鼠穿越原平台次数存在明显差异（P<0.05）,与A组比较,B组和C组小鼠穿越原平台次数显着更多（P<0.05）,与C组比较,A组和B组小鼠的穿越原平台次数明显减少（P<0.05）;2、免疫组化学结果显示:A组、B组和C组较D组相比的NR2B、BDNF表达水平高、活化的Caspase-3表达低,差异有统计学意义（P<0.05）,C组NR2B、BDNF表达水平明显高于其他三组,差异有统计学意义（P<0.05）、活化的Caspase-3凋亡蛋白表达水平明显低于其他三组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:雌激素有助于提高绝经模小鼠的学习和记忆能力,改善绝经模型小鼠认知功能,其机制可能与雌激素促进NR2B、BDNF的表达、降低凋亡蛋白活化的Caspase-3的表达有关,一定治疗剂量内雌激素越高可能更能提高急性去卵巢绝经模型小鼠学习及记忆能力。
李建涛[3]（2019）在《鹰嘴豆芽素A对脑缺血再灌注损伤模型鼠及痴呆模型鼠的神经保护作用》文中研究指明目的通过研究不同剂量鹰嘴豆芽素A（Bio A）对小鼠脑缺血再灌注损伤模型及D-半乳糖联合氢溴酸东莨菪碱致痴呆模型的作用效果,探讨其神经保护机制。方法本实验分两个部分,第一部分为小鼠脑缺血再灌注损伤模型实验,第二部分为D-半乳糖联合氢溴酸东莨菪碱致痴呆模型实验。脑缺血再灌引起损伤模型实验中:采用双侧颈总动脉结扎法（BCCAo）来制造小鼠脑缺血再灌注损伤模型,并通过Y迷宫评估假手术组、模型组和Bio A治疗组（5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg）的学习和记忆改变情况;利用试剂盒分别测定实验小鼠脑皮质和海马组织中的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力的数值以及检测丙二醛（MDA）的含量;通过HE染色法观察实验小鼠大脑海马的CA1区神经细胞结构的变化情况。D-半乳糖联合氢溴酸东莨菪碱致痴呆模型实验中:采用D-半乳糖联连续颈背部皮下注射联合腹腔注射氢溴酸东莨菪碱的方法加速小鼠老化,阳性对照组和各治疗组分别灌胃给予β-雌二醇（0.35 mg/kg）和Bio A组（5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg）,其余各组给予生理盐水,学习记忆测试采用Y迷宫测试法,再利用试剂盒测定小鼠脑皮质和海马组织中的抗氧化指标（SOD、GSH-Px活力和MDA含量）,采用HE染色的方法,观察痴呆小鼠海马CA1区神经细胞形态结构变化情况。结果脑缺血再灌注引起损伤模型实验中:Y迷宫结果显示Bio A高剂量（20 mg/kg）治疗组的小鼠学习和记忆能力改善明显,大脑皮质区SOD和GSH-Px活力明显升高,各治疗组的小鼠皮质区MDA含量明显下降,且HE染色结果显示Bio A治疗组的海马CA1区神经元细胞均存在修复表现,其中,高剂量组修复表现最好。D-半乳糖联合氢溴酸东莨菪碱致痴呆模型实验中:Y迷宫检测提示Bio A治疗组和阳性对照组的学习和记忆正确次数均高于模型组,Bio A可提高大脑皮质区和海马区组织中SOD和GSH-Px活力,并降低MDA含量。显微镜下观察HE染色的病理切片提示Bio A治疗的小鼠海马CA1区神经细胞存在修复现象。所有测试结果均呈现一定的剂量正相关性。结论Bio A能在脑缺血再灌注损伤模型小鼠大脑区发挥抗氧化作用,清除自由基,使氧化与抗氧化过程趋于平衡,保护小鼠大脑海马CA1区的细胞,改善其学习和记忆能力。除此之外,Bio A还可以提高D-半乳糖联合氢溴酸东莨菪碱致痴呆模型小鼠大脑皮质和海马组织中SOD和GSH-Px活力,降低MDA含量,对损伤的小鼠大脑皮质和海马组织中的神经细胞结构具有一定的修复作用,改善痴呆小鼠的学习和记忆能力。
梁克山[4]（2019）在《P38MAPK抑制剂、雌二醇和TPX2对痴呆鼠模型海马神经细胞损害的保护作用及认知功能的影响》文中认为引言痴呆是以认知功能进行性减退为特征的综合征,是一种渐进的、退化的脑部疾病,导致认知和情感功能的丧失,最常见于记忆,而其他功能如语言、行为以及最显着的执行功能也常常受损。据估计,全世界约有2400万人患有痴呆症,到2040年,这一数字将增加3至4倍。大约60%是阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）,10%～20%为血管性痴呆（vascular dementia,VaD）,分别占痴呆的第一、二位,其发病机制尚未完全明了。AD特征性病理改变为颞叶海马出现β淀粉样蛋白沉积形成的细胞外老年斑和tau蛋白过度磷酸化形成的神经细胞内神经原纤维缠结,VaD是由于缺血、出血、低灌注、栓塞、小血管病等血管因素及事件致认知领域损害。在影像学方面,AD是以海马、颞、顶叶皮质萎缩为主的弥漫性萎缩,VaD表现为认知相关区（额叶、颞叶、海马、顶叶、角回、丘脑等）的血管事件（梗死、出血、脑白质病变、腔隙性梗死）。除家族史和一些躯体疾病外,导致痴呆的危险因素主要有:年龄、性别、较低教育、经济水平等。两者在临床表现上各有特点。但在临床实际工作中常难以鉴别。有证据表明,相当部分的AD具有脑血管方面的病理改变,这可能是老龄化的表现之一,也有可能是AD与VaD混合状态的表现之一。同样地,VaD患者脑组织病理检查可以发现诸如老年斑之类AD改变,这可能是混合性痴呆的结果,与正常的老年化进程有关。这就导致人们对这两种疾病的关系和鉴别产生了浓厚的兴趣,这些问题的研究有助于对痴呆发生的病理机制有更加深人的了解,对临床干预策略的制定有很大的推动作用。海马是神经系统中与人类的学习与记忆关系密切的重要功能区,大脑的海马体不但是老年痴呆最早最重要的病变区域,而且也是血管性痴呆的重要受损部位,以往的研究表明,海马神经元凋亡在AD和VaD的发病中均起着重要的作用,并且对缺血低灌注损伤具有明显的易感性。阿尔茨海默氏病（阿尔茨海默病）是一种进行性神经退行性疾病,最终导致神经元不可逆性损伤以及各种智力缺陷,包括认知和记忆。AD已成为重要的公共卫生问题,其症状主要包括躯体、认知、情绪功能的障碍,以及长期的认知和感觉功能退化,这些均明显影响患者的生活质量。当前已有大量有关AD发生和发展方面的研究,并已取得显着成绩,但是这些研究仍然无法提供有效的疾病诊断和治疗技术。这种紧迫的需求激发了神经科学界及医疗行业对AD治疗方法发展的兴趣。根据经典的淀粉样蛋白假说,相对于其他各种淀粉衍生物,Aβ1-42在AD的发病中起着重要的作用。Aβ1-42是由淀粉样前体蛋白（APP）裂解产生的β-分泌酶和γ-分泌酶。Aβ蛋白过量导致淀粉样斑块的形成和各种神经功能障碍包括炎性级联反应的激活启动,tau蛋白磷酸化的推广,氧化应激的增加,细胞内的信号转导通路的管制,突触可塑性的损伤及诱导神经元的凋亡和细胞死亡。越来越多的证据表明,雌二醇可能既促进又会损害记忆相关的过程,因此,雌激素在AD病理过程中所扮演的确切的角色仍然是难以捉摸的。目前,通过向脑内立体定向注射Aβ1-42建立AD小鼠模型。切除小鼠双侧卵巢来观察17β-雌二醇（E2）对AD不同阶段的治疗（早期和晚期）的影响,国内外少见报道,对这一课题的进一步研究无疑具有重要意义。充分证据表明,妇女绝经后循环系统中雌激素水平会突然下降,造成氧化应激风险加大和神经退行过程加快,尤其是那些AD的高危人群。另一方面,实验研究表明,雌性动物（OVX）切除卵巢后的雌激素治疗可改善其学习和记忆过程,提高其在旋臂迷宫和对象识别中的认知能力。在临床情况下,绝经后5年内保持较高雌二醇水平的女性与保持稳定低雌二醇水平的女性相比,前者表现出更优的行为能力。此外,具有较高内源性雌激素水平的绝经后妇女在斯特鲁普任务和空间工作记忆,延迟回忆和数字排序测试方面的能力更为出色。同样,正在服用激素替代疗法的妇女在非空间工作记忆和空间工作记忆任务有更好的反应。然而,也有报道指出雌激素对绝经后妇女认知能力的负面影响。旨在了解这些差异的研究结果表明,若提前应用雌二醇,暴露于Aβ蛋白的神经元所受损伤会显着减少,而若同时或于暴露Aβ蛋白5天后应用雌二醇,神经元则无法获得雌二醇所带来的保护,甚至所受损伤会转而加剧。总之,在阿尔茨海默病的病理过程中雌激素起着微妙又重要的作用,可在不同阶段施加积极或消极的影响。因此,本实验通过研究AD不同病理阶段的17β-雌二醇（E2）治疗（早期和晚期）,全面了解E2在AD病理过程中的角色和评估E2作为预防药物的意义。海马是神经系统中与人类的学习与记忆关系密切的重要功能区,大脑的海马体不但是老年痴呆最先最重要的病变区域,而且也是血管性痴呆的重要受损部位,以往的研究表明,海马神经元凋亡在AD和VaD的发病中均起着重要的作用,但SB202190和SB203580对海马神经元凋亡因子表达和学习记忆能力的影响却少有报道,特别是SB202190和SB203580对海马神经元凋亡和Bcl-2、Caspase-3表达影响的研究国内外未见有报道。为了探讨海马神经元凋亡在AD和VaD中的致病机制以及对认知功能的影响,历时6年课题组做了以下3项课题:1.应用雌二醇对AD痴呆小鼠模型海马神经细胞元凋亡的保护作用机制和认知功能影响进行了研究,本研究利用切除双侧卵巢的小鼠,经侧脑室内注射Aβ1-42的方法建立阿尔茨海默病（AD）模型,并给予雌二醇（E2）治疗,研究Aβ1-42诱导的海马神经毒性及分子机制,评价E2拮抗Aβ1-42诱导的海马神经毒性的效果和分子机制。2.应用p38MAPK抑制剂对VaD痴呆大鼠模型海马神经细胞凋亡的保护作用机制和认知功能影响进行了研究,在这项研究中,我们研究了 SB203580、SB202190对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡和学习记忆能力的影响。观察了 p38 MAPK抑制剂对脑细胞凋亡的保护作用,并借助海马依赖性水迷宫试验检测了大鼠的空间参考学习和记忆能力。3.应用TPX2研究对阿尔茨海默病模型大鼠神经细胞凋亡的保护作用机制。借助海马依赖性水迷宫试验检测了大鼠的空间参考学习和记忆能力。TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡,H E染色观察各组脑组织细胞,Western blot检测ERK和p38 MAPK的表达,采用RT-PCR方法检测MAPK、ERK和p21中mRNA的表达水平。观察了 TPX2对经β1-42处理脑组织的细胞凋亡有保护作用,进一步通过抑制MAPK、ERK和p38蛋白的表达而探讨了其作用机理。总之,课题组通过以上3项研究,旨在进一步阐明p38MAPK抑制剂和雌二醇对痴呆鼠模型海马神经元凋亡的保护作用机制以及对痴呆模型认知功能的影响。第一部分 雌二醇治疗对小鼠阿尔茨海默病模型海马神经元发生及认知功能障碍的早期保护作用目的:本研究利用切除双侧卵巢的小鼠,经侧脑室内注射Aβ1-442的方法建立阿尔茨海默病（AD）模型,并给予雌二醇（E2）治疗。检测Aβ1-42诱导的神经毒性及分子机制;评价E2拮抗Aβ1-42诱导的神经毒性的效果和分子机制。方法:1.双侧卵巢切除术:所有小鼠双侧卵巢切除并立即皮下植入药物,可以持续释放药物60天,内含有E2 0.18毫克。2.动物模型的制备:AD模型组小鼠Aβ1-42（4μg/mouse）,缓慢注射（0.5μl/min）;安慰剂组小鼠注射等量生理盐水（4μg/mouse）。3.BrdU注射:BrdU连续3次腹腔注射,间隔6小时,给药剂量为50mg/kg。4.雌二醇治疗:（1）早期E2治疗:注射BrdU后第7天双侧海马注射Aβ1-42,后给予7天雌二醇皮下注射,3 μg/day。（2）后期E2治疗:注射BrdU后第7天双侧海马注射Aβ1-42,7天后再给予7天雌二醇皮下注射,3 μ g/day。5.Morris水迷宫实验:计算每组小鼠平均游泳速度、延迟时间。在实验的第8天,撤去隐蔽的水面下平台,观察并记录小鼠的游泳速度及登台潜伏期。6.免疫染色:采用NeuN和BrdU免疫染色检测海马神经的生成。7.ELISA检测:检测促黄体生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、雌激素（Estrogen）、孕酮（Progesterone）血清水平。8.RT-PCR:从大脑样本中取出海马组织,在冰上用剪刀将其剪碎。总mRNA采用Trizol试剂提取和RNA反转录与PrimeScriptTMRT试剂盒。9.Western blotting检测信号通路蛋白的表达:从大脑样本中取出海马组织,在冰上用剪刀将其剪碎。蛋白样品的提取采用放射免疫沉淀试验（RIPA）缓冲液。10.cAMP浓度测定:海马组织,在冰上用剪刀将其剪碎。组织颗粒在裂解缓冲液中裂解10分钟,在4℃、14000 rpm离心10分钟,收集上清液并用LANCETM cAMP 384试剂盒测定环磷酸腺苷（cAMP）浓度。11.透射电子显微镜:腹腔麻醉后小鼠,经心脏用2.5%戊二醛灌注并取出海马组织,海马组织继续用2.5%戊二醛固定过夜,在4℃,四氧化锇固定2小时后制作超薄切片（60 nm）,用丙酮脱水和醋酸铀染色。结果:1.小鼠海马注射Aβ1-42后,进行Morris水迷宫测试评,估认知功能,特别是空间学习和记忆能力（图1A）。在培训第1-2天,接受Aβ1-42注射的“老年”鼠在发现可见平台的游泳速度或时间延迟上与对照组相比没有差异,这表明空间学习能力不是在Aβ1-42注射后立即受到影响（P>0.05,n=10;见图1A）。相反,改为隐藏平台培训的第3-7天,Aβ1-42小鼠比对照组小鼠时间延迟更长,这些差异在5-7天显着,这表明记忆功能是在Aβ1-42注射后5天开始明显受损（P<0.01,n=10;见图 1A）。从迷宫中去掉平台后,观察小鼠在每个象限停留的时间比例（图1B）。Aβ1-42小鼠在象限虚拟平台的位置所花费的时间百分比明显减少。在本研究中,通过NeuN和BrdU染色标记海马神经元（图1C）,染色结果显示Aβ1-42模型组小鼠BrdU注射后21到28天,NeuN、BrdU 阳性细胞数量均显着减少（P<0.01,n=10;图1D）。这些结果表明,小鼠海马神经元在接受Aβ1-42注射后发生严重损害。2.为评估E2对AD小鼠病理过程中早期阶段的影响,在造模后立即给予E2治疗（图2C）。与单纯对照组相比,接受E2治疗的对照组海马神经元再生无明显变化,而Aβ1-42小鼠接受E2治疗与未接受E2治疗比较,NeuN和BrdU 阳性细胞显着增加（P<0.01,n=3;图2D）。此外,给予E2治疗后,AD小鼠找到隐藏平台的潜伏期显着降低（P<0.01,n=10;图2A）,在撤出平台的象限所停留的时间比例明显升高（P<0.01,n=10;图2B）。这些研究结果表明,在Aβ1-42小鼠AD病理过程的早期阶段,雌激素治疗增加海马元神经再生并促进认知功能的恢复。3.为评估E2对AD小鼠病理过程中后期阶段的影响,在造模后第7天开始给予E2治疗（图2C）。无论是对照组还是模型组,E2治疗均没有改善海马神经元再生,NeuN和BrdU阳性细胞没有明显变化（P>0.05,n=3;见图3D）。此外,给予E2治疗,并没有降低AD小鼠找到隐藏平台的潜伏期（P>0.05,n=10;见图3A）。在撤出平台的象限停留时间比例没有明显升高（P>0.05,n=10;见图3B）。4.通过测定LH、FSH、雌激素和孕激素的血清水平,确认E2的效果。在E2治疗前FSH,LH,雌激素或孕激素水平没有显着差异（P>0.05,n=6;图4A-D）,但在E2治疗后LH、FSH、雌激素水平显着增加,而孕酮水平明显下降（P<0.01,n=6;图 4A-D）。在早期给与雌二醇的Aβ1-42小鼠,TrkB、BDNF的mRNA及蛋白水平显着上调,而P75NTR表达水平减少（P<0.01,n=3;图4E,F）。这些结果表明,E2诱导的神经发生,至少部分通过BDNF/TrkB通路。对这一途径的下游因子进行了检测（图4E,F）和结果与以前的研究结果相一致,STAT3/CREB/ERK信号通路的激活明显增加（P<0.01,n=3;图4E,F）。本研究还对cAMP水平进行评估,以确认BDNF/TrkB下游信号通路的活化（图4D）。5.与后期E2治疗及未给予E2治疗比较,在早期给与雌二醇的A β 1-42小鼠,NO和ROS的水平明显降低（P<0.01,n=3;图5A）。相应的细胞死亡相关的Cytochrome-c/Bax/Bcl-2/acspase-3 信号通路因子活化下调（P<0.01,n=3;图5B-C）。这些结果表明,E2降低AD病理过程早期阶段海马区的细胞的氧化应激及死亡通路相关因子的活化,促进认知功能的恢复。6.与后期E2治疗及未给予E2治疗比较,在早期给与雌二醇的Aβ1-42小鼠,胶质细胞增生显着降低（P<0.01,n=3:图6A,B）。E2介导的炎症反应,上调抗炎信号通路的因子活化（CD206,FIZZ1,1、TGFβ）并下调促炎信号通路因子的活化（IL-1β,TNF 和 IL-6。P<0.01,n=3;图 6C-E）。7.在本研究中,使用透射电镜观察海马突触的超微结构。与后期E2治疗及未给与E2治疗比较,发现在早期给与雌二醇的Aβ1-42小鼠,突触的数量显着增加（P<0.01,n=3;图7A）。为了进一步探讨E2对不同类型突触的作用,采用Western blot对海马NMDA受体和AMPAR受体水平进行分析。NMDA受体（GluN1和GluN2）水平没有明显影响,而AMPAR受体水平（GluA1 GluA2）明显增加（P<0.01,n=3;图7B,C）。此外,还有重要的突触后蛋白Hevin和SPARC表达明显增加（P<0.01,n=3;图7B,C）,这两种蛋白在突触的生成及功能方面起着重要作用。结论:1.Aβ1-42小鼠认知功能减退与海马区神经元发生有关。小鼠海马神经元在接受Aβ1-42注射后发生严重损害,海马神经元损害在认知功能障碍方面起到重要作用。2.AD早期阶段E2可增加海马神经元再生并促进认知功能的恢复,而后期阶段E2治疗对的海马神经元再生及认知功能无改善。3.AD早期阶段E2治疗上调Aβ1-42小鼠海马神经元再生相关信号通路。4.AD早期阶段E2治疗可减少氧化应激、下调细胞死亡相关的信号通路活性。5.AD早期阶段E2治疗抑制Aβ1-42小鼠海马小胶质细胞过度增生。6.AD早期阶段E2治疗可增加海马神经元突触受体数量。第二部分 P38MAPK抑制剂对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡的保护作用及学习记忆能力的影响目的:本研究利用应用双侧颈总动脉结扎法（2-VO法）制作血管性痴呆（VaD）大鼠模型,经侧脑室内注射SB202190和SB203580的方法对VaD大鼠学习记忆能力进行研究,观察p38MAPK抑制剂对VaD大鼠海马依赖的Morris水迷宫的认知功能所起的作用,并通过研究海马神经元凋亡、海马区P38MAPK磷酸化变化及Bcl-2和Caspase-3表达,研究SB202190和SB203580对血管性痴呆大鼠海马区的神经保护机制,探讨海马神经元凋亡在血管性痴呆的发病机制中所起的作用。方法:利用应用双侧颈总动脉结扎法（2-VO法）制作血管性痴呆（VaD）大鼠模型,随机分为SB202190治疗组、SB203580治疗组、对照组和假手术组。假手术组只分离出双侧颈总动脉并不对其结扎,作为两血管法VaD模型的正常对比。治疗组采用侧脑室注射给药方式分别给予P38MAPK抑制剂SB202190、SB203580,对照组和假手术组采用侧脑室注射给药方式给予等量二甲基亚矾（DMSO）,注射药物2周后用Morris水迷宫法测试各组大鼠的学习记忆能力的变化。注射药物后应用TUNEL法检测海马区神经元凋亡,应用蛋白印迹（Western blot）法检测大鼠海马区P38MAPK磷酸化变化,免疫荧光法和激光共聚焦显微镜观察大鼠海马区Bcl-2和Caspase-3表达,以探讨SB202190和SB203580对血管性痴呆大鼠海马区的神经保护机制。结果:1.本研究对平台逃避潜伏期、空间学习、大鼠的SB203580或SB202190治疗效果均进行了研究。结果表明,SB203580和SB202190治疗组平台逃避潜伏期与假手术组和对照组相比明显缩短（**P<0.01）,说明大鼠的空间学习能力得以提高。2.给予SB203580和SB202190治疗5天后我们还观察到海马磷酸化激活P38 MAPK表达水平在各治疗组间差异显着（**P<0.01,SB203580治疗组或SB202190组治疗VS假手术组和对照组）。结果显示,SB203580或SB202190治疗后p38MAPK的表达显着降低。SB203580和SB202190治疗组间无显着差异。3.SB203580和SB202190有助于海马神经元抵抗慢性缺血诱导的细胞凋亡。为了探索SB203580和SB202190是否对血管性痴呆大鼠体外海马细胞凋亡和学习记忆能力有效,本实验用HT22细胞测试SB203580和SB202190的治疗效果。与对照组相比,用SB203580或SB202190治疗后实验组海马神经元凋亡减少。实验也证实了在体内SB203580、SB202190对海马细胞凋亡和血管性痴呆大鼠学习记忆能力是有疗效的。侧脑室注射SB203580和SB202190治疗五天后,处死大鼠,与对照组、SB203580和SB202190组相比,假手术组TUNEL阳性细胞数（脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记,绿色荧光）显着下降（**P<0.01）。然而,SB203580和SB202190组与对照组相比,前者TUNEL阳性细胞数目显着降低;而且SB203580组与SB202190组相比,前者TUNEL 阳性细胞较少。总之,SB203580和SB202190有助于海马神经元抵抗慢性缺血诱导的细胞凋亡。4.本实验研究了 SB203580和SB202190对VaD大鼠海马区施加的抗凋亡能力。脑室注射五天后,处死大鼠获取VaD大鼠海马标本。SB203580或SB202190培养48小时后,进行实验计算实验组凋亡细胞的数量（n=3）。P38MAKA培养后,HT22细胞出现皱缩,碎裂成膜结合凋亡小体,很快被邻近细胞吞噬。P38MAKA能够减少HT22细胞的凋亡。而SB203580或SB202190治疗组凋亡的HT22细胞数量均显着低于对照组。5.在VaD大鼠模型的海马标本上进行了 P38 MAKA和凋亡相关基因之间的关系研究。我们对P38MAKA诱导细胞凋亡相关的mRNA的表达水平进行了分析。与假手术组和对照组相比,细胞凋亡抑制基因BAX和Bcl-2在VaD大鼠海马经SB203580 或 SB202190 治疗后表达增加。caspase-8、caspase-3 和 caspase-9 的表达在SB202190或SB203580治疗组比对照组均显着降低。但SB202190治疗组细胞凋亡抑制基因Bax和Bcl-2的表达比SB203580组略高,这表明SB202190可通过抑制P38 MAKA的活性而减少细胞凋亡,依赖线粒体的凋亡途径可以由慢性缺血激活。6.大鼠经SB203580和SB202190治疗存活时间延长 实验组其余VaD大鼠模型继续存活以观察治疗的远期疗效。假手术组和对照组大鼠在第30天处死。相反,约30%SB202190组和60%SB203580组的动物最后需要处死（**P<0.01）。这说明与SB203580相比,SB202190治疗可进一步延长大鼠的存活时间。其中,相对于SB203580,SB202190较好的治疗效果体现在VaD大鼠显着的生存优势（**P<0.05）结论1.P38MAPK抑制剂SB202190和SB203580,能提高或改善VaD大鼠的学习记忆能力。2.本研究给予VaD大鼠P38MAPK抑制剂治疗后p38MAPK的表达显着降低,有效减少海马神经元细胞凋亡,促进记忆障碍重建,且耐受性良好。3.SB203580和SB202190通过抑制P38 MAKA的活性而减少细胞凋亡,有助于海马神经元抵抗慢性缺血诱导的细胞凋亡,依赖线粒体的凋亡途径可以由慢性缺血激活。4.大鼠经SB203580和SB202190治疗存活时间延长,与SB203580相比,SB202190治疗可进一步延长大鼠的存活时间。第三部分 TPX2对阿尔茨海默病模型大鼠神经细胞凋亡的保护作用机制的研究目的:研究TPX2对阿尔茨海默病模型大鼠神经细胞凋亡的保护作用机制。方法:将90只大鼠随机分为药物组、对照组和空白组,每组30只。在药物治疗组和空白组大鼠用1 0%水合氯醛麻醉（0.5ml/100g剂量）,在大鼠双侧海马区域的准确位置注入Aβ1-425ul（浓度1μg/ul）建立模型。将配置的TPX2抑制剂制成溶液。模型建立后,各组大鼠分别给予不同的治疗方法;药物组大鼠将TPX2-siRNA溶液连接10μl微量注射器给予侧脑室注射10μl,对照组大鼠给予侧脑室注射等量1%DMSO溶液。空白组为正常健康组,本组大鼠未作任何手术或药物治疗。大鼠脑组织分为两个部分,一部分是固定、脱水、石蜡包埋、制成约5um厚度的切片。TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡,HE染色观察各组脑组织细胞,Western blot检测ERK、MAPK和p38的表达水平,采用RT-PCR方法检测MAPK、ERK和p38中mRNA的表达水平。结果:一周后,TUNEL染色显示在药物组脑组织细胞凋亡率明显高于对照组和空白组,差异具有统计学意义（P<0.05）;使用TPX2抑制剂后,药物组TPX2的mRNA表达水平显着低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）,分别检测MAPK和p38蛋白的mRNA表达水平,药物组MAPK水平显着高于对照组及空白组,差异具有统计学意义（P<0.05）;Western blot灰度值比较中发现,MAPK和p38的表达水平无显着差异,其差异不具有统计学意义（P>0.05）。然而,在药物组中,MAPK、p38表达水平明显高于对照组,空白组MAPK灰度值则明显下降,其差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:因此,TPX2通过抑制MAPK、ERK和p38蛋白的表达抑制经Aβ1-42处理的脑组织细胞发生凋亡,对其有保护作用。
崔悦[5]（2019）在《骨碎补提取物对两种记忆障碍模型小鼠和Aβ损伤PC12细胞的保护作用研究》文中研究说明目的:根据实验室的前期研究,骨碎补总黄酮在治疗AD上可作为有效部位,并且紫云英苷和圣草酚是骨碎补总黄酮中含量较高的两种有效成分。本实验将以骨碎补提取物对记忆障碍模型小鼠的学习认知记忆能力的影响及机制进行研究,并探究骨碎补总黄酮中主要成分紫云英苷及圣草酚对Aβ25-35诱导损伤PC12细胞的影响及其机制,为明确补肾中药骨碎补预防及治疗阿尔茨海默病作用机制奠定实验基础。方法:动物实验:将骨碎补提取物灌胃给予东莨菪碱和亚硝酸钠建立两种学习记忆障碍小鼠模型,观察骨碎补提取物对模型小鼠的学习记忆改善作用。将14周的昆明小鼠按体重随机分组,分为空白组、模型组、阳性对照组、骨碎补提取物组和骨碎补提取物+ER阻断剂组。采用新物体识别、Morris水迷宫、跳台实验观察小鼠的记忆及判断能力;采用HE染色、透射电镜和免疫组化方法观察小鼠海马及下丘脑区的病理改变,小鼠海马区ERβ及下丘脑区ERα的表达;采用Western Blot法检测海马中ERβ、P-P38/P38蛋白含量及Aβ代谢相关指标、Tau蛋白磷酸化相关指标、凋亡系统相关指标的蛋白含量;试剂盒法检测海马中乙酰胆碱系统及氧化应激系统中相关蛋白含量。细胞实验:将紫云英苷及圣草酚分别作用于Aβ25-35诱导损伤的PC12细胞,采用MTT法检测细胞存活率;Western Blot方法检测细胞ERβ、P-P38/P38、Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量。再进一步给予ER阻断剂ICI182780、P38/MAPK阻断剂SB203580后,检测对紫云英苷及圣草酚作用的变化,深入研究ER-P38/MAPK信号通路是否参与了紫云英苷或圣草酚对Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用。结果:动物实验结果新物体识别实验结果表明,在给予骨碎补提取物后模型小鼠的新物体识别指数显着增加（P<0.01）;水迷宫实验结果表明,在给予骨碎补提取物后模型小鼠的逃避潜伏期显着缩短（P<0.01）,平台穿越次数及靶象限停留时间显着增加（P<0.01）;跳台实验结果表明,在给予骨碎补提取物后模型小鼠的错误次数、潜伏期显着缩短（P<0.01）;上述作用均能被ER阻断剂ICI182780逆转,说明骨碎补提取物可通过ER通路介导对模型小鼠发挥保护作用。HE染色实验结果表明,两种记忆障碍模型小鼠给予骨碎补提取物后,海马区神经元排列较为紧密且数量较多,形态正常,没有明显核固缩现象;电镜实验结果表明,两种记忆障碍模型小鼠给予骨碎补提取物后,神经毡区突触小泡数量明显增多,细胞双层核膜清晰、核仁明显。免疫组织化学实验结果表明,两种记忆障碍模型小鼠给予骨碎补提取物后,显着增加两种记忆障碍模型小鼠海马区ERβ的表达及下丘脑区ERα的表达（P<0.01）;上述作用均能被ER阻断剂ICI182780逆转,说明骨碎补提取物可通过ER通路介导对模型小鼠发挥保护作用。Western Blot实验结果表明,两种记忆障碍模型小鼠给予骨碎补提取物后,骨碎补提取物组小鼠海马区ERβ、NMDAR1、GluR2和Bcl-2的表达显着增加（P<0.01）,P-P38/P38、APP、BACE1、P-Tau396、CDK5、CAMKⅡ、Bad和Caspase-3的表达显着降低（P<0.01）;骨碎补提取物组给予ER阻断剂后,转变了以上蛋白含量的变化;试剂盒法实验结果表明,两种记忆障碍模型小鼠给予骨碎补提取物后,骨碎补提取物组小鼠海马区Ach含量和ChAT的活性在给予骨碎补提取物后显着提高,AchE、MDA及NO活性显着降低（P<0.01）,骨碎补提取物组给予ER阻断剂后转变以上蛋白的变化,说明骨碎补提取物可通过ER通路介导对模型小鼠发挥保护作用。细胞实验结果MTT结果显示,Aβ25-35组细胞增殖率显着降低（P<0.01）;圣草酚及紫云英苷组细胞增殖率显着升高（P<0.01）,给予ER阻断剂、P38阻断剂后阻断了圣草酚及紫云英苷组的上调作用（P<0.01）;Western blot结果显示,圣草酚及紫云英苷组ERβ和Bcl-2的表达显着增加（P<0.01）,P-P38/P38和Caspase-3的表达显着降低（P<0.01）;给予ER阻断剂后,ERβ和Bcl-2的表达显着减少（P<0.01）,P-P38/P38和Caspase-3的表达显着升高（P<0.01）;给予P38阻断剂后,Bcl-2的表达显着减少（P<0.01）,P-P38/P38和Caspase-3的表达显着升高（P<0.01）。结论:骨碎补提取物能够通过ER-P38/MAPK信号通路调节两种记忆障碍模型小鼠的Aβ代谢系统、Tau蛋白磷酸化系统、乙酰胆碱系统、氧化应激系统、凋亡系统发挥神经保护作用;紫云英苷和圣草酚通过ER-P38/MAPK信号通路对Aβ25-35诱导损伤的PC12细胞具有保护作用。
孙欢[6]（2019）在《芳香化酶对雄性APP/PS1转基因痴呆鼠海马突触可塑性和空间学习记忆的作用与机制的初步探究》文中指出伴随人口老化而来的阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）发病率的逐年上升是全球面临的最严峻的挑战之一。AD是一种老年神经退行性疾病,是引起痴呆最常见的原因。这种病目前几乎没有特效的治疗药物和措施,加上长达十余年的病程以及最后的痴呆症状,给家庭和社会带来了严重的精神和经济负担。据美国疾病预防与控制中心（CDC）的报道,2014年美国死亡人口总数的4%为AD患者（https://www.cdc.gov/features/Alzheimer-disease-deaths/index.html）,因此AD被列入美国六大死亡原因之一。众所周知,AD患者的主要临床表现是进行性的学习记忆能力衰退,包括记忆减退、精神障碍、言语功能失调、个性和行为改变、定向和判断能力减弱和其他认知能力的下降,以至发病后期逐渐丧失生活自理能力。目前对于AD的发病机制及预防策略存在较大争议,以Aβ为靶标的药物研发目前基本上均宣告失败,因此寻找预防和治疗AD的新靶点乃是当务之急。女性AD主要见于绝经后,因此卵巢雌激素的缺乏被认为是导致AD的主要因素之一。但是在老年男性中AD也有一定的发生率,其发病机制却不甚清楚。部分临床调查研究发现,AD患者血清睾酮较正常老年男性明显降低,从而引起人们对雄激素与AD关系的研究兴趣。雄激素在芳香化酶的催化下可转变为雌激素（通常称为内源性雌激素,如雌二醇E2）,从而与雌激素受体（包括核受体ERα、ERβ与膜受体GPR30）结合发挥作用。课题组前期工作发现睾丸切除并不影响小鼠的学习记忆行为,但是用芳香化酶（雌激素合成酶）抑制剂处理则诱导明显的学习记忆障碍,表明在调节雄性小鼠的学习记忆行为方面雄激素的直接作用有限而雄激素转化而来的雌激素可能发挥着主要作用。芳香化酶（aromatase,AROM）位于细胞线粒体,是由细胞色素P450和NADPH-细胞色素P450还原酶组成的复合体。研究表明,经由AROM转化而来的雌激素在神经发育和突触可塑性方面具有调节功能。在哺乳动物大脑,海马（hippocampus）是内侧颞叶系统中与学习记忆最密切相关的结构,也是负责学习与记忆功能的关键脑区。研究发现海马是最早在AD中受损的大脑区域之一,海马的突触可塑性变化则是学习记忆和认知的神经机制,其中突触相关蛋白表达的变化是突触传递与功能可塑性的基础、树突棘密度和突触密度的变化则是突触可塑性的形态学基础。海马有高水平的AROM表达,其功能尚不甚清楚。为数不多的研究报道了AROM对正常雌性小鼠空间学习记忆行为的调节,但是特异性调节海马AROM的表达对雄性APP/PS1小鼠的痴呆行为有何影响尚未见有关研究报道。为了探讨AROM对雄性APP/PS1转基因痴呆小鼠海马突触可塑性及空间学习记忆的作用与机制,本课题主要进行了以下研究:1.通过Western Blot方法分别检测了2、4、6、8、10月龄雄性APP/PS1和C57小鼠海马与AD病理相关蛋白（Aβ、p-tau、ADAM10、BACE1、NEP、IDE）的表达变化,确定其在APP/PS1小鼠海马内表达出现显着变化的时间点。2.通过Western Blot方法分别检测2、4、6、8、10月龄的雄性APP/PS1和C57小鼠海马AROM及突触相关蛋白（Synaptophysin、PSD95、Spinophilin、GluR1）的表达变化,确定其在APP/PS1小鼠海马内表达出现显着变化的时间点。3.结合上述两部分的实验结果,选取4、6、8月龄的雄性APP/PS1和C57小鼠,通过Morris水迷宫实验检测其空间学习记忆行为,找出APP/PS1小鼠出现明显空间学习记忆障碍的时间点。4.结合APP/PS1小鼠海马AROM表达显着降低的时间点和其出现学习记忆障碍的时间点,选取6月龄的APP/PS1小鼠,对其海马区进行脑立体定位注射过表达AROM病毒,到9月龄时用水迷宫实验检测不同处理条件下小鼠空间学习记忆行为的变化。主要实验结果及结论:1.AD病理相关蛋白的表达在C57小鼠8月龄海马才有显着变化,而在APP/PS1小鼠6月龄海马即有显着变化。2.AROM的表达在C57小鼠中28月龄海马均处于较高水平,直到10月龄海马才有显着降低;而在APP/PS1小鼠中6月龄海马即有显着降低,之后一直维持在较低水平。四种突触相关蛋白的表达在C57小鼠所检测的时间点内未见明显的增龄性变化,而在APP/PS1小鼠海马均有不同程度的降低。3.水迷宫结果显示相较于同月龄C57小鼠,4月龄和6月龄APP/PS1小鼠在前五天的定位训练实验中找到平台的逃避潜伏期无差异、在第六天的空间记忆检测实验中穿过平台次数和第三象限停留时间也无差异,而8月龄APP/PS1小鼠在前五天的定位训练实验中找到平台的逃避潜伏期明显延长、在第六天的空间记忆检测实验中穿过平台次数和第三象限停留时间均显着减少。以上结果说明APP/PS1小鼠在4月龄和6月龄时均表现正常,但是在8月龄时出现了明显的学习记忆障碍。4.通过给6月龄APP/PS1小鼠海马内注射过表达AROM病毒,于9月龄时进行行为学测试,发现对照组APP/PS1小鼠已出现明显的学习记忆障碍而实验组海马特异性过表达芳香化酶APP/PS1小鼠则未出现学习记忆障碍。上述结果表明经AROM催化雄激素而来的内源性雌激素对依赖于海马的空间学习记忆行为具有重要作用,提高海马AROM水平可以预防APP/PS1小鼠出现痴呆行为,有望成为预防或治疗AD的重要靶点。
郝徐艺[7]（2019）在《当归芍药散抑制ERα的O-GlcNAc修饰改善雌性糖尿病小鼠认知障碍研究》文中研究表明目的本课题拟针对痴呆的西医发病机理及中医病机开展当归芍药散（DSS）改善雌性糖尿病模型小鼠认知障碍的药理机制研究,为研制出能延缓糖尿病性痴呆进程、提高患者生活质量的中药新药提供科学依据。方法一、DSS对STZ诱导的糖尿病模型小鼠学习记忆及糖基化相关机制的研究SPF级C57/BL6雌性小鼠75只,平均10周龄。应用链脲霉素80mg/kg连续三天腹腔注射后,使用血糖检测仪检测小鼠血糖水平。小鼠在非禁食状况下的血糖水平超过16.7 mM,则定义为糖尿病小鼠。然后按照血糖和体重随机分为DSS高中低三组及模型组,每组各8只。DSS低剂量组给药剂量为1.6 g/kg·d,DSS中剂量组给药剂量为3.2 g/kg·d,DSS高剂量组给药剂量为6.4 g/kg·d。模型组及正常对照组予以灌胃等量蒸馏水,所有实验动物每次以0.1ml/10g的药液体积计算灌胃剂量,每天1次,持续8周。动物行为学实验期间灌胃仍持续进行。所有动物均饲养于广州中医药大学实验动物中心SPF动物房,均单笼饲养,自由进食饮水。在给药后6周进行持续6天的Morris水迷宫试验。行为学测试结束,摘眼球法收集小鼠血清;同时,取双侧海马和皮质制作样本,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组海马和皮质组织内O-G]cNAc糖基化、0-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（OGT）及0-连接N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（OGA）的表达水平。再检测雌激素受体ER α和ERβ水平。免疫荧光法检测脑内雌激素相关蛋白ER α和ERβ蛋白表达情况,HE染色和β-半乳糖苷酶染色检测脑组织切片细胞衰老和病理学变化。定量数据采用SPSS 23.0进行统计分析。二、DSS对自发型糖尿病模型db/db小鼠学习记忆及糖基化相关机制的研究SPF级雌性db/db小鼠31只,其中自发性糖尿病雌性db/db小鼠模型23只,相同月龄雌性野生型db/m小鼠8只。平均12周龄。将雌性db/db小鼠按照简单随机化的方法分成几个实验组。空白8只,模型9只,高剂量8只,低剂量6只。所有动物均饲养于SPF级广州中医药大学实验动物中心动物房,均单笼饲养,自由进食。饲养到10月龄时开始灌胃给药,给药时间持续12周。DSS低剂量组给药剂量为3.2 g/kg·d,DSS高剂量组给药剂量为6.4 g/kg·d。模型组以及阴性对照组以等量蒸馏水灌胃,所有实验动物每次灌胃的药液体积均以0.1ml/10g计算,每天给药1次。动物行为学实验期间灌胃仍持续进行,8周后行持续6天Morris水迷宫试验。行为学测试结束,摘眼球法收集小鼠血清;同时取双侧海马和皮质制作样本,Western blot检测各组海马和皮质组织内0-GlcNAc糖基化、0-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（OGT）及0-连接N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（OGA）的表达水平。再检测雌激素受体ER α和ERβ水平。免疫荧光法检测脑内雌激素相关蛋白EKα和EKβ蛋白表达情况,HE染色和β-半乳糖苷酶染色检测脑组织切片细胞衰老和病理学变化。定量数据采用SPSS 23.0进行统计分析。结果一、DSS对STZ诱导的糖尿病模型小鼠学习记忆能力的影响（一）Morris水迷宫和新物体识别测试检测DSS对小鼠的学习记忆能力的影响。1.Morris水迷宫行为学结果（1）定位航行试验结果随着游泳天数的增加,小鼠的游泳时间和游泳距离呈下降趋势。实验结果显示,与正常对照组相比,STZ诱导的糖尿病模型小鼠游泳时间与游泳距离均明显延长（P<0.01）;与模型组相比,DSS中、高剂量组小鼠游泳时间及游泳距离均明显缩短（P<0.05,P<0.01）,表明DSS对于STZ诱导的糖尿病模型小鼠的学习记忆能力具有改善作用。（2）空间探索试验结果与正常组比较,STZ诱导的糖尿病模型小鼠空间探索原平台象限停留的时间明显减少（P<0.01）,穿越平台次数显着减少（P<0.05）;与模型组比较,DSS中剂量组和高剂量组空间探索原平台象限停留时间均明显延长（P<0.01,P<0.05）、穿越平台次数均显着增多（P<0.05）。上述结果提示DSS能改善STZ诱导的糖尿病模型小鼠的学习记忆能力。2.新物体识别实验结果在物体识别测试中,STZ诱导的糖尿病模型小鼠对新物体的分辨指数（0.24 ±0.21）较正常组小鼠（0.71±0.08）明显减低（P<0.01）,DSS高剂量组（0.67 ±0.09）和中剂量组（0.6±0.08）的分辨指数较模型组明显升高（P<0.05,P<0.01）。（二）对氧化应激通路的影响:与正常组相比,STZ诱导的糖尿病模型小鼠脑内MDA含量增加（P<0.05）,SOD活力减少（P<0.05）;与模型组相比,DSS中、高剂量组SOD活力升高（P<0.05）,MDA含量减少（P<0.05）。表明STZ诱导的糖尿病模型小鼠存在氧化应激水平失衡,DSS可以明显减轻模型鼠体内的氧化应激水平,保护神经元改善记忆认知。（三）对细胞衰老的影响:细胞变性衰老程度用β-半抗原染色法检测。与正常组相比,STZ诱导的糖尿病模型小鼠衰老细胞呈现深蓝色,且衰老细胞数量明显较多;与模型组相比,DSS中、高剂量组较模型组组织细胞蓝色变淡、偏绿色,衰老细胞明显减少。（四）对雌激素受体糖基化的影响:Westernblot结果提示:与正常组小鼠相比,STZ诱导的糖尿病模型小鼠脑内ER α和ERβ蛋白的表达量明显减少（P<0.01）;与模型组相比,DSS中剂量和高剂量组可改善模型小鼠脑内ER α和ER β蛋白的表达（P<0.05）。与正常组小鼠相比,STZ诱导的糖尿病模型小鼠脑内OGT蛋白的表达量明显增高,OGA蛋白表达减少（P<0.05）,O-GlcNAc蛋白的表达增多（P<0.05）;与模型组相比,DSS中剂量和高剂量组小鼠脑内OGT蛋白的表达明显下调,OGA蛋白的表达明显增加（P<0.05）,降低O-GlcNAc蛋白的表达（P<0.05）。免疫荧光染色结果提示:与正常组小鼠相比,STZ诱导的糖尿病模型小鼠脑内ER α和红色荧光代表的阳性染色颗粒明显减少,不同浓度的DSS组红色荧光增强,显示可改善模型小鼠脑内ER α的表达。二、DSS对自发型糖尿病模型db/db小鼠学习记忆的影响（一）Morris水迷宫和新物体识别测试检测DSS对小鼠的学习记忆能力的影响。1.Morris水迷宫行为学结果（1）定位航行试验结果随着游泳天数的增加,小鼠的游泳时间和游泳距离呈下降趋势。实践证明,实验中小鼠记忆的通过反复寻找平台的这一学习过程从而形成。与正常对照组db/m小鼠相比,自发型糖尿病模型db/db小鼠组游泳时间与游泳距离均明显延长（P<0.01）,提示造模成功;与模型组db/db小鼠相比,DSS中、高剂量组均能缩短db/db小鼠的游泳时间及游泳距离（P<0.05,P<0.01）,表明DSS能改善自发型糖尿病模型db/db小鼠的学习记忆能力。（2）空间探索试验结果与正常组db/m小鼠比较,自发型糖尿病模型db/db小鼠空间探索原平台所在的象限停留时间明显减少（P<0.01）,穿越平台次数显着减少（P<0.05）;提示db/db小鼠出现认知障碍。与模型组db/db小鼠比较,DSS中剂量组和高剂量组空间探索原平台所在的象限停留时间均明显延长（P<0.01,P<0.05）、穿越平台次数均显着增多（P<0.05）。上述结果提示DSS能明显改善自发型糖尿病模型db/db小鼠的学习记忆能力。2.新物体识别实验结果在物体识别实验测试中,db/db小鼠组分辨指数（0.28±0.23）较正常组db/m小鼠（0.61±0.07）明显减低（P<0.05）;与模型组相比,DSS高剂量给药组对新物体的分辨指数（0.65±0.12）较模型组明显提高（P<0.05）。（二）对氧化应激通路的影响:与正常组db/m相比,自发型糖尿病模型db/db小鼠SOD活力明显下降（P<0.05）,MDA含量增加（P<0.05）;与模型组相比,DSS中、高剂量组SOD活力均明显升高（P<0.05）,MDA含量均明显降低（P<0.05）;表明DSS可以显着的减少脑内脂质过氧化水平,增加抗氧化酶活力,改善糖尿病模型脑内氧化应激状态。（三）HE染色结果:HE染色法检测小鼠脑组织,与正常组相比,自发型糖尿病模型db/db小鼠脑组织形态有明显的改变,细胞核深染,形态异常,破碎细胞明显增多;与模型组相比,DSS中、高剂量组较模型组小鼠脑组织形态的衰老程度有明显的改善。（四）对雌激素受体糖基化的影响:Western blot结果提示:与正常组db/m小鼠相比,自发型糖尿病模型db/db小鼠脑内ER蛋白的表达量明显减少（P<0.01）;与模型组相比,DSS中剂量和高剂量组均可改善模型小鼠脑内ER α和ERβ蛋白的表达（P<0.05）。与正常组小鼠相比,自发型糖尿病模型db/db小鼠脑内OGT蛋白的表达量明显增高,OGA蛋白表达减少（P<0.05）,0-GlcNAc蛋白的表达增多（P<0.05）;与模型组相比,DSS中剂量和高剂量组均下调模型小鼠脑内OGT蛋白的表达,上调OGA蛋白的表达（P<0.05）,降低0-GlcNAc蛋白的表达（P<0.05）。结论1.STZ诱导的糖尿病模型小鼠和自发型糖尿病模型db/db小鼠均是比较理想的糖尿病痴呆小鼠模型,以明显的胰岛素抵抗、学习记忆能力降低、衰老细胞数增加和氧化应激水平增加为主要表现。2.DSS中、高剂量组均能改善STZ诱导的糖尿病模型小鼠和自发型糖尿病模型db/db小鼠的学习记忆能力,低剂量DSS未能改善STZ诱导的糖尿病模型小鼠和自发型糖尿病模型db/db小鼠的学习记忆能力,表明DSS对神经系统的影响与剂量呈正相关趋势。实验研究表明DSS对神经元凋亡、雌激素水平、氧化应激损伤、ER α的异常0-GlcNAc修饰等有不同程度的调节作用,起到改善病变、延缓神经退行性疾病的发病进程的作用。因此,DSS调肝健脾法治疗糖尿病认知功能障碍有着较好的开发前景,可以调节ER α的异常0-GlcNAc修饰相关的多个信号通路或靶标,有可能为糖尿病认知功能障碍的治疗带来新的希望。
方迎艳[8]（2018）在《青年去势大鼠脑损伤的蛋白组基础及大黄素的脑保护机制》文中研究表明背景:雌激素是体内重要的甾体类激素,主要由卵巢产生,与脑功能存在密切联系。大量研究证明雌激素在保护中枢神经系统结构和功能方面发挥重要作用,比如:通过清除自由基和抗氧化应激作用、降低兴奋性氨基酸毒性和保护线粒体免受损伤等从而减少神经元凋亡;促进神经细胞突起的生长和突触结构的形成等,雌激素缺乏将导致脑功能损伤。更年期女性机体以雌激素缺乏为主要特征,更易患认知功能障碍和更严重的临床痴呆,如血管性痴呆（Vascular dementia,VD）和阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）。经双侧卵巢切除术的青年女性患认知障碍或痴呆、帕金森氏病（Parkinson’s disease,PD）的风险性明显增加。啮齿类动物卵巢切除术（Ovariectomy,OVX）,又称去势,是一种被广泛用作研究人类更年期或卵巢功能丧失的疾病建模方法。OVX实验动物以雌激素缺乏为主要特征,出现显着的认知功能减退。更年期不同脑区神经细胞的影响是否一致、分别具有什么特点等问题,尚无系统研究。同时,如何改善更年期脑损伤引起的认知障碍,是一个医学难题。由于雌激素的靶器官多、雌激素作用机制仍不十分清楚等,使雌激素和雌激素替代等疗法在临床应用受限。中国传统医学为解决这一难题提供了研究思路。大黄,是中国传统医学中经方“大承气汤”、“小承气汤”、“调胃承气汤”等的君药,上述经方能通过“通腑气”而显着改善临床认知及精神障碍。大黄素是大黄主要的单体,研究其是否具有改善OVX动物认知障碍的作用,以及相应的作用环节,对相关方剂的推广应用具有重要价值。目的:1.分析青年OVX大鼠不同脑区抑郁和痴呆相关的蛋白组基础。2.研究大黄素对青年OVX大鼠脑功能（抑郁、学习记忆和摄食等行为）的影响,并从“脑-肠轴”角度解析其中的机制。方法:1.模型复制及处理12周龄青年雌性SD大鼠（体重230280g）分为2组:假手术（SHAM,n=18）组和双侧卵巢切除术（OVX,n=18）组。为了观察大黄素治疗青年OVX大鼠的效果,将12周龄雌性SD大鼠分成4组:SHAM组（n=16）、OVX组（n=16）、OVX+大黄素组（Emodin组,n=16）和OVX+17β-雌二醇组（Estradiol组,n=16）。2.行为学检测每周进行旷场实验（Open field test,OFT）检测大鼠自发活动,术后第7周检测糖水偏好实验（Sucrose preference test,SPT）、强迫游泳实验（forced swimming test,FST）、OFT评价大鼠的行为学状态,术后第8周Mirros水迷宫实验（Mirror water maze test,MWMT）检测大鼠的认知能力。3.蛋白组学分析MWMT检测结束取SHAM组和OVX组大鼠4个脑区的组织:前额叶皮层（Prefrontal cortex,PFC）、海马（Hippocampus,HIP）、下丘脑（Hypothalamus,HYP）和杏仁核（Amygdala,AMY）,利用基于i TRAQ标记,Orbitrap Q-Exactive质谱仪通过串联质谱（LC-MS/MS）偶联的液相色谱分析,Max Quant（v.1.4.1.2）搜索分析LC-MS/MS数据得到差异表达蛋白,Uniprotrat数据库搜索,鉴定分析差异表达蛋白的生物学信息;Uni Prot-GOA数据库（Http://www.ebi.ac.uk/GOA/）搜索差异表达蛋白的基因本论（Gene Ontology,GO）注释。4.肠道收缩和舒张功能检测采用Powerlab生理学数据采集分析系统测定离体SD大鼠和OVX大鼠十二指肠、回肠和结肠始段的肠道收缩功能,并分别观察17-β雌二醇和大黄素对肠道收缩功能的影响。5.ELISA及电化学ELISA ELISA检测血浆17β-雌二醇水平;超敏多因子电化学发光分析测定血浆活性形式的胰高血糖素样肽1（Glucagon-like peptide 1,GLP-1）[GLP-1（7-36）酰胺和GLP-1（7-37）]水平。6.Micro-CT扫描小动物活体Micro-CT成像技术测定大鼠腹部脂肪。7.尼氏染色及Golgi染色术后8周处死大鼠,尼氏染色检测神经元数量,Golgi染色检测神经元树突棘密度和蘑菇形树突棘比例。8.免疫印迹和免疫组化分析免疫印迹检测大鼠脑组织ERα、ERβ、GLP-1R、自噬和凋亡相关蛋白、内质网（Endoplasmic reticulum,ER）应激相关蛋白、突触相关蛋白及骨架蛋白、基质相互作用分子2（Stromal Interaction Molecule,STIM2）、经典瞬时受体电位1（Transient receptor potential canonical,TRPC1）、钙调蛋白激酶Ⅱα（Calcium/calmodulin dependent protein kinaseⅡα,Ca MKⅡα）等水平;免疫组化检测大鼠脑组织小胶质细胞和星形胶质细胞水平,以及ERα、GLP-1R及阿黑皮素原（Proopiomelanocortin,POMC）的水平。结果:1.OVX大鼠出现抑郁行为和认知障碍在旷场实验中:从术后第4周,与SHAM大鼠比较,OVX大鼠上肢上抬次数、移动时间、移动距离和穿越格子明显降低。OVX大鼠糖水消耗百分比明显低于SHAM大鼠。强迫游泳实验:OVX大鼠在5分钟内的不动时间明显长于SHAM大鼠。以上结果表明OVX大鼠出现抑郁行为。Mirros水迷宫实验:在学习阶段,OVX大鼠比SHAM大鼠找到平台的时间明显延长。在记忆测试阶段,大鼠首次穿越平台环形区域的时间OVX组比SHAM组明显延长,OVX组60s内穿越平台环形区域的次数比SHAM组明显减少,以上结果提示OVX大鼠认知障碍。2.OVX大鼠脑内神经元丢失及相应的蛋白组基础设定i TRAQ比值（OVX/SHAM）>1.3并且p<0.05为上调,<0.77并且p<0.05为下调。与SAHM大鼠相比,我们鉴定到的OVX大鼠差异表达蛋白在PFC有20个（5个上调和15个下调）,在HIP有41个（30个上调和11个下调）,在HYP有17个（11个上调和6个下调）和在AMY有79个（43个上调和36个下调）。OVX大鼠前额叶皮层下调的蛋白主要与信号转导和突触可塑性有关,上调的蛋白主要轴突髓鞘有关;OVX大鼠海马下调的蛋白与Ras信号转导、神经元发育、突触可塑性和Ca2+介导的信号转导有关,上调的蛋白主要与氧化应激、内质网相关的泛素依赖性蛋白分解代谢过程、自噬、细胞凋亡和细胞死亡等相关。OVX大鼠下丘脑下调的蛋白主要与Ca2+介导的信号转导、树突棘形态发育、神经发育、突触可塑性、Ras/ERK1/ERK2和MAPK等有关,上调的蛋白主要与长时程突触性抑制、和氧化应激反应有关;OVX大鼠杏仁核下调的蛋白主要与突触传递和神经递质转运,神经发育和信号转导有关,上调的蛋白主要与轴突髓鞘、氧化应激反应、自噬、细胞凋亡和细胞死亡等有关。OVX大鼠四个脑区的差异表达蛋白主要来自于神经元和小胶质细胞。免疫组织化学结果显示,与SHAM大鼠比较,OVX大鼠小胶质细胞（Iba1识别）在HIP和AMY分别明显增加29.49%和23.15%;星形胶质细胞（GFAP识别）在PFC、HYP和AMY分别明显增加12.35%、19.79%和21.82%。在OVX大鼠的PFC、HIP、HYP和AMY四个脑区都出现神经元丢失,这可能是细胞凋亡的结果,腺苷酸激酶2（Adenylate kinase 2,AK2）、Bax、切割的caspase-3和caspase-3以及磷酸化p53的增加,Huntingtin相互作用蛋白K（Huntingtin interacting protein K,HYPK）、己糖激酶（Hexokinase,HK）和磷酸化的Bcl-2降低。在海马和杏仁核中观察到ER应激激活（GRP78、切割的caspase-12、磷酸化的PERK、IRE-1和ATF6增加）和线粒体功能障碍（细胞色素c增加及SFXN1和NDFA11的降低）。某些自噬相关标志物/调节物的变化表明OVX大鼠脑内自噬失调,包括:在PFC和HIP中ATG7水平增加,在PFC和AMY中GABARAPL2水平增加,在HIP中ORP1增加和SCAMP5水平降低,在HIP和AMY中HSPA1A水平降低,在PFC和AMY中的HYPK水平降低,在HIP和AMY中,LC3II/I,ATG5和Beclin1水平明显增加。3.OVX大鼠突触损伤及相应的蛋白组基础检测到OVX大鼠突触损伤,特别是谷氨酸突触功能障碍。与SHAM大鼠比较,OVX大鼠HIP中,SH3结构域的ArfGAP,ANK重复序列和含有PH结构域的蛋白质1（Arf-GAP with SH3 domain,ANK repeat and PH domain-containing protein 1,ASAP1）和Septin-8（SEPT8）上调、脑酸溶蛋白1（Brain acid-soluble protein 1,BASP1）下调。钙依赖性分泌激活因子1（Calcium-dependent secretion activator 1,CAPS1）在OVX大鼠PFC、HIP和AMY下调。在HIP和AMY中,OVX大鼠的突触后密度蛋白95（Postsynaptic density protein95,PSD95,突触后标记）,突触蛋白1（Synapsin1,突触前标记）都显着降低,在AMY中突触结合蛋白（Synaptotagmin,Syt,在神经递质释放中突触前的钙感受器）降低。可能涉及Ca2+相关信号的失调、Ras/Raf1/丝裂原活化蛋白激酶激酶（Mitogen activated protein kinase kinase,MEK）/细胞外信号调节蛋白激酶（Extracellular signalregulated protein kinase,ERK）（Ras/Raf1/MEK/ERK）和磷酸肌醇-3-激酶（Phosphoinositide-3-kinase）/AKT（PI3K/AKT）信号通路。4.OVX大鼠骨架蛋白损伤及相应的蛋白组基础在OVX大鼠的脑内观察到细胞骨架异常,微管相关蛋白（Microtubule-associated protein,MAP）在HIP下调,在HYP和AMY上调;微管蛋白α-1A链（Tubulinα-1A chain,Tuba1a）在HIP上调,在HYP和AMY下调;生长因子受体结合蛋白2（Growth factor receptor-bound protein 2,Grb2）是在OVX大鼠的HIP下调;HSPA1A在OVX大鼠的HYP和AMY中明显降低;伴随着糖原合酶激酶3β（Glycogen synthase kinase 3β,GSK3β）活化的tau高度磷酸化。5.OVX大鼠杏仁核特异的差异蛋白AMY在调节情绪行为中发挥重要作用。在OVX大鼠的AMY中,GABA1-B2明显减少而GAT明显增加;囊泡膜谷氨酸转运体1（Vesicular glutamate transporter 1,Vglu T1）和p-NR2B（Y1472）明显降低;Fyn（这是一种重要的激酶,可提高含N2B的NMDARs的活性）下调;SHANK3（SH3,and multiple ankyrin repeat domains 3,一种富含兴奋性突触密度的突触后支架蛋白）下调,表明OVX大鼠AMY中兴奋和抑制之间失衡。在AMY中Calretinin增加和Calbindin减少,提示OVX后GABA能传递的调节。6.大黄素改善青年OVX大鼠抑郁行为和认知障碍术后第7周,大鼠糖水消耗百分比,OVX组为60.62%明显低于SHAM组（77.25%）;Emodin组（75.28%）和Estradiol组（72.46%）明显高于OVX组。旷场实验:移动总距离OVX组为2087.30cm,明显低于SHAM组（3027.60cm）;Emodin组（2637.00cm）和Estradiol组（2912.50cm）明显高于OVX组。5min内穿越的格子数,OVX组为56.94明显低于SHAM组（82.19）;Emodin组（76.44）和Estradiol组（91.75）明显高于OVX组。强迫游泳实验:大鼠在水中5min不动时间,OVX组为158.25s较SHAM组（86.49s）明显延长;Emodin组（55.28s）和Estradiol组（69.44s）比OVX组明显缩短。以上结果表明,大黄素或雌激素均可改善OVX大鼠的抑郁行为。Morris水迷宫检测:在学习阶段,大鼠第一次找到平台的时间,OVX组比SHAM组明显延长;Emodin组和Estradiol组比OVX组明显缩短;在记忆检测阶段,大鼠首次穿越原平台环形区的时间,OVX组比SHAM组明显延长,Emodin组和Estradiol组比OVX组明显缩短。60s内穿越原平台的环形区的次数,OVX组比SHAM组明显减少,Emodin组和Estradiol组比OVX组明显增多。以上结果提示:大黄素或雌激素明显改善OVX大鼠认知障碍。大黄素增加OVX大鼠脑区神经元数量、神经元树突棘数量及相关蛋白水平。尼氏染色结果显示:大鼠海马CA1区、CA3区、下丘脑、杏仁核和前额叶皮层神经元数量,OVX组比SHAM组分别明显减少10.23%、12.03%、9.49%、5.53%和8.70%;与OVX组相比,Emodin组分别明显增加14.13%、26.17%、9.53%、10.64%和10.26%;Estradiol组分别增加17.12%、17.58%、12.84%、10.94%和9.42%。以上结果表明,大黄素或雌激素都可以改善OVX大鼠海马、下丘脑、杏仁核和前额叶皮层神经元数量的减少。Golgi染色结果显示:大鼠前额叶皮层、海马、下丘脑和杏仁核神经元树突棘的密度OVX组比SHAM组分别明显减少25.76%、53.06%、45.10%和31.75%。与OVX组比较,Emodin组分别增加40.82%、91.31%、75.00%和55.81%;Estradiol组分别明显增加53.06%、108.70%、89.28%和6.51%。大鼠前额叶皮层、海马、下丘脑和杏仁核神经元蘑菇形树突棘所占比例,OVX组比SHAM组分别明显降低37%、56%、42%和43%;与OVX组比较,Emodin组分别增加61%、104%、80%和78%,Estradiol组分别增加65%、106%、63%和68%。以上结果表明:大黄素或雌激素明显增加OVX大鼠树突棘的密度和蘑菇形树突棘的数量。为了进一步研究大黄素或雌激素改善OVX大鼠抑郁行为和认知能力以及树突棘丢失的机制,通过免疫印迹实验发现大黄素或雌激素可以明显上调OVX大鼠海马突触相关蛋白Synapsin1、PSD95、p-NR2B和p-Glu R1水平,同时上调Ca2+介导的信号通路相关蛋白STIM2、p-Ca MKⅡα和TRPC1水平。另外也观察到OVX大鼠ERK通路的抑制被大黄素或雌激素改善。7.大黄素改善OVX大鼠体重大黄素降低OVX大鼠的摄食量和体重。术后第2周大鼠摄食量和术后2周累积摄食总量OVX组、Emodin组和Estradiol组都比SHAM组明显增加。术后第3周开始给药治疗一直持续6周,术后第8周大鼠摄食量和8周累积摄食总量OVX组分别比SHAM组明显增加,Emodin组和Estradiol组比OVX组明显降低。术后第14天,大鼠体重OVX组、Emodin组和Estradiol组比SHAM组明显增加;术后第56天大鼠体重Emodin组和Estradiol组比OVX组明显降低。术后第8周,大鼠腹围OVX组比SHAM组明显升高,Emodin组和Estradiol组较OVX组明显降低。Micro-CT结果显示:腹部脂肪体积与目标区域总体积（Object volume/total volume）之比,SHAM组、OVX组、Emodin组和Estraddiol组分别为15.77%、30.50%、14.97%、16.19%;OVX组比SHAM组明显增加;与OVX组比较,Emodin组和Estradiol组明显降低。以上结果提示,OVX大鼠腹部脂肪比SHAM组明显增加,大黄素或雌激素明显减少OVX大鼠腹部脂肪。免疫组织化学结果显示:大鼠下丘脑POMC（由ACTH识别）水平,OVX组比SHAM组明显降低49%;与OVX组相比,Emodin组和Estradiol组分别明显增加82%和79%。以上结果表明:OVX大鼠POMC水平降低,下丘脑抑制食欲的活性降低,促进大鼠摄食,雌激素和大黄素均可增加POMC水平,抑制食欲。8.大黄素对OVX大鼠雌激素、GLP-1及受体的影响术后第8周大鼠PFC、HIP、HYP和AMY四个脑区ERα表达情况,免疫组织化学结果显示:海马CA1,CA3,DG区、下丘脑、杏仁核和前额叶皮层ERα水平,OVX组和Emodin组比SHAM组和Estradiol组均明显下调。大鼠血浆17β-雌二醇浓度,OVX组和Emodin组均比SHAM组和Estradiol组显着降低。以上结果表明OVX大鼠大鼠血浆雌激素水平和4个脑区的ERα水平均明显降低,给予雌激素治疗后明显改善,但大黄素治疗后没有改善。超敏多因子电化学发光分析检测大鼠血浆活性GLP-1[GLP-1（7-36）酰胺和GLP-1（7-37）]水平,结果显示:血浆活性GLP-1浓度,OVX组比SHAM组明显降低;与OVX组比较,Emodin组和Estradiol组明显增高,表明大黄素或雌激素可以逆转OVX大鼠血浆活性GLP-1水平。免疫印迹实验观察到OVX组大鼠海马GLP-1R水平比SHAM组分别明显减少,Emodin组和Estradiol组较OVX组明显增加;免疫组织化学实验观察到:OVX组海马CA3区GLP-1R水平比SHAM组降低23%;与OVX组相比,Emodin组和Estradiol组海马CA3区GLP-1R水平分别明显增加43%和48%。免疫印迹和免疫组织化学实验观察到,在下丘脑、杏仁核和前额叶皮层中,GLP-1R水平OVX组比SHAM组明显降低;与OVX组比较,Emodin组和Estradiol组分别明显增加。以上结果表明:OVX大鼠前额叶皮层、海马CA3、下丘脑和杏仁核GLP-1R下调,大黄素或雌激素可以逆转GLP-1R的下调。9.大黄素对OVX大鼠肠道功能的影响离体灌流测定肠道收缩和舒张功能,在Kreb’s灌流液中分别给予5μM和10μM 17β-雌二醇,给药前后肠道收缩幅度比较,可观察到雌激素降低NC组大鼠肠道收缩幅度,并呈现剂量依赖性,同时从肠近端到远端,抑制收缩的程度逐渐增强,同时OVX大鼠肠道对雌激素抑制作用的敏感性明显降低。在Kreb’s灌流液中分别给予1μM、5μM、10μM、20μM和50μM大黄素,可观察到大黄素降低NC组大鼠肠道收缩幅度,并呈现剂量依赖性,同时抑制收缩幅度从肠近端到远端逐渐增强。与NC组大鼠比较,大黄素对OVX大鼠回肠和结肠抑制作用明显增强。免疫印迹结果显示:与SHAM组比较,OVX组大鼠回肠和结肠始端ERβ水平明显降低41.97%和51.71%;TRPC1水平明显降低54.38%和74.72%。结论:在本研究中,我们通过OVX复制了雌激素缺乏的手术绝经大鼠模型,术后7周OVX大鼠出现抑郁和痴呆行为。在OVX大鼠的HIP和AMY中小胶质细胞数量及在PFC、HYP和AMY中星形胶质细胞数量都明显增多,PFC、HIP、HYP和AMY均出现神经元丢失。通过质谱和蛋白质印迹分析,支持内质网应激和线粒体功能障碍触发细胞凋亡涉及OVX诱导的神经元丢失。OVX大鼠也出现突触损伤、细胞骨架异常和髓鞘损伤以及少突胶质细胞功能障碍。在AMY中兴奋性和抑制性神经递质失调可能是导致OVX诱导的抑郁行为的原因。总之,我们的研究提出了OVX后不同脑区抑郁和痴呆相关的变异性,这有助于了解绝经期相关脑损伤的病理生理机制,并寻找潜在的早期干预靶点。大黄素明显改善OVX大鼠抑郁行为、认知障碍和体重。大黄素上调OVX大鼠血浆GLP-1水平,上调OVX大鼠4个脑区GLP-1R水平,经GLP-1-GLP-1R途径上调OVX大鼠海马STIM2-TRPC1-Ca MKIIα通路,改善OVX海马神经元和树突棘数量的减少以及突触损伤。大黄素治疗明显增加OVX大鼠下丘脑POMC水平,抑制摄食,减少腹部脂肪,改善OVX大鼠体重增加。大黄素抑制OVX大鼠肠道收缩,可能促进肠道分泌GLP-1增多。
黄燕辉[9]（2017）在《当归芍药散对去卵巢小鼠脂质代谢的调节及神经保护作用》文中认为背景:阿尔茨海默病（Alzheimer’ s Disease,AD）是由错综复杂的病因引起中枢神经系统进行性退化的疾病,其发病机制目前尚不完全清楚。发病率随年龄而增加,女性多于男性,给患者的生活质量带来重大的影响,可因并发症而死亡。中医药相关研究因其多途径、多靶点的治疗机制正成为研究热点。当归芍药散（DSS）广泛应用于临床各科疾病,传统上主要用于治疗妇科疾病,而在治疗神经系统性疾病方面也有大量的临床及实验研究。本研究基于DSS的功能主治及现代药理学研究成果,探讨了该方治疗AD的潜在作用靶点。目的:探讨DSS对去卵巢（OVX）小鼠外周脂质代谢紊乱及认知功能的调节作用,并通过测定海马中炎症细胞及NLRP3小体及其相关因子、雌激素受体（ERs）的表达变化,为研究DSS治疗AD的途径和作用靶点提供参考。方法:DSS对OVX小鼠脂质代谢的影响小鼠分为正常组（CON）、模型组（MOD）、阳性对照药组（E2）、DSS-低剂量（DSS-L）组及DSS-高剂量组（DSS-H）,除CON组外,其余小鼠双侧摘除卵巢。E2的给药剂量为100 μ g/kg/d,采用腹腔注射法;DSS-L及DSS-H给药剂量分别为3.2g/kg/d、6.4g/kg/d,采用灌胃给药;CON与MOD给予等量的蒸馏水灌胃,给药时间为12周。给药期间,小鼠每周称量体重1次,观察小鼠体重的变化。小鼠行为学测试后取材,取小鼠完整子宫,测定子宫指数;取血清,用ELISA试剂盒测定血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）,高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）含量。当归芍药散对OVX小鼠认知功能的影响持续给药12周后,各组小鼠进行行为学测试,采用Morris水迷宫测试、Y迷宫和旷场实验考察DSS对小鼠认知功能的影响。采用免疫组化染色法观察小鼠脑组织中海马小胶质细胞标志物Iba1的表达及星形胶质细胞标记物GFAP蛋白的表达;此外,用ELISA测量海马炎症因子IL1-β的表达;最后用 Western blot 法检测海马中 NF κB,NLRP3,ASC,caspasel,IL1-β,及ERα和ERβ蛋白的表达。以上实验数据均采用SPSS 17.0软件处理,用Mean±SE表示。结果:DSS对OVX小鼠脂质代谢的影响与CON组小鼠相比,MOD组体重明显增多（P<0.01）,而E2组、DSS-L组与DSS-H组与MOD组相比,都显着抑制了体重的增长（P<0.01）;CON组的子宫血管丰富,颜色鲜红,体积较大;MOD组颜色苍白,呈细线状,子宫指数显着降低（P<0.01）,E2组与MOD组相比,子宫指数显着增加（P<0.01）,DSS-Low组、DSS-H组形态似MOD组,子宫指数差异没有统计学意义（P>0.05）。与CON组相比,MOD组血清TC、TG、HDL-水平显着升高（P<0.05或P<0.01）,与MOD组相比,E2组、DSS-L组和DSS-H组显着改善了血脂TC、TG的水平（P<0.01或P<0.05）;CON组与MOD组的血清LDL-C水平差异没有统计学意义（P>0.05）。DSS对0VX小鼠认知功能的影响Morris水迷宫测试结果提示,与CON组相比,MOD组小鼠的逃避潜伏期明显延长（P<0.01）,E2 组、DSS-Low 组、DSS-H 组比 MOD 组明显缩短（P<0.01）;与 CON 组相比,MOD组的穿越平台次数明显降低（P<0.01）,E2组、DSS-L组、DSS-H组比MOD组明显增加（P<0.01）;与CON组相比,MOD组的平台所在象限游泳时间明显缩短（P<0.01）,而 E2 组、DSS-L1 组、DSS-H1 组比 MOD 组明显延长（P<0.05 或P<0.1）;Y迷宫实验结果提示,与CON组相比,MOD组小鼠的进臂正确率显着减少（P<0.01）,E2组、DSS-L组、DSS-H组与MOD组相比均增加（P<0.05或P<0.1）;旷场试验结果提示,与CON组相比,MOD组的中央区域活动时间百分比着减少（P<0.01）,E2组、DSS-L组、DSS-H组与MOD组相比均增加（P<0.05或P<0.1）。DSS对OVX小鼠中枢炎症的影响免疫组化IBal阳性细胞染色结果提示,CON组海马CA3区的IBal阳性细胞胞体较小,突起细长,呈分支状,胞浆呈棕褐色。MOD组IBal阳性细胞染色加深,胞体增大,突起增多,突起变短,形态多样,呈“阿米巴样”。E2组、DSS-Low组和DSS-High组IBal阳性小胶质细胞胞体变小,突起较为细长。与CON组比较,MOD组及IBA1阳性细胞数明显增加,与MOD组比较,E2组、DSS-L组和DSS-H组IBal阳性细胞数明显减少。CON组可见GFAP表达阳性的星形胶质细胞,无反应性增生肥大,胞体较小,分支少而细短,细胞核较小,轮廓清晰,分布规律;MOD组GFAP表达阳性细胞胞体肿胀,突起增多并延长,胞核较大,胞核固缩,突起折断;E2组、DSS-L组和DSS-H组GFAP阳性细胞表达胞体肿胀较轻、突起增多并延长,胞核较大。与CON组比较,MOD组及GFAP阳性细胞数明显增加;与MOD组比较,E2组、DSS-L组和DSS-H组阳性细胞数明显减少。与CON组相比,MOD组IL1-β水平显着增加（P<0.01）;与MOD组相比,E2 组、DSS-Low 和 DSS-High 较 MOD 组 IL1-β水平显着降低（P<0.01）。DSS抑制OVX小鼠中枢炎症通路的探究Western-blot结果显示,与CON组相比较,OVX小鼠海马中p-NF κB及NF κB,NLRP3,ASC,pro-caspasel及caspasel,pro-IL1-β及IL1-β蛋白均增加（P<0.01）,ER a及ERβ蛋白减少（P<0.01）;给予E2或DSS治疗后,NLRP3小体信号通路的相关蛋白在海马中的表达减少（P<0.01或P<0.05）;ER a及ERβ的蛋白表达量均增加（P<0.01 或P<0.05）。结论:上述结果表明,长期雌激素剥夺的小鼠会引起脂质代谢异常,体重增加;行为学测试结果表明OVX小鼠认知功能受损,而E2和DSS对认知功能有保护作用;免疫组化、免疫荧光及ELISA检测ILI β结果表明,DSS可以抑制OVX小鼠海马炎症,提示DSS发挥神经保护作用可能是通过抗炎作用实现的;Western-blot检测p-NF κB及NF κB,NLRP3,ASC,pro-caspase1 及 caspase1,pro-IL1-β 及 IL1-β,ER α 及ER β结果提示,DSS抗炎作用可能是通过抑制NLRP3炎症小体通路并由ERs受体介导实现。
俞云,汪佰莉,张雨,赵宇,覃筱燕[10]（2017）在《何首乌苷对亚急性衰老模型小鼠学习记忆能力及海马内ChAT和AChE表达的影响》文中认为目的研究何首乌苷（Polygonum multiflorum Thunb.glycoside）对亚急性衰老模型小鼠学习记忆能力及海马组织内胆碱乙酰转移酶（ChAT）和乙酰胆碱酯酶（AChE）表达的影响。方法采用AlCl3(10mg·kg-1)灌胃及D-半乳糖(120 mg·kg-1)颈部皮下注射,持续处理60 d井通过跳台逃避行为学实验法筛选出亚急性衰老KM小鼠模型;将成功构建的衰老模型小鼠,雌雄各半,随机分为5组,包括:衰老模型组、雌二醇阳性对照组(10 mg·kg-1)和何首乌苷高、中、低剂量组(剂量分别为:80mg·kg-1、40 mg·kg-1、20 mg·kg-1);并选择健康小鼠作为正常对照组。治疗组小鼠在造模后15 d起分别颈部皮下注射高、中、低剂量的何首乌苷和雌二醇,持续给药15 d;衰老模型组和正常对照组小鼠分别给予等体积生理盐水。利用跳台逃避行为学实验法判断各组小鼠的学习记忆能力的变化和差异;利用Western Blot法检测小鼠海马体组织细胞内胆碱酯酶系统ChAT和AChE蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,各实验组小鼠学习记忆能力显着下降,小鼠跳台回避错误次数显着增加（P<0.05）;与衰老模型组比较,不同剂量何首乌苷组与雌二醇阳性对照组小鼠学习记忆能力明显改善,小鼠跳台回避错误次数明显减少（P<0.05或P<0.001）,而不同剂量何首乌苷组与雌二醇阳性对照组小鼠跳台回避错误次数相近（P>0.05）;与衰老模型组比较,不同剂量何首乌苷组与雌二醇阳性对照组小鼠海马体组织细胞内的ChAT表达量升高而AChE表达量下降,差异有统计学意义或高度统计学意义（P<0.05或P<0.001）。结论何首乌苷能有效改善亚急性衰老模型小鼠的学习记忆能力障碍,其机制与其使海马内组织细胞的ChAT表达升高和AChE表达降低,从而增加乙酰胆碱的含量以改善胆碱能系统损害有关。
二、雌二醇对拟痴呆小鼠学习记忆功能的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、雌二醇对拟痴呆小鼠学习记忆功能的影响（论文提纲范文）
（1）基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一章 VAP鉴定及检测 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 基于网路药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第四章 基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 数据处理 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第五章 基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由OA诱导的受损HT22细胞的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（2）雌二醇对绝经模型小鼠认知功能的影响（论文提纲范文）
| 中英缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 雌激素替代治疗在认知功能障碍治疗中的进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）鹰嘴豆芽素A对脑缺血再灌注损伤模型鼠及痴呆模型鼠的神经保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略语说明 |
| 引言 |
| 第一部分 鹰嘴豆芽素A对脑缺血再灌注损伤模型小鼠神经保护作用研究 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验动物 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验动物的筛选 |
| 2.2 动物分组与给药方法 |
| 2.3 模型小鼠的制备 |
| 2.4 模型小鼠的检验 |
| 2.5 给药剂量及方式 |
| 2.6 行为学评估 |
| 2.7 小鼠海马及大脑皮质区氧化应激水平测定 |
| 2.8 大脑组织固定 |
| 2.9 小鼠脑组织石蜡切片制备 |
| 2.10 HE染色 |
| 2.11 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 “Y”迷宫测试结果 |
| 2 BioA对 BCCAo小鼠大脑海马与皮质区氧化应激水平变化的影响 |
| 3 HE染色结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 鹰嘴豆芽素A对D-半乳糖联合氢溴酸东莨菪碱致痴呆模型鼠的神经保护作用研究 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物筛选 |
| 2.2 动物分组、给药和模型制作方法 |
| 2.3 行为学评估 |
| 2.4 小鼠大脑皮质和海马区氧化应激水平测定 |
| 2.5 大脑组织固定 |
| 2.6 小鼠脑组织石蜡切片制备 |
| 2.7 HE染色 |
| 2.8 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 “Y”迷宫测试结果 |
| 2 BioA对痴呆模型小鼠脑组织氧化应激水平变化的影响 |
| 3 HE染色结果观察 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（4）P38MAPK抑制剂、雌二醇和TPX2对痴呆鼠模型海马神经细胞损害的保护作用及认知功能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 中文部分 |
| 第一部分 雌二醇治疗对小鼠阿尔茨海默病模型海马神经元发生及认知功能障碍的早期保护作用 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第二部分 P38MAPK抑制剂对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡的保护作用及学习记忆能力的影响 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第三部分 TPX2对阿尔茨海默病模型大鼠神经细胞凋亡的保护作用机制的研究 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文部分 |
| Chronic estradiol administration during the early stage ofAlzheimer's disease pathology rescues adult hippocampalneurogenesis and ameliorates cognitive deficits in Ap"2 mice |
| Introduction |
| Materials and Methods |
| Results |
| Discussion |
| Summary |
| Reference |
| Figure legends |
| The Effect of P38MAPK Inhibitors on Hippocampus Apoptosisand Learning Memory Ability in Vascular Dementia Rat |
| 1. Introduction |
| 2. Materials and Methods |
| 3. Results |
| 4. Discussion |
| Conflict of Interests |
| Authors, Contribution |
| Reference |
| Figure legend |
| Protective Effects and Mechanism Researches of TPX2 onNeurocytes Apoptosis of Rats with Alzheimer's Disease Model |
| Introduction |
| Materials and methods |
| Results |
| Discussion |
| References |
（5）骨碎补提取物对两种记忆障碍模型小鼠和Aβ损伤PC12细胞的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 阿尔茨海默症概述 |
| 1.2 AD的发病机制研究 |
| 1.2.1 β级联假说 |
| 1.2.2 胆碱能损伤假说 |
| 1.2.3 Tau蛋白过度磷酸化假说 |
| 1.2.4 谷氨酸受体学说 |
| 1.2.5 氧化应激假说 |
| 1.2.6 凋亡因子与AD |
| 1.2.7 P38信号通路与AD |
| 1.2.8 雌激素与AD |
| 1.3 中药植物雌激素防治AD的研究进展 |
| 1.3.1 植物雌激素对AD的作用 |
| 1.3.2 补肾中药骨碎补对AD的作用 |
| 1.4 AD实验研究进展 |
| 1.4.1 AD动物模型的建立与评价 |
| 1.4.2 行为学实验选择与评价 |
| 1.5 立题依据 |
| 第2章 骨碎补提取物对两种记忆障碍模型小鼠的神经保护 |
| 2.1 仪器、试剂和材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要实验用品及试剂 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 实验分组及给药 |
| 2.2.2 行为学实验 |
| 2.2.3 病理组织学观察 |
| 2.2.4 Western blot |
| 2.2.5 试剂盒检测 |
| 2.2.6 数据处理 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 骨碎补提取物对亚硝酸钠模型小鼠实验结果 |
| 2.3.2 骨碎补提取物对东莨菪碱模型小鼠的实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 紫云英苷和圣草酚对Aβ损伤PC12细胞的机制研究 |
| 3.1 实验材料和仪器 |
| 3.1.1 细胞来源 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 试剂及药品的配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 PC12细胞复苏、培养、传代及冻存 |
| 3.2.2 实验分组及给药 |
| 3.2.3 MTT |
| 3.2.4 Western blot |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 紫云英苷对Aβ25-35损伤PC12细胞的影响 |
| 3.3.2 圣草酚对Aβ25-35损伤PC12细胞的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 综合结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 英文缩写 |
| 攻读学位期间发表的学术成果 |
（6）芳香化酶对雄性APP/PS1转基因痴呆鼠海马突触可塑性和空间学习记忆的作用与机制的初步探究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.AD的主要发病机制 |
| 2.AD的潜在治疗策略 |
| 3.脑源性雌激素与AD |
| 第二章 绪论 |
| 1.研究背景和意义 |
| 2.研究目的与内容 |
| 3.创新之处 |
| 第三章 不同年龄阶段雄性C57和APP/PS1转基因小鼠海马AD病理相关蛋白表达变化的研究 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 第四章 不同年龄阶段雄性C57和APP/PS1转基因小鼠海马芳香化酶以及突触相关蛋白表达变化的研究 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 第五章 不同年龄阶段雄性C57和APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆行为的差异研究 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 第六章 海马特异性过表达芳香化酶对APP/PS1小鼠空间学习记忆的影响 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 在研期间发表的论文 |
| 致谢 |
（7）当归芍药散抑制ERα的O-GlcNAc修饰改善雌性糖尿病小鼠认知障碍研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 糖尿病脑病中医病因病机 |
| 第二节 雌激素及其受体与女性患痴呆、糖尿病的联系 |
| 第三节 糖尿病的发生与O-GLCNAC糖基化修饰异常 |
| 第四节 雌激素受体ERA与O-GLcNAc糖基化修饰 |
| 第五节 当归芍药散 |
| 第六节 研究设想 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 DSS对STZ诱导的糖尿病模型小鼠学习记忆的影响 |
| 一、材料方法 |
| 二、体重饮水指标检测 |
| 三、C57/BL6小鼠造模 |
| 四、行为学实验 |
| 五、口服葡萄糖耐量实验(Oral Glucose tolerance test,OGTT) |
| 六、胰岛素耐量实验(Insulin tolerance test,ITT) |
| 七、标本制备 |
| 八、标本检测 |
| 九、统计学方法 |
| 第二节 DSS对自发型糖尿病模型DB/DB小鼠学习记忆的影响 |
| 一、材料方法 |
| 二、行为学实验 |
| 三、口服葡萄糖耐量实验(Oral Glucose tolerance test,OGTT) |
| 四、胰岛素耐量实验(Insulin tolerance test,ITT) |
| 五、标本制备 |
| 六、标本检测 |
| 七、统计学方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 第一节 DSS对STZ诱导的糖尿病模型小鼠学习记忆的影响 |
| 一、C57/BL6小鼠造模 |
| 二、各组小鼠体重和饮水 |
| 三、Morris水迷宫 |
| 四、新物体识别实验 |
| 五、DSS对STZ诱导的糖尿病模型小鼠OGTT值影响 |
| 六、DSS对STZ诱导的糖尿病模型小鼠ITT值影响 |
| 七、DSS对STZ诱导的糖尿病模型小鼠氧化应激的影响 |
| 八、免疫荧光法检测ER α结果 |
| 九、β-半乳糖苷酶染色结果 |
| 十、雌激素相关蛋白检测结果 |
| 十一、糖基化相关蛋白检测结果 |
| 第二节 DSS对自发型糖尿病模型DB/DB小鼠学习记忆的影响 |
| 一、Morris水迷宫 |
| 二、新物体识别实验 |
| 三、DSS对自发型糖尿病模型db/db小鼠OGTT值影响 |
| 四、DSS对自发型糖尿病模型db/db小鼠ITT值影响 |
| 五、HE染色结果 |
| 六、雌激素相关蛋白检测结果 |
| 七、糖基化相关蛋白检测结果 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（8）青年去势大鼠脑损伤的蛋白组基础及大黄素的脑保护机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 青年去势(OVX)大鼠抑郁和痴呆行为相关的脑蛋白组基础 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 一、OVX大鼠出现抑郁行为和认知障碍 |
| 二、OVX大鼠脑内神经元丢失及相应的蛋白组基础 |
| 三、OVX大鼠突触损伤及相应的蛋白组基础 |
| 四、OVX大鼠骨架蛋白损伤及相应的蛋白组基础 |
| 五、OVX大鼠杏仁核特异的差异蛋白 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 大黄素改善青年OVX大鼠认知障碍及机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 一、大黄素改善OVX大鼠抑郁和痴呆行为 |
| 二、大黄素改善OVX大鼠体重增加 |
| 三、大黄素对OVX大鼠雌激素、GLP-1及受体的影响 |
| 四、大黄素对OVX大鼠肠道功能的影响 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 本研究的主要创新点 |
| 下一步研究计划 |
| 综述 雌激素在中枢中调节能量平衡的作用 |
| 参考文献 |
| 附录一 博士期间获得的主要奖励 |
| 附录二 博士期间论文发表或撰写情况 |
| 附录三 博士期间参与的国家自然科学基金 |
| 附录四 博士期间参与学术活动 |
| 附录五 中英文缩略词对照表 |
| 致谢 |
（9）当归芍药散对去卵巢小鼠脂质代谢的调节及神经保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 更年期女性脂质代谢紊乱的研究进展 |
| 一、更年期与脂质代谢紊乱的关系 |
| 二、更年期脂质代谢紊乱的实验研究进展 |
| 第二节 更年期与阿兹海默症(AD)的关系研究进展 |
| 一、AD的发病机制 |
| 二、AD的炎症学说 |
| 三、雌激素与AD的关系 |
| 第三节 当归芍药散(DSS)药理学研究进展 |
| 一、DSS对脂质代谢紊乱的治疗研究进展 |
| 二、DSS对神经系统疾病的治疗研究进展 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 DSS对OVX小鼠脂质代谢的影响 |
| 一、实验材料和试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、结论 |
| 第二节 DSS对OVX小鼠学习记忆的影响 |
| 一、主要仪器 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、结论 |
| 第三节 DSS对OVX小鼠中枢炎症的影响 |
| 一、主要仪器与试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、结论 |
| 第四节 DSS抑制OVX小鼠中枢炎症通路的探究 |
| 一、主要仪器与试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、结论 |
| 第五节 讨论 |
| 一、动物模型与治疗药物的选择 |
| 二、行为学的选择 |
| 三、指标检测的选择 |
| 四、实验结果的讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（10）何首乌苷对亚急性衰老模型小鼠学习记忆能力及海马内ChAT和AChE表达的影响（论文提纲范文）
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 亚急性衰老模型的建立 |
| 2.2 学习和记忆能力测试 |
| 2.3 给药 |
| 2.4 Western Blot法检测小鼠海马体组织中Ch AT、ACh E蛋白表达量变化 |
| 2.5 数据统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 亚急性衰老模型小鼠的建立 |
| 3.2 PM对亚急性衰老模型小鼠学习记忆能力的影响 |
| 3.3 PM对亚急性衰老模型小鼠海马体组织细胞内Ch AT表达的影响 |
| 3.4 PM对亚急性衰老模型小鼠海马体组织细胞内ACh E表达的影响 |
| 4 讨论 |
四、雌二醇对拟痴呆小鼠学习记忆功能的影响（论文参考文献）
- [1]基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究[D]. 刘玥欣. 长春中医药大学, 2021(01)
- [2]雌二醇对绝经模型小鼠认知功能的影响[D]. 于礼潇. 遵义医科大学, 2020(12)
- [3]鹰嘴豆芽素A对脑缺血再灌注损伤模型鼠及痴呆模型鼠的神经保护作用[D]. 李建涛. 青岛大学, 2019(01)
- [4]P38MAPK抑制剂、雌二醇和TPX2对痴呆鼠模型海马神经细胞损害的保护作用及认知功能的影响[D]. 梁克山. 山东大学, 2019(02)
- [5]骨碎补提取物对两种记忆障碍模型小鼠和Aβ损伤PC12细胞的保护作用研究[D]. 崔悦. 佳木斯大学, 2019(01)
- [6]芳香化酶对雄性APP/PS1转基因痴呆鼠海马突触可塑性和空间学习记忆的作用与机制的初步探究[D]. 孙欢. 西南大学, 2019(06)
- [7]当归芍药散抑制ERα的O-GlcNAc修饰改善雌性糖尿病小鼠认知障碍研究[D]. 郝徐艺. 广州中医药大学, 2019(04)
- [8]青年去势大鼠脑损伤的蛋白组基础及大黄素的脑保护机制[D]. 方迎艳. 华中科技大学, 2018(01)
- [9]当归芍药散对去卵巢小鼠脂质代谢的调节及神经保护作用[D]. 黄燕辉. 广州中医药大学, 2017(05)
- [10]何首乌苷对亚急性衰老模型小鼠学习记忆能力及海马内ChAT和AChE表达的影响[J]. 俞云,汪佰莉,张雨,赵宇,覃筱燕. 四川动物, 2017(01)