一、仔猪水肿病三价灭活疫苗（论文文献综述）
付杨,刘凯慧,田佳硕,石火英[1]（2021）在《猪水肿病疫苗的研究进展》文中进行了进一步梳理水肿病是猪生产中的常见病之一,造成了严重的经济损失。产志贺毒素大肠杆菌（STEC）是引起水肿病的病原菌,F18菌毛和Stx2e毒素是其重要的致病因子。STEC通过菌毛介导的黏附作用,定植于肠上皮细胞并产生毒素,引起微血管的病理学改变,表现出水肿病的临床症状。疫苗免疫仍然是防控水肿病的最佳途径。近年来,随着水肿病致病机制研究的深入,以及菌蜕疫苗、转基因植物疫苗、核酸疫苗等新型疫苗的试验性报道为水肿病的预防带来了新的认识和起点。本文概述了当前致病机制及STEC疫苗的国内外研究进展,对各类疫苗的优劣及试验研究情况进行了梳理,为今后疫苗研发提供参考。
刘曼迪[2]（2019）在《猪源产肠毒素大肠杆菌总RNA的免疫保护作用研究》文中进行了进一步梳理产肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）引起的仔猪大肠杆菌病在世界范围内广泛流行。该病可导致仔猪黄痢、白痢、水肿病及断奶腹泻等多种疾病,给猪场造成严重的经济损失。仔猪大肠杆菌病目前的防治方法包括服用抗生素和氧化锌药物,但抗生素导致大肠杆菌耐药性增加,氧化锌药物则经粪便排泄导致重金属污染,因此亟需寻找更为高效、环保的免疫预防方法。近年来多项研究表明,病原体RNA是一种重要的病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）,例如李斯特菌RNA、呼肠孤病毒RNA、仙台病毒RNA、非致病性大肠杆菌RNA都可以在人体或小鼠细胞中诱发天然免疫反应。然而,ETEC的PAMPs研究仅局限于蛋白质水平,如黏附素和肠毒素,而ETEC总RNA能否作为PAMPs诱导宿主产生免疫反应尚不明确。本研究旨在通过探索ETEC总RNA在细胞水平和动物水平引发的天然免疫和适应性免疫保护作用,为针对仔猪大肠杆菌病研发RNA类的疫苗佐剂或免疫增强剂奠定理论基础和提供新思路。首先,在细胞水平上,采用猪源ETEC菌体、ETEC总RNA分别刺激猪小肠上皮细胞（porcine intestinal epithelial cells,IPEC）,ELISA结果表明,ETEC菌体和总RNA均可诱导IPEC细胞分泌IL-1β,产生天然免疫反应。其次,在动物水平,分别使用仔猪大肠埃希氏杆菌三价灭活疫苗、ETEC总RNA及PBS肌肉注射于小鼠模型,在免疫前、免疫后10天、免疫后20天采用ELISA方法检验血清IL-1β和免疫球蛋白水平。结果表明,ETEC总RNA注射组小鼠血清中IL-1β浓度显着高于PBS对照组（P<0.05）。ETEC总RNA注射组小鼠血清中IgG1、IgG2b、IgA和IgM浓度均显着高于PBS对照组（P<0.05）。其中RNA注射组小鼠血清中IgM平均浓度极显着高于疫苗组（P<0.01）,是疫苗组和PBS组的2-3倍。以上结果证明ETEC总RNA可诱导小鼠模型产生高强度体液免疫反应。最后,使用仔猪大肠埃希氏杆菌三价灭活疫苗、ETEC总RNA、疫苗/RNA混合物及PBS接种于小鼠模型,在免疫后第23天进行ETEC攻毒试验,使用绝对致死量的ETEC腹腔注射于小鼠模型并连续观察5天。结果显示,RNA免疫组的小鼠存活率为75%,疫苗免疫组存活率为12.5%,疫苗/RNA混合免疫组小鼠存活率为75%,PBS阴性对照组小鼠存活率为0%,RNA免疫组及疫苗/RNA混合免疫组小鼠存活率均高于阴性对照组和疫苗免疫组。结果表明,接种ETEC总RNA对猪源ETEC感染小鼠模型有良好的保护效果,ETEC总RNA可显着提高疫苗的保护水平。此外,本研究还进一步检测了接种不同剂量ETEC总RNA对小鼠体液免疫的影响。试验结果显示,高剂量RNA免疫组的小鼠血清中IgG1、IgG2b、IgM和IgA均显着高于低剂量组（P<0.05）。在ETEC攻毒试验中,接种高剂量ETEC总RNA的小鼠存活率高于低剂量组。因此可以证实,ETEC总RNA对小鼠的免疫效果与RNA剂量成正相关。综上所述,本研究可得出结论:猪源ETEC总RNA可刺激猪小肠上皮细胞产生天然免疫反应,注射小鼠模型可产生体液免疫反应,针对ETEC感染有良好的免疫保护效果,其保护效果与ETEC总RNA的剂量成正相关。
张鹏[3]（2019）在《安徽部分猪场产肠毒素大肠杆菌分离鉴定、生物学特性及灭活疫苗的初步研究》文中指出仔猪黄白痢多发生于仔猪初生及断奶前后,是规模化猪场最常见的猪病之一,也是最难根治的一种传染病。发病仔猪临床表现为食欲不振,消瘦,拉稀薄的黄痢或黏稠的白痢,严重甚至会引起死亡。该病主要病原是产肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）,ETEC的主要致病因子是两种肠毒素,分别是耐热肠毒素（heat stable enterotoxin,ST）和不耐热肠毒素（heat labile enterotoxin,LT）,它们会引起仔猪腹泻,甚至死亡,严重影响养猪业的健康发展。由于ETEC具有较高的耐药性和致病性,其对养猪业的威胁需要引起高度重视。本研究经调查安徽部分地区规模化猪场仔猪黄白痢流行情况,分析ETEC致病因子、耐药情况以及血清型等生物特性,制备相应的灭活疫苗,研究其对小鼠免疫效果,为安徽部分地区规模化猪场ETEC的有效防治提供依据。1安徽部分地区猪场仔猪ETEC的分离鉴定及血清型分析在安徽6个地区17个规模化猪场采集初生到断奶后仔猪新鲜粪便、直肠拭子等479份,经麦康凯琼脂（MacConkey agar,Mac）增菌划线、单菌落形态鉴定、16SrRNA和特异性毒力基因的PCR鉴定及测序,分离得到110株ETEC,其中同时含有ST和LT基因的6株,仅含ST基因的97株,仅含LT基因的7株。通过PCR和血清凝集试验对110株ETEC菌株进行血清型鉴定,共定型52株,占总菌株数的47.3%。鉴定出的血清型主要有O8、O20、O128、O15、O25、O114、O3、O9、O137和O141等13种血清型,其中O8,O20,O128为优势血清型,分别占26.9%（14/52）,21.2%（11/52）和11.5%（6/52）。在6个地域均存在优势血清型。2安徽部分地区猪场仔猪ETEC耐药性及毒力测定使用13种药敏纸片对110株ETEC进行耐药分析,试验结果表明,多重耐药分布广泛,10重耐药及其以上的菌株占比为38.1%（42/110）,多集中于安徽中南部地区猪场。大部分对红霉素,强力霉素,阿莫西林,甲氧苄啶/磺胺甲恶唑和四环素等高度耐药,耐药率均高达90%以上,如:红霉素94.5%（104/110）,强力霉素100%（110/110）,阿莫西林 91.8%（101/110）,甲氧苄啶/磺胺甲恶唑 94.5%（104/110）和四环素97.3%（107/110）。有51.8%（57/110）的菌株对头孢噻肟敏感,47.3%（52/110）的菌株对恩诺沙星敏感,对多粘菌素B的敏感率最高,达90%（99/110）。对31株优势血清型ETEC菌株进行毒力测定,其中O8血清型菌株14株,O20血清型菌株11株,O128血清型菌株6株,腹腔注射剂量为5×107CFU/只,每株菌攻毒6只小鼠。试验结果显示,O8血清型中有7株强毒株,O20血清型中有8株强毒株,O128有4株强毒株。选择O8强毒株FXYD4-1进行半数致死量（LD50）和最低致死量（MLD）的测定,结果显示O8强毒株FXYD4-1的LD50为5.1 × 106 CFU/只,MLD为 3×107CFU/只。3仔猪黄白痢灭活疫苗制备及对小鼠的免疫效果研究用优势血清型的强毒株和弱毒株分别制备单价灭活疫苗,其中包括O8血清型强毒株FXYD4-1和弱毒株QJZX2制成的疫苗、O20血清型强毒株FDDS1和弱毒株FXYQ1制成的疫苗以及O128血清型强毒株QJXW2-2和弱毒株YQBYZ2-4制成的疫苗,分别以2×108CFU/只腹腔免疫四周龄小鼠,一免后两周二免,二免后一周攻毒,攻毒菌株选择优势血清型强毒株,攻毒剂量为5×107CFU/只,结果表明,血清型O8强毒株FXYD4-1灭活苗对小鼠的保护率在66.7%（2/6）以上;而血清型O20弱毒株FXYQ1制备的灭活疫苗对小鼠的保护率在83.3%（1/6）以上;FXYD4-1和FXYQ1制备的灭活疫苗对O128血清型菌株攻毒小鼠的保护率均达100%。因此,进一步选取O8血清型强毒株FXYD4-1和O20血清型弱毒株FXYQ1混合制成二价灭活苗,对小鼠进行腹腔免疫,免疫剂量为2×108CFU/只,结果显示二价灭活苗对小鼠的保护率在50%以上（3/6）。对免疫前后小鼠血清中的抗体效价测定,表明一免后抗体效价有所上升,二免抗体效价显着高于一免抗体效价。
刘瑞生[4]（2016）在《免疫增强剂在养猪业上的研究与应用进展》文中进行了进一步梳理免疫增强剂又称免疫佐剂,是一类能够通过非特异性途径提高动物机体对抗原或微生物特异性反应的物质。研究表明,在养猪业上应用免疫增强剂,可以增强猪免疫机能,提高抗病能力,防止仔猪腹泻,减轻仔猪断奶应激,改善生产性能,提高疫苗免疫效果,因此对免疫增强剂的研究和应用逐渐引起了养猪界的普遍关注和重视。现将常用的几种免疫增强剂介绍如下。1生物制剂1.1转移因子转移因子（TF）是白细胞中有免疫活性的T淋巴
杨旭容[5]（2012）在《仔猪大肠杆菌病病因与防治措施探讨》文中提出仔猪大肠杆菌病是养猪生产中的常发病,防治不当会给养猪生产带来巨大的损失。笔者经过多年在猪场的临床实践认为:该病的发病原因主要有饲养条件差、突然改变环境或应激、母猪患病导致、饲料和饲养管理不当、怀孕母猪出现猪瘟亚临床感染导致仔猪免疫力降低等。应该采取加强管理调整饲料配方、药物预防、母猪和仔猪免疫接种大肠杆菌苗和猪瘟疫苗、临床对症治疗等综合性防治措施。仔猪死亡率从2010年的15%降到2011年的8.49%,收到了很好的效果。
陈晓浪[6]（2010）在《仔猪大肠杆菌病的快速诊断与仔猪腹泻自家灭活疫苗的研制》文中指出仔猪大肠杆菌病仍然是危害我国养猪业的重要疾病,给养猪业带来的损失不可低估,因此研究该病的快速诊断和有效防治方法具有重要意义。断奶仔猪水肿病（postweaning edema disease in piglets）是由产志贺毒素大肠杆菌（shiga toxin-producing Escherichia coli, STEC）感染引起,其初步诊断主要依赖临床检查及死后剖检,确诊则必须进行病原菌分离鉴定。本研究根据发表的志贺毒素2型变异体（shiga-toxin2e, Stx2e）基因序列设计1对引物,建立了检测STEC的PCR方法,经已知毒素类型参考菌株检测证明能够特异鉴定STEC采集疑似仔猪水肿病猪死前直肠棉拭子样品5份和死后十二指肠病料15份,接种LB肉汤,37℃培养4-6h后,用建立的PCR对培养物进行快速检测,结果19份为STEC检测阳性,表明该PCR诊断方法不仅具有简单、快速、可靠等优点,而且适合于病猪死前检测。产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC）是仔猪腹泻（porcine diarrhea）的主要病原。本研究根据发表的大肠杆菌肠毒素STl、ST2、LT1以及耶尔森氏菌强毒力岛（high pathogenicity island, HPI）基因序列设计引物,建立了基于毒力基因检测ETEC诊断PCR方法。已知毒力型参考菌株的扩增结果表明,建立的PCR方法能特异鉴定ETEC和HPI+大肠杆菌。采集临床腹泻病仔猪肛拭子样品200份,接种LB肉汤,37～℃培养4-6h后进行PCR检测,结果显示105份（52.5%）为HPI+大肠杆菌检测阳性,15份（7.5%）为HPI+大肠杆菌和ETEC检测阳性,13份（6.5%）为ETEC检测阳性,表明该方法具有快速、准确和适合活体检测等优点。为了进一步研究HPI+大肠杆菌与仔猪腹泻的相关性,采集临床腹泻仔猪和健康仔猪肛拭子样品,接种LB肉汤,37℃培养4-6h后用上述PCR进行检测。结果显示：在110份临床腹泻仔猪肛拭子样品中,64份（58.18%）为HPI+大肠杆菌检测阳性；在54份临床健康仔猪样品中,仅24份（44.44%）为HPI+大肠杆菌检测阳性。从64份HPI+大肠杆菌检测阳性腹泻仔猪肛拭子样品中分离得600株大肠杆菌,25株经PCR鉴定为HPI+大肠杆菌,其中2株（8%）为F4+,4株（16%）为F6+,2株（8%）为F4+和F6+,1株（4%）为F6+LT1+ST2+。从24份HPI+大肠杆菌检测阳性临床健康仔猪肛拭子样品中分离得480株大肠杆菌,经PCR鉴定20株为HPI+大肠杆菌,其中仅1株（5%）为LT1+ST2+,未发现携带菌毛的大肠杆菌。血清学检测结果表明,0138为HPI+大肠杆菌的优势抗原型。结合先前的研究资料可以推测,HPI+大肠杆菌为仔猪腹泻的条件性致病菌。为了研制更有针对性的疫苗用于防疫,本研究从江苏某种猪场采集腹泻仔猪肛拭样品40份,经短暂液体培养后进行的PCR检测显示,62.5%的检测样品为HPI+大肠杆菌检测阳性,12.5%为HPI+大肠杆菌和ETEC检测阳性,5%为ETEC检测阳性。从中选择2个优势菌株制备双价氢氧化铝胶灭活自家疫苗,同场母猪免疫接种试验结果表明,其所产的46头仔猪的腹泻发病率为23.9%,商品化大肠杆菌三价灭活苗免疫母猪所产仔猪的腹泻发生率为28.9%,而非免疫组的仔猪腹泻发生率为55.5%。黏附抑制试验结果表明,免疫组和对照组母猪分娩后第一天的乳清抗体均能抑制K88+和987P+与猪小肠上皮细胞的黏附,第7天的乳清抗体均不能抑制K88+大肠杆菌与小肠上皮细胞的黏附,而免疫组母猪分娩后第7天的乳清抗体能明显抑制987P+大肠杆菌与猪小肠上皮细胞的黏附。
吴华松,彭俊宇[7]（2009）在《一起仔猪水肿病的诊断与治疗》文中研究表明通过对湖南省新化县某养猪场的40kg以下的发病仔猪进行临床症状观察、病理剖检和实验室诊断,确诊为仔猪水肿病。通过采用肌肉注射强力水肿灵进行治疗,并对易感猪群肌注仔猪水肿病三价灭活疫苗进行紧接免疫接种,有效控制了病情。
满晓营[8]（2009）在《猪水肿病与仔猪副伤寒二价基因工程疫苗研究》文中研究表明猪水肿病是由特定血清型产类志贺氏毒素大肠杆菌（Shiga-like toxin Escherichiacoli,SLTEC）引起猪的一种急性、致死性传染病,发病率低,但病死率高,幸存者发育迟缓,饲料回报率低,给养猪业带来很大的经济损失。猪霍乱沙门氏菌（SalmonellaCholeraesuis）是导致2-4月龄仔猪副伤寒的主要病原,过去曾是危害我国养猪业的主要疾病之一,现在在我国特别是农村散养户普遍存在,造成一定经济损失。产类志贺毒素大肠杆菌的两个主要毒力因子是F18ab菌毛与类志贺毒素Ⅱ型变异体（SLT-Ⅱe）。编码F18ab的基因有6个:fedA、fedB、fedC、fedD、fedE和fedF。Smeds A等（2001）利用融合蛋白对F18菌毛粘附特性作了进一步的研究,表明纯化的FedF与细菌的粘附相关。SLT-Ⅱe毒素是由一个A亚基和5个B亚基共同组成的聚合体。SLT-Ⅱe的B亚基没有毒性,而具有免疫原性,是水肿病毒素的主要保护性抗原。沙门氏菌作为疫苗活载体己受到学界的广泛重视,其主要优点包括沙门氏菌可以经口服或鼻内途径免疫,操作方便,对接种对象应激小。此外,沙门氏菌为胞内侵袭细菌,可以有效呈递抗原,并激发抗沙门氏菌和诱导外源蛋白的特异性体液与细胞免疫反应,并能同时诱导粘膜免疫与全身免疫。基于以上原因,希望构建以沙门氏菌作为载体表达融合基因SLT-ⅡeB与FedF,得到一种疫苗可以同时预防仔猪水肿病和沙门氏菌病。主要研究内容包括:1、重组质粒pYA-SF的构建参照GenBank中大肠杆菌EC0412A株SLT-ⅡeB和FedF序列设计引物,以WH3基因组为模板扩增并克隆SLT-ⅡeB与FedF基因,扩增片段大小为204bp和840bp,前者引物引入EcoRI和SalⅠ酶切位点,后者引入SalⅠ和HindⅢ酶切位点。回收PCR产物,连接pMD18-T,得到质粒pMD18-SLT-ⅡeB-FedF,用EcoRⅠ和HindⅢ分别对质粒pMD-SLT-ⅡeB-FedF和pYA3493双酶切,回收、连接、转化Asd-大肠杆菌x6097,得到质粒pYA-SLT-ⅡeB-FedF（缩写为pYA-SF）。2、重组菌株C501（pYA-SF）的构建与鉴定将重组平衡表达质粒pYA-SF电转化△asdC500缺失株,在无DAP的LB平板上筛选阳性重组子。用引物pa7/pa6对重组菌株进行鉴定,可以扩增出△asd缺失型菌株的2,229 bp片段,而亲本菌C500则扩增出4,000 bp的片段;引物ps1/ps2扩增出SLT-ⅡeB特异性片段204 bp,引物pf1/pf2扩增出FedF特异性片段840 bp,而亲本菌C500则不能扩增出该两种片段。结果表明获得含有pYA-SF质粒的重组菌株是正确的。3、重组菌株生物学特性的研究表型研究与生化特性研究表明重组菌株C501（pYA-SF）与亲本株C500相同。生长曲线得出C501（pYA-SF）生长速度与亲本菌株C500相似,而比C500缺失菌株△asdC500（pYA3493）的生长速度稍快。遗传特性研究表明重组菌株可以稳定遗传。SDS-PAGE结果显示,重组菌株可以分泌表达,因为重组菌株C501（pYA-SLT-ⅡeB-FedF）在约37kDa处有明显的表达带,而空载体对照菌株C501（pYA3493）则没有对应的表达带。4、基因工程疫苗对小鼠的免疫保护效力研究皮下免疫小鼠,每周采集小鼠血清,利用间接ELISA检测所有免疫组的IgG抗体,结果表明针对相应抗原的抗体相应增加,加强免疫后抗体平均水平进一步提高。小鼠免疫后30天,分别用猪霍乱沙门氏菌强毒株C78-1(1×107.1 CFU)口服攻毒和猪水肿病大肠杆菌强毒株WH3（5×108 CFU）腹腔攻毒,亲本菌株C500组和重组菌株免疫组小鼠抵抗10×LD50的猪霍乱沙门氏菌强毒株C78-1的攻击,而PBS对照组小鼠全部死亡,然而重组菌株免疫组和水肿病三价灭活苗组对2.5×LD50大肠杆菌强毒株WH3的攻击差别比较大,重组菌株免疫组只能提供43%的保护率,灭活苗组却能提供89%的保护率,同期的PBS对照组小鼠全部死亡。5、基因工程疫苗对猪的免疫保护力研究重组菌株的安全性试验结果发现所有C500（pYA-SF）肌肉注射接种组仔猪的精神食欲正常,未见异常变化。亲本菌株C500接种的仔猪,也没有异常临床表现。将6×109 CFU重组菌株C501（pYA-SF）分别通过肌肉注射途径免疫20日龄仔猪,结果显示免疫仔猪能产生较高水平的抗沙门氏菌和SLTEC重组蛋白rSF的血清IgG,并能抵抗5×LD50猪霍乱沙门氏菌强毒株C78-1的耳静脉攻击（4/4）。同时,免疫仔猪也能抵抗SLTEC强毒株WH3分泌毒素的耳静脉攻毒途径的攻击（3/4）,而PBS组（0/4）和C501（pYA3493）载体对照组（1/4）均不能提供有效保护。说明研究构建的猪水肿病与仔猪副伤寒重组二价活疫苗株C501（pYA-SF）能保护免疫仔猪抵抗猪霍乱沙门氏菌和SLTEC的攻击,有望成为实用有效的二价活疫苗株。
苗玉和[9]（2007）在《仔猪水肿病灭活疫苗的研制》文中指出猪水肿病（Edema disease, ED）是由产志贺毒素大肠杆菌（STEC）引起的以头部、肠系膜和胃壁浆液性水肿为特征的一种肠毒血症,常伴有共济失调、麻痹或惊厥等神经症状。本病多发生于断奶前后的仔猪,呈地方性流行和散发性,猪水肿病发病率虽然只有10%～30%,但致死率可高达80%～100%,是影响养猪业发展的重要传染病之随着猪场养殖规模的扩大和仔猪饲养密度的增加,猪水肿病日益严重,成为导致断奶仔猪死亡的重要传染病。本病的防治目前主要采取加强饲养管理及对病程稍长的仔猪对症治疗的综合性防治措施,但治愈率不高。由于本病的致死率高,所以疫苗免疫已成为防制本病的最经济的、有效的途径之一能引起猪水肿病的大肠杆菌称为产志贺毒素大肠杆菌（STEC）, STEC有两类毒力因子：黏附素（adhesin）和志贺毒素（Stx）。黏附素包括菌毛、外膜蛋白（OMP）、紧密素（intimin）等。F18菌毛是STEC菌株的一个重要的毒力因子,它有助于细菌在猪肠黏膜上皮细胞定居和繁殖。而志贺毒素系STEC所产生的一种蛋白质性细胞毒素。STEC有多种血清型,常见的有O139：K82、O138：K81、O141：K85、O45、O8等。近年来有关STEC分离及鉴定的报道比较多,但疫苗研制的效果并不理想,目前还没有安全稳定、免疫效果确实的商品化疫苗被国家批准和面市。本课题以从中国兽医药品监察所引进的临床常见血清型的标准株为研究对象,旨在研发出免疫效果确实、应用范围较广的高效安全的商品化疫苗。我们引进的菌种为O138、O139、O141三个血清型的大肠杆菌C839O5、C83684、C83527的冻干菌种,首先,按照疫苗生产工艺和新兽药申报的有关要求,进行了菌种的纯粹性检验、菌体形态及培养特性观察、生化特性鉴定、血清型鉴定、毒力测定、免疫原性测定及稳定性测定等试验。结果表明此三株菌种均为革兰氏阴性菌,生化特性符合大肠杆菌的特性,菌种C83905株的菌体抗原血清型为O138,C83527株为O141、C83684株为O139；菌株对小鼠的最小致死量（MLD）分别为：C83905株3.6×108CFU,C83527株3.0×108CFU,C83684株2.0×108CFU；C83905、C83684、C83527三株菌的毒素对小鼠的最小致死量均为0.1mL/只,混合毒素为0.2mL/只；C83905、C83684、C83527三株菌毒素对14～18日龄仔猪的最小致死量分别为30mL、40mL、40mL,混合毒素的最小致死量为30mL/头；用三个菌株制备的灭活疫苗（灭活前含活菌数为3.0×108CFU/mL）,分别以0.05mL/只免疫小鼠和以2mU头免疫14～18日龄仔猪,分别进行致死量的强毒菌和强毒菌毒素的攻击,均能达到80%～100%的保护率,充分表明了三株菌具有非常好的免疫原性。综上所述,引进的菌种具备了作为兽用生物制品菌种的基本条件。在此基础上,又对菌种的培养条件、灭活条件及疫苗佐剂选择进行了优化,如使用改良的LB培养基、以0.4%浓度甲醛37℃灭活48h和使用氢氧化铝胶作为佐剂等等,最终成功研制了仔猪水肿病三价（0138、0139、0141）灭活疫苗。根据实验结果,初步制定了仔猪水肿病灭活疫苗制造与检验试行规程和质量标准。通过对实验室试制的6批疫苗进行安全性试验、效力试验、最小免疫剂量测定及疫苗的免疫期试验和保存期试验等,表明了制备的疫苗具有良好的安全性和良好的保护力。安全性试验结果表明,用16-18g小鼠每只皮下注射0.3mL疫苗和用14日龄仔猪每头肌肉注射4mL疫苗均安全；最小免疫剂量试验表明,免疫小鼠能达50%以上保护的免疫剂量是0.01mL/只,免疫仔猪能达50%以上保护的免疫剂量1.0mL/头；此疫苗免疫小鼠能达100%以上保护的最小免疫剂量是0.05mL/只,免疫仔猪能达100%以上保护的最小免疫剂量1.5mL/头,为保证免疫效果确实,将此疫苗的使用剂量确定为2mL/头。经检验,该疫苗的甲醛、硫柳汞含量均符合制品的有关规定,免疫期至少可达3个月。此疫苗在2-8℃条件下保存到24个月,物理性状仍达到规程要求的标准,保存到18个月,效力仍能达到80%保护以上。另外,关于菌株毒力、疫苗安全性和保护性试验证明,对小鼠的使用剂量与对仔猪的使用剂量具有相关性,在实际生产中可用小鼠代替仔猪进行检验。根据实验室的试制情况,我们完善了仔猪水肿病灭活疫苗制造与检验试行规程和质量标准,并按照试行规程进行了中试生产,经检验,试制的6批疫苗经检验符合制定的质量标准。田间试验和扩大田间试验结果表明,实验室试制的6批疫苗,均具有良好的安全性和确实的效力,保护率达95%以上。中试疫苗在沈阳市、大连市、鞍山市、锦州市、铁岭市、辽阳市等地区免疫仔猪10万余头,均安全有效,总保护率达95%以上,对控制仔猪水肿病收到了满意的结果。以溶血性大肠杆菌C83905、C83684、C83527研制的仔猪水肿病灭活疫苗,按照新兽药申报的要求进行了注册申报,经过多次完善和补充试验,制备的三批样品,经中国兽医药品监察所进行质量标准复核检验,结果均达到制定的质量标准要求。该疫苗于2006年8月份率先获得农业部颁发的国家二类新兽药证书[证号：（2006）新兽药证字30号]
方文山[10]（2007）在《吉林地区仔猪水肿病流行病学调查及灭活疫苗的制备》文中认为自Shanks（1938）首次报道猪水肿病后,目前已确认所有养猪国家均有发生。断奶1～2周仔猪最易发病,发病率达10%～30%,致死率高达90%。常发生在发育良好仔猪。据初步统计,吉林地区每年仔猪水肿病发病5000头左右,死亡近1300头,严重制约养猪业发展。因此,很有必要对仔猪水肿病的流行病学进行较为深入细致的调查,找出仔猪水肿病的发病规律,结合实际,制定出切实可行的综合防治方案,使养猪业健康发展。本文对吉林地区2006年各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查,发现猪水肿病在吉林地区呈零星散发性发生,发病率为0.29～1.36%,死亡率为0.08～0.35%,病死率为16.0～35.0%。水肿病主要侵害仔猪,育成猪也偶有发生。4～7月和9～10月份发病较多。同时从疑似猪水肿病的病死猪体内分离到8株细菌,根据其形态、培养特性和生长特性鉴定为大肠杆菌,动物致病性实验表明,8株均为致病性大肠杆菌,能致死小鼠。血清学鉴定出O8,O139,O141, O2共4种血清型,其中O8,O139,O141为优势血清型。用分离的猪水肿病大肠杆菌优势血清型制备出多价灭活疫苗。免疫剂量试验表明,易感仔猪肌肉注射6亿CFU/只,可获得坚强的免疫。将分离菌株用甲醛灭活,制成油乳剂灭活疫苗。疫苗无菌,性质稳定。疫苗免疫仔猪后肌肉进行攻毒试验,结果免疫组仔猪无异常临床表现。疫苗田间实验表明,对病料取样猪场的仔猪,免疫保护率达97%以上;对社会散养的仔猪,免疫保护率达92%以上。区域实验表明,在吉林部分地区免疫5000头,疫苗注射后保护率在90%以上。在生产实践中充分证明该疫苗的保护作用,为区域试验和大面积推广应用提供了依据,对有效防治猪水肿病具有参考价值。
二、仔猪水肿病三价灭活疫苗（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、仔猪水肿病三价灭活疫苗（论文提纲范文）
（2）猪源产肠毒素大肠杆菌总RNA的免疫保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 1 引言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 仔猪大肠杆菌病概述 |
| 1.2.1 仔猪大肠杆菌病的流行病学 |
| 1.2.2 仔猪大肠杆菌病的临床症状与病理变化 |
| 1.2.3 诊断方法 |
| 1.2.4 防治方法 |
| 1.3 大肠杆菌病原学概述 |
| 1.3.1 生物学特征 |
| 1.3.2 病原结构及致病机制 |
| 1.3.3 耐药性研究 |
| 1.4 ETEC疫苗的研究进展 |
| 1.4.1 ETEC疫苗的种类 |
| 1.4.2 ETEC疫苗目前面临的问题 |
| 1.4.3 RNA疫苗的发展研究及应用 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 动物体外试验 |
| 2.1.2 动物体内试验 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物体外试验 |
| 2.2.2 动物体内试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 ETEC及 ETEC总 RNA诱导IPEC产生天然免疫应答 |
| 3.1.1 ETEC菌体感染IPEC诱导天然免疫反应 |
| 3.1.2 ETEC总 RNA刺激IPEC产生天然免疫反应 |
| 3.1.3 ETEC总 RNA剂量对诱导天然免疫反应的影响 |
| 3.2 ETEC总 RNA诱导小鼠模型产生免疫应答 |
| 3.2.1 ETEC总 RNA免疫小鼠模型的临床表征和病理变化 |
| 3.2.2 ETEC总 RNA诱导小鼠模型产生促炎因子IL-1β |
| 3.2.3 ETEC总 RNA诱导小鼠产生体液免疫应答 |
| 3.3 ETEC总 RNA对 ETEC感染小鼠保护率的影响 |
| 3.3.1 ETEC感染小鼠绝对致死量的测定 |
| 3.3.2 ETEC总 RNA免疫可提高感染ETEC小鼠的保护率 |
| 3.4 ETEC总 RNA的接种剂量对小鼠体液免疫的影响 |
| 3.4.1 接种不同剂量ETEC总 RNA小鼠的临床表征和病理变化 |
| 3.4.2 ETEC总 RNA的接种剂量对小鼠血液中促炎因子IL-1β含量的影响 |
| 3.4.3 ETEC总 RNA的接种剂量对小鼠体液免疫的影响 |
| 3.4.4 ETEC总 RNA的接种剂量对ETEC感染小鼠存活率的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 ETEC及 ETEC总 RNA引起IPEC天然免疫反应 |
| 4.2 接种ETEC总 RNA对小鼠模型体液免疫的影响 |
| 4.3 ETEC总 RNA提升感染ETEC小鼠保护率 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（3）安徽部分猪场产肠毒素大肠杆菌分离鉴定、生物学特性及灭活疫苗的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略符号 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 产肠毒素大肠杆菌概述 |
| 1 仔猪黄白痢特征 |
| 2 ETEC的致病因子研究进展 |
| 2.1 病原学 |
| 2.2 血清型 |
| 2.3 致病因子 |
| 3 ETEC的耐药性研究进展 |
| 3.1 ETEC的耐药性现状 |
| 3.2 ETEC的耐药机制 |
| 4 ETEC疫苗的研究概况 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第二章 仔猪ETEC的分离及血清型鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 采集样本 |
| 1.2 试验仪器与试剂 |
| 1.3 引物 |
| 1.4 样本处理 |
| 1.5 分离鉴定 |
| 1.6 血清型鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 样品采集与菌株分离 |
| 2.2 ETEC菌株的鉴定 |
| 2.3 血清型鉴定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 仔猪ETEC的耐药性及毒力测定 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试验仪器与试剂 |
| 1.3 药敏试验 |
| 1.4 ETEC菌株的致病力测定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 药敏试验 |
| 2.2 致病力测定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 ETEC灭活疫苗对小鼠的保护效果研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试验仪器与试剂 |
| 1.3 灭活疫苗制备方法 |
| 1.4 单价灭活疫苗免疫效果评估 |
| 1.5 二价灭活疫苗免疫效果评估 |
| 1.6 抗体效价测定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同优势血清型单价灭活苗对小鼠的保护效果 |
| 2.2 二价灭活苗对小鼠的保护效果 |
| 2.3 抗体效价测定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 硕士期间发表论文 |
| 致谢 |
（4）免疫增强剂在养猪业上的研究与应用进展（论文提纲范文）
| 1 生物制剂 |
| 1.1 转移因子 |
| 1.2 胸腺肽 |
| 1.3 干扰素 |
| 1.4 白细胞介素 |
| 2 化学药物 |
| 2.1 左旋咪唑 |
| 2.2 微量元素硒制剂 |
| 2.3 维生素E |
| 3 中草药及提取物 |
| 4 蜂胶 |
（5）仔猪大肠杆菌病病因与防治措施探讨（论文提纲范文）
| 1 发病原因 |
| 1.1 饲养条件较差 |
| 1.2 仔猪受环境应激或突然改变环境 |
| 1.3 哺乳母猪患病 |
| 1.4 饲料或饲养管理不当 |
| 1.5 母猪的猪瘟疫苗免疫失败或免疫效果差 |
| 2 临床症状 |
| 3 预防措施 |
| 3.1 搞好母猪的词养管理 |
| 3.3 加强预防免疫 |
| 4 治疗方法 |
| 5 讨论 |
（6）仔猪大肠杆菌病的快速诊断与仔猪腹泻自家灭活疫苗的研制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 1 大肠杆菌与仔猪疾病 |
| 1.1 大肠杆菌的一般特性与分类 |
| 1.2 大肠杆菌引起的仔猪疾病 |
| 1.3 仔猪大肠杆菌病的预防 |
| 2 大肠杆菌常见的毒力因子 |
| 2.1 肠毒素(enterotoxin) |
| 2.2 志贺氏菌毒素(Shiga toxin,Stx) |
| 2.3 黏附素性菌毛(adhesive fimbriae) |
| 2.4 毒力岛(pathogenicity island,PAI) |
| 参考文献 |
| 研究一：致仔猪水肿病大肠杆菌的PCR快速诊断 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究二：致仔猪腹泻大肠杆菌的PCR快速检测 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究三：HPI~+大肠杆菌与仔猪腹泻的相关性研究 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究四：大肠杆菌性仔猪腹泻自家疫苗的研制及应用 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究五：免疫母猪初乳对大肠杆菌黏附猪肠上皮细胞的阻断作用 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（7）一起仔猪水肿病的诊断与治疗（论文提纲范文）
| 1 发病情况 |
| 2 临床症状 |
| 3 剖检变化 |
| 4 实验室诊断 |
| 4.1 病料的采集 |
| 4.2 病原分离及纯化 |
| 4.3 染色镜检 |
| 4.4 生化试验及细菌测定 |
| 4.5 分离菌株的致病性试验 |
| 4.6 致病性菌株的O血清型鉴定 |
| 4.7 药敏试验 |
| 5 治疗与预防 |
| 6 讨论 |
（8）猪水肿病与仔猪副伤寒二价基因工程疫苗研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词(ABBREVIATION) |
| 1 文献综述 |
| 1.1 猪水肿病的研究进展 |
| 1.1.1 猪水肿病的病原学 |
| 1.1.2 猪水肿病的毒力因子 |
| 1.1.3 猪水肿病的致病机理 |
| 1.1.4 猪水肿病的影响因素 |
| 1.1.5 猪水肿病的诊断 |
| 1.1.6 猪水肿病的免疫研究 |
| 1.2 猪沙门氏菌病的研究进展 |
| 1.2.1 猪沙门氏菌病及其危害 |
| 1.2.2 猪霍乱沙门氏菌的特征 |
| 1.2.3 沙门氏菌病的诊断 |
| 1.2.4 防治策略 |
| 1.2.5 沙门氏菌疫苗研究进展 |
| 1.3 弱毒沙门氏菌载体的研究进展 |
| 1.3.1 弱毒沙门氏菌载体的优点 |
| 1.3.2 弱毒沙门氏菌载体的缺点及改进方法 |
| 1.3.3 沙门氏菌载体的应用 |
| 2 目的与意义 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 质粒的制备 |
| 3.2.2 沙门氏菌电转化 |
| 3.2.3 沙门氏菌和大肠杆菌ELISA检测方法的建立 |
| 3.2.4 大肠杆菌原核表达 |
| 3.2.5 重组菌株的构建与鉴定 |
| 3.2.6 重组疫苗菌株的生物学特性研究 |
| 3.2.7 重组菌株的毒力试验 |
| 3.2.8 重组疫苗菌株对小鼠的免疫保护性试验 |
| 3.2.9 重组疫苗菌株对仔猪的免疫保护性试验 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 重组菌株的构建与鉴定 |
| 4.2 重组菌株的生物学特性 |
| 4.2.1 重组菌株的表型研究结果 |
| 4.2.2 重组菌株的生长特性鉴定 |
| 4.2.3 重组菌株的遗传稳定性 |
| 4.2.4 重组菌株的分泌表达 |
| 4.3 重组菌株的毒力试验 |
| 4.4 免疫小鼠的保护性试验 |
| 4.4.1 免疫小鼠的沙门氏菌抗体检测 |
| 4.4.2 免疫小鼠针对沙门氏菌攻毒的保护力 |
| 4.4.3 免疫小鼠针对rSF的抗体检测 |
| 4.4.4 免疫小鼠针对产志贺氏毒素大肠杆菌攻毒的保护力 |
| 4.4.5 重组疫苗的细胞因子检测 |
| 4.5 重组疫苗对猪的免疫效力研究 |
| 4.5.1 重组疫苗对猪的安全性评价 |
| 4.5.2 重组疫苗免疫猪只后抗体检测 |
| 4.5.3 重组疫苗免疫猪只后毒株攻毒保护力 |
| 5 讨论 |
| 5.1 融合基因的选择与表达 |
| 5.2 SLT-IIeB与FedF融合基因在Δasd C500缺失株平衡致死系统中的表达 |
| 5.3 重组菌Δasd C500(pYA-SF)对动物的免疫试验 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
（9）仔猪水肿病灭活疫苗的研制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号及缩略语等的说明 |
| 第一章 猪水肿病概述 |
| 1 病原 |
| 2 发病机制 |
| 3 致病因子 |
| 3.1 黏附素 |
| 3.2 志贺毒素 |
| 3.3 致腹泻毒素 |
| 4 流行病学 |
| 5 临床临床症状 |
| 6 病理变化 |
| 7 疾病的防治 |
| 7.1 一般性措施 |
| 7.2 疾病的预防 |
| 7.3 疾病的治疗 |
| 第二章 仔猪水肿病灭活疫苗菌种的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 纯粹性检验 |
| 2.2 菌体形态及培养特性观察 |
| 2.3 菌种生化特性鉴定 |
| 2.4 菌种的血清型鉴定 |
| 2.5 菌种毒力测定 |
| 2.6 菌种免疫原性测定 |
| 2.7 三个菌株的稳定性测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 纯粹性检验 |
| 3.2 菌种形态及培养特性 |
| 3.3 菌种生化特性鉴定 |
| 3.4 菌种血清型鉴定 |
| 3.5 菌株对小鼠的毒力测定 |
| 3.6 毒素对小鼠致病性试验 |
| 3.7 毒素对14～18日龄仔猪致病性试验 |
| 3.8 菌株免疫原性测定 |
| 3.9 菌株的稳定性试验 |
| 3.10 菌种保存期试验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于疫苗菌株 |
| 4.2 关于菌株与毒素毒力的关系 |
| 第三章 仔猪水肿病灭活疫苗实验室研究与田间实验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 菌种的培养实验 |
| 2.2 灭活试验 |
| 2.3 佐剂的比较实验 |
| 2.4 仔猪水肿病灭活疫苗实验室产品制备 |
| 2.5 实验室产品检验 |
| 2.6 实验室产品的免疫期试验 |
| 2.7 实验室产品的保存期试验 |
| 2.8 实验室产品田间试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 培养基的选择试验结果 |
| 3.2 菌液灭活试验结果 |
| 3.3 不同佐剂疫苗的比较试验结果 |
| 3.4 仔猪水肿病灭活疫苗实验室产品制备 |
| 3.5 安全检验结果 |
| 3.6 最小免疫剂量测定结果 |
| 3.7 效力检验结果 |
| 3.8 甲醛、硫柳汞含量测定 |
| 3.9 保存期试验结果 |
| 3.10 疫苗免疫期试验结果 |
| 3.11 田间试验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于疫苗效力检验 |
| 4.2 关于疫苗织造与检验规程和质量标准 |
| 第四章 仔猪水肿病灭活疫苗中试生产、区域试验 #38与新兽药申报 |
| 1 材料 |
| 2 方法与结果 |
| 2.1 生产用菌种制备和检验、疫苗半成品织造和检验 |
| 2.2 成品制造与检验 |
| 2.3 区域试验 |
| 2.4 新兽药申报 |
| 3 小结 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附件一 |
| 附件二 中国兽药监察所质量复核检验报告 |
| 附件三 新兽药证书 |
| 致谢 |
（10）吉林地区仔猪水肿病流行病学调查及灭活疫苗的制备（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 仔猪水肿病研究进展 |
| 1.1 仔猪水肿病的病原特征 |
| 1.1.1 形态与染色 |
| 1.1.2 培养特征 |
| 1.1.3 生化反应特征 |
| 1.1.4 抗原结构 |
| 1.1.5 抵抗力 |
| 1.1.6 致病性 |
| 1.2 病因与流行病学特点 |
| 1.2.1 分布情况 |
| 1.2.2 宿主范围 |
| 1.2.3 年龄分布 |
| 1.2.4 流行季节 |
| 1.2.5 流行状况 |
| 1.2.6 地区性 |
| 1.2.7 传染源与传播途径 |
| 1.3 毒力因子与致病机理 |
| 1.3.1 黏附因子的种类和功能 |
| 1.3.2 水肿因子的结构和功能 |
| 1.3.3 诱因 |
| 1.4 临床症状 |
| 1.4.1 最急性型 |
| 1.4.2 急性型 |
| 1.4.3 慢性型 |
| 1.5 病理变化 |
| 1.5.1 临床病理剖检变化 |
| 1.5.2 病理组织学变化 |
| 1.6 诊断 |
| 1.6.1 病原菌分离鉴定 |
| 1.6.2 Ｏ抗原鉴定 |
| 1.6.3 SLT-IIe 的检测 |
| 1.7 预防 |
| 1.7.1 饲养管理 |
| 1.7.2 应用酸化剂控制 |
| 1.7.3 中西结合防治 |
| 1.7.4 免疫预防 |
| 第二章 仔猪水肿病疫苗免疫预防研究进展 |
| 2.1 疫苗性质 |
| 2.1.1 菌苗 |
| 2.1.2 亚单位苗 |
| 2.2 菌株的选择 |
| 2.3 影响疫苗免疫保护率的因素 |
| 第三章 吉林地区仔猪水肿病流行病学调查 |
| 3.1 仔猪水肿病流行病学调查 |
| 3.1.1 调查方法 |
| 3.1.2 调查结果 |
| 3.1.3 讨论 |
| 3.2 猪水肿病灭活疫苗的使用情况调查 |
| 3.2.1 调查方法 |
| 3.2.2 调查结果 |
| 3.2.3 讨论 |
| 3.3 抗猪水肿病血清治疗效果调查 |
| 3.3.1 调查方法 |
| 3.3.2 调查结果 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 仔猪水肿病病原分离鉴定 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 病料 |
| 4.1.2 培养基 |
| 4.1.3 微量发酵管 |
| 4.1.4 主要仪器 |
| 4.1.5 大肠杆菌Ｏ因子血清（Ｏ1-Ｏ163） |
| 4.1.6 实验动物 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 病原菌分离及纯粹性检验 |
| 4.2.2 病原菌形态及培养特性观察 |
| 4.2.3 病原菌生化特性鉴定 |
| 4.2.4 血清型鉴定 |
| 4.2.5 病原性鉴定 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 病原菌分离结果 |
| 4.3.2 纯粹性检验结果 |
| 4.3.3 病原菌形态及培养特性观察结果 |
| 4.3.4 菌株生化特性结果 |
| 4.3.5 菌株血清型鉴定结果 |
| 4.3.6 菌数测定结果 |
| 4.3.7 毒力测定结果 |
| 4.4 小结 |
| 4.4.1 病原菌鉴定 |
| 4.4.2 菌株最小致死量（MLD）确定 |
| 第五章 灭活疫苗的制备及相关试验 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 菌种 |
| 5.1.2 培养基 |
| 5.1.3 实验动物 |
| 5.1.4 Ｏ抗原抗血清 |
| 5.1.5 制苗试剂 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 灭活疫苗实验室半产品制备及半产品检验 |
| 5.2.2 灭活疫苗实验室成品制备及成品检验 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 灭活疫苗实验室半产品检验 |
| 5.3.2 灭活疫苗实验室成品检验结果 |
| 5.3.3 小结 |
| 第六章 灭活疫苗的免疫原性研究 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 疫苗 |
| 6.1.2 菌液 |
| 6.1.3 血清 |
| 6.1.4 断奶仔猪 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 免疫剂量筛选实验 |
| 6.2.2 血清抗体几何凝集效价测定 |
| 6.2.3 免疫产生期及血清抗体保护值测定 |
| 6.2.4 免疫持续期 |
| 6.2.5 保存期试验 |
| 6.2.6 田间试验 |
| 6.2.7 区域试验 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 免疫剂量筛选实验结果 |
| 6.3.2 血清抗体几何凝集效价测定结果 |
| 6.3.3 免疫产生期及血清抗体保护值测定结果 |
| 6.3.4 免疫持续期结果 |
| 6.3.5 保存期试验结果 |
| 6.3.6 田间试验结果 |
| 6.4 小结 |
| 6.5 讨论 |
| 6.5.1 关于病原体筛选 |
| 6.5.2 关于抗原选择 |
| 6.5.3 关于疫苗制备 |
| 6.5.4 关于免疫剂量及血清抗体效价消长规律 |
| 6.5.5 关于免疫效果 |
| 6.5.6 关于仔猪水肿病防治 |
| 第七章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、仔猪水肿病三价灭活疫苗（论文参考文献）
- [1]猪水肿病疫苗的研究进展[J]. 付杨,刘凯慧,田佳硕,石火英. 中国兽医科学, 2021(05)
- [2]猪源产肠毒素大肠杆菌总RNA的免疫保护作用研究[D]. 刘曼迪. 河北农业大学, 2019(12)
- [3]安徽部分猪场产肠毒素大肠杆菌分离鉴定、生物学特性及灭活疫苗的初步研究[D]. 张鹏. 南京农业大学, 2019(08)
- [4]免疫增强剂在养猪业上的研究与应用进展[J]. 刘瑞生. 养猪, 2016(02)
- [5]仔猪大肠杆菌病病因与防治措施探讨[J]. 杨旭容. 畜禽业, 2012(07)
- [6]仔猪大肠杆菌病的快速诊断与仔猪腹泻自家灭活疫苗的研制[D]. 陈晓浪. 扬州大学, 2010(04)
- [7]一起仔猪水肿病的诊断与治疗[J]. 吴华松,彭俊宇. 动物医学进展, 2009(12)
- [8]猪水肿病与仔猪副伤寒二价基因工程疫苗研究[D]. 满晓营. 华中农业大学, 2009(S1)
- [9]仔猪水肿病灭活疫苗的研制[D]. 苗玉和. 南京农业大学, 2007(07)
- [10]吉林地区仔猪水肿病流行病学调查及灭活疫苗的制备[D]. 方文山. 中国农业科学院, 2007(10)