一、一氧化氮合酶抑制剂对炎性刺激下软骨细胞增殖和基质代谢的影响（论文文献综述）
陈中概[1]（2020）在《白细胞介素18介导的软骨细胞自噬调控在骨关节炎中的作用及机制研究》文中提出骨性关节炎（Osteoarthritis,OA）又称退行性骨关节病,是常见的老年性疾病之一。随着我国人口老龄化的加剧,OA患病率呈逐渐上升的趋势,OA已成为影响我国中老年人健康与生活质量的重大问题,给患者、家庭和社会造成巨大的经济负担。目前临床上针对OA的治疗主要有药物对症治疗和关节置换手术两种方法,均以缓解临床症状为主,不能改变疾病的进程,迄今尚无有效的病因治疗方法。凋亡是机体通过基因调控方式主动清除不需要的或异常的特定细胞的一种生理调控过程。软骨细胞作为正常关节软骨中的唯一细胞成分,软骨细胞过度凋亡导致的软骨细胞丰度降低和软骨细胞外基质降解被认为是OA的主要病因。近年来,自噬作为机体维持细胞正常功能和稳态的一种机制,被发现与凋亡存在紧密的联系。一些研究表明,增强自噬可以起到抗软骨细胞凋亡的作用,能延缓OA的进展。为此,药物性激活自噬在未来可能成为一种治疗OA的有效方法。炎症反应对OA的发生发展有着重要作用。促炎症细胞因子是导致软骨细胞凋亡的关键介质之一,其中白细胞介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factorα,TNFα）被普遍认为是引起关节软骨基质降解的主要促炎症细胞因子。此外,近年来发现其他促炎症细胞因子如白细胞介素18（Interleukin-18,IL-18）也在OA发生发展过程中起着关键作用。先前研究表明,IL-18在OA患者滑膜液中的浓度明显升高,能诱导滑膜细胞和软骨细胞的炎症反应。近来还发现IL-18能诱导人软骨细胞的凋亡。然而,IL-18对软骨细胞自噬调控的影响尚不明确。因此,本次研究旨在探讨IL-18对软骨细胞自噬调控的影响及可能涉及的作用机制,并探索潜在的病因治疗方案。本次研究主要分成四部分:一、首先研究了IL-18对大鼠软骨细胞凋亡的影响。我们的研究发现IL-18能诱导体外培养的软骨细胞退变和软骨细胞凋亡,并在体内大鼠膝关节腔注射模型中观察到关节软骨退变的表现。二、使用IL-18处理体外培养的大鼠软骨细胞,探索IL-18对大鼠软骨细胞自噬的影响。结果发现高浓度IL-18能介导软骨细胞自噬不足。三、在体外培养的软骨细胞中,研究IL-18引起软骨细胞自噬不足的具体分子机制及其与软骨细胞退变的关系。结果发现IL-18引起软骨细胞自噬不足主要是通过PI3K-Akt-m TOR信号通路实现的,且与软骨细胞退变密切相关。四、在体外培养的大鼠软骨细胞以及体内大鼠膝关节腔注射模型中,观察常见自噬激动剂雷帕霉素（Rapamycin,Rapa）对IL-18介导的自噬不足和凋亡的影响。结果显示雷帕霉素能改善IL-18介导的自噬不足,并起到拮抗IL-18介导的促软骨细胞凋亡作用。我们的研究结果综合表明,IL-18介导的软骨细胞自噬不足能促进软骨细胞凋亡,在OA的发生发展中起重要作用;而且雷帕霉素能通过激活自噬起软骨保护作用,为OA提供了一种潜在的病因治疗方法。第一章IL-18对软骨细胞凋亡的影响目的:探究IL-18对大鼠软骨细胞凋亡的影响情况。研究方法:取4周龄（Sprague-Dawley,SD）大鼠关节软骨细胞进行体外分离培养,传代次数控制在4代以内。应用不同浓度的IL-18（0-100ng/m L）处理软骨细胞24小时后,用实时定量聚合酶链式反应（Real-Time Polymerase chain reaction,RT-PCR）法和Western免疫印迹（Western-blot）法分别检测细胞内软骨细胞表型基因Col2,Sox9和Aggrecan在m RNA和蛋白水平的表达变化,用Western-blot法检测细胞内凋亡相关因子包括凋亡抑制因子B型淋巴瘤细胞2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）,凋亡促进因子Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）和Caspase3/9在蛋白水平的表达变化。取20只6周龄雄性SD大鼠（150-200g）,随机分为2组,每组10只,分别为正常对照组和100ng/m L IL-18组,对照组大鼠注射50μL生理盐水,实验组大鼠注射等剂量含100ng/m L IL-18的生理盐水。每周注射2次,8周后处死动物,取膝关节标本进行番红-固绿染色及免疫组化检测,观察软骨退变情况以及聚蛋白聚糖（Aggrecan）、基质金属蛋白酶13（Matrix Metallopeptidase 13,MMP13）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）在组织中的表达情况。结果:在体外培养的大鼠软骨细胞中,IL-18能显着降低软骨细胞表型基因Col2,Sox9和Aggrecan在m RNA和蛋白质水平的表达,同时也显着抑制Bcl-2的表达,促进Bax和Caspase3/9的表达。动物体内实验结果显示,注射IL-18的大鼠膝关节退变程度较正常对照组轻,Aggrecan和MMP13表达减少,Caspase3表达增高。结论:IL-18对大鼠软骨细胞凋亡具有促进作用,且能引起关节软骨退变。第二章IL-18对软骨细胞自噬的影响目的:探究IL-18对大鼠软骨细胞自噬的影响情况。研究方法:取4周龄SD大鼠关节软骨细胞进行体外分离培养,传代次数控制在4代以内。应用浓度为100ng/m L的IL-18处理软骨细胞不同时间（0-24h）后,通过Westernblot法检测Atg5,Atg7,Beclin1,LC3B和P62等自噬标志物在蛋白质水平的表达情况,同时通过LC3B免疫荧光检测自噬小体随IL-18处理时间的变化。结果:Western-blot结果显示,浓度为100ng/m L的IL-18处理体外培养大鼠软骨细胞2小时后,软骨细胞内自噬标志物Atg5,Atg7和Beclin1蛋白水平表达显着升高,LC3B II/LC3B I比例显着上升。而在处理6,12和24小时的软骨细胞中,软骨细胞内自噬标志物Atg5,Atg7和Beclin1蛋白水平表达明显逐步降低,LC3B II/LC3B I比例逐步下降,处理24小时后基本降至基线水平。而自噬底物P62蛋白水平则随IL-18处理时间的增加而在软骨细胞内逐渐积累。免疫荧光结果显示,浓度为100ng/m L的IL-18处理体外培养大鼠软骨细胞6小时后,LC3B荧光强度显着增加,而24小时后荧光强度又明显降低。结论:大鼠软骨细胞在受到IL-18刺激的初始阶段能引起较强的自噬反应,而随着IL-18作用时间的延长,大鼠软骨细胞内自噬小体形成减少,自噬能力减弱。IL-18的慢性刺激能介导大鼠软骨细胞的自噬不足。第三章IL-18引起软骨细胞自噬不足的具体分子机制研究及其与软骨细胞退变的相关性研究目的:探究IL-18引起大鼠软骨细胞自噬不足的具体分子机制,并探索其与IL-18介导的大鼠软骨细胞退变之间的关系。研究方法:取4周龄SD大鼠关节软骨细胞进行体外分离培养,传代次数控制在4代以内。应用不同浓度的IL-18（0-100ng/m L）处理软骨细胞24小时后,通过Westernblot法检测PI3K-Akt-m TOR通路关键蛋白PI3K,Akt,m TOR的磷酸化程度。此外,我们设计了一系列通路抑制和激活实验,用PI3K激动剂740Y-P,Akt激动剂SC79,m TOR激动剂3BDO和PI3K抑制剂LY294002分别预处理细胞1小时后,再应用浓度为100ng/m L的IL-18处理24小时,通过Western-blot法检测软骨特异性基因Col2,Sox9和Aggrecan在蛋白质水平的表达情况。结果:在体外培养的大鼠软骨细胞中,IL-18能增加PI3K,Akt,m TOR的磷酸化水平,在浓度为10ng/m L和100ng/m L时更为明显。PI3K-Akt-m TOR通路抑制和激活实验结果显示,激活PI3K,Akt和m TOR均可显着降低软骨细胞表型基因Col2,Sox9和Aggrecan在蛋白质水平的表达,而抑制PI3K可显着升高Col2,Sox9和Aggrecan基因在在蛋白质水平的表达。结论:IL-18引起大鼠软骨细胞自噬不足主要是通过PI3K-Akt-m TOR信号通路实现的,且与大鼠软骨细胞退变密切相关。第四章雷帕霉素对IL-18介导的软骨细胞自噬不足和凋亡的作用研究目的:探究常见自噬激动剂雷帕霉素对IL-18介导的大鼠软骨细胞自噬不足和凋亡的影响。研究方法:取4周龄SD大鼠关节软骨细胞进行体外分离培养,传代次数控制在4代以内。取P3代软骨细胞分为4组:正常对照组不做处理,IL-18组应用浓度为100ng/m L的IL-18处理24小时,Rapa组应用浓度为10n M的雷帕霉素处理24小时,IL-18+Rapa组应用浓度为10n M的雷帕霉素预处理1小时后加入浓度为100ng/m L的IL-18共处理24小时。通过Western-blot法检测Atg5,Atg7,Beclin1,LC3B和P62等自噬标志物以及Bcl-2,Bax和Caspase3/9等凋亡相关因子在蛋白质水平的表达情况。取40只6周龄雄性SD大鼠（150-200g）,随机分为4组,每组10只:正常对照组大鼠注射50μL生理盐水,IL-18组大鼠注射等剂量含100ng/m L IL-18的生理盐水,Rapa组大鼠注射等剂量含10n M雷帕霉素的生理盐水,IL-18+Rapa组注射等剂量含100ng/m L IL-18和10n M雷帕霉素的生理盐水。每周注射2次,8周后处死动物,取膝关节标本进行番红-固绿染色及免疫组化检测,观察软骨退变情况以及Atg5和Caspase3的表达。结果:在体外培养的大鼠软骨细胞中,雷帕霉素显着拮抗IL-18诱导24小时后大鼠软骨细胞中Atg7基因在蛋白质水平的表达下调、LC3B II/LC3B I比例的下降以及自噬底物P62的增加,同时雷帕霉素也显着拮抗IL-18诱导24小时后大鼠软骨细胞中Bcl-2基因的表达下调以及Bax和Caspase3/9基因的表达上调。动物体内实验结果显示,IL-18+Rapa组相较于IL-18组,大鼠膝关节退变程度较轻,Atg5表达增加,Caspase3表达减少。结论:雷帕霉素能改善IL-18介导的大鼠软骨细胞自噬不足,并起着抗软骨细胞凋亡和软骨保护作用。
侯雅婷[2]（2020）在《鹿茸多肽对骨关节炎软骨细胞的保护作用》文中指出骨性关节炎（Osteoarthritis,OA）是一种退行性关节疾病,其特征在于关节的慢性疼痛和运动障碍。尽管目前对OA的潜在机制仍知之甚少,但已提出炎症反应和氧化应激在OA的发生和发展中起重要作用。在炎性刺激中,促炎细胞因子白介素-1β（IL-1β）通过刺激促成软骨降解的多种介质在OA的发病过程中发挥关键作用。关节软骨细胞在维持正常组织合成和胞外基质（ECM）的动态平衡中起重要作用。IL-1β可上调软骨细胞中主要蛋白酶（如MMP）的表达诱导软骨降解,造成活性氧（ROS）的产生和炎症介质例如一氧化氮（NO）释放及一氧化氮合酶的表达增加等,也可以通过损伤线粒体DNA、抑制转录等方式促进软骨细胞凋亡。因此,能够针对IL-1β诱导炎症的药物有望成为有效治疗OA的新策略。鹿茸多肽（VAP）是从鹿茸中分离提取的多肽类活性单体,具有重要的研究价值,已有研究表明其在抑制炎症过程中的重要作用。因此,本课题以提取的兔原代软骨细胞为研究对象,旨在探究VAP对IL-1β诱导的软骨细胞的氧化应激、细胞凋亡和炎症反应的作用及其潜在的分子作用机制。实验所用的鹿茸多肽为本实验室前期提取获得的 32 肽,其氨基酸序列为 VLSATDKTNVLAAWGKVGGNAPAFGAEALERM。另外,通过改良的Hulth法构建骨关节炎动物模型,探究特色配方的中药复方鹿茸补肾汤的抗炎作用。研究结果表明,VAP可在一定范围内有效促进软骨细胞增殖的作用。VAP有效抑制IL-1β处理的软骨细胞中ROS产生,表明VAP具有有效的抗氧化活性。VAP减弱IL-1β诱导后细胞中主要炎性介质NO的产生,且与诱导型一氧化氮合酶iNOS的表达有关。VAP还抑制IL-1β引起的软骨细胞凋亡。此外,VAP下调了用IL-1β处理的软骨细胞中基质金属蛋白酶MMP-2、-9和-13的蛋白表达水平,导致其细胞外分泌减少。另外,VAP恢复了 IL-1β诱导的Smad2/3,P-Smad2/3的表达。这些结果表明,VAP可能通过干预TGF-β/Smad信号通路而表现出抗氧化、抗凋亡及抗炎作用。总的来说,VAP是潜在的可用于OA治疗的有效单体。研究发现,兔子骨关节炎模型组及鹿茸补肾汤灌胃治疗组中,正常机体发生了白细胞系统的紊乱现象且鹿茸补肾汤治疗有一定程度纠正紊乱的趋势,因此,鹿茸补肾汤对骨关节炎的影响有待进一步深入,期待为骨关节炎的中药治理提供更多的实验与理论依据。
何宇哲[3]（2020）在《木香烃内酯治疗骨关节炎的作用及其机制的研究》文中指出目的:通过体内和体外实验探究木香烃内酯对于骨关节炎（OA）的作用,以及相关作用机制的研究。方法:本研究使用提取的大鼠膝关节软骨细胞进行培养,利用白细胞介素-1β（IL-1β）刺激软骨细胞建立骨关节炎的细胞模型,利用内侧半月板切除的方式制造了大鼠膝关节炎的动物模型。通过实时聚合酶链式反应（q RT-PCR）检测不同浓度的木香烃内酯对IL-1β诱导下软骨细胞内的COX-2,INOS,MMP-3,MMP-9和MMP-13的m RNA表达变化。通过蛋白印迹（Western Blot）实验评估不同浓度的木香烃内酯对IL-1β诱导下软骨细胞内的COX-2,INOS,IL-6,MMP-3,MMP-9和MMP-13蛋白质水平的影响。通过蛋白印迹（Western Blot）实验和免疫荧光实验探究木香烃内酯对IL-1β激活的NF-κB和Wnt/β-catenin信号通路的影响。体内实验则通过Mankin评分和免疫组织化学法显示了木香内酯处理组和OA组之间的差异。结果:在体外实验中,浓度为0-6μM的木香烃内酯对软骨细胞活力和表型维持没有显着影响,木香烃内酯减少了IL-1β诱导的MMP3,MMP9,MMP13,COX-2,IL-6和INOS表达的上调。木香烃内酯可显着降低IL-1β诱导的大鼠软骨细胞中p65磷酸化和p65入核情况。同时β-catenin的激活也可被木香烃内酯所抑制,从而阻止了其活化形式的β-catenin转移到细胞核中以激活靶基因的表达。在体内实验中,通过免疫组织化学法显示药物处理组相比于OA组其软骨细胞表达的MMP-13和COX-2较低,并且表现出较轻的软骨退变和较低的Mankin评分。结论:在我们的研究中,我们证实了木香烃内酯可以通过wnt/β-catenin和NF-κB信号通路发挥抗炎作用并抑制MMPs表达,从而抑制软骨基质的降解,进而延缓骨关节炎的发生和发展。综上所述,这些结果表明木香烃内酯在OA的治疗中具有潜在的治疗价值。
张琦[4]（2020）在《CTHRC1通过JNK1/2信号通路介导IL-1β诱导的成软骨细胞凋亡》文中研究指明目的本研究一方面从临床收集骨关节炎（OA）患者关节液分析其中CTHRC1和IL-1β的含量,另一方面制备原代大鼠软骨细胞,用IL-1β处理诱发骨关节炎细胞模型,分析CTHRC1在骨关节炎患者软骨细胞凋亡中的分子机制。方法收集安徽医科大学第一附属医院（合肥）2012年6月至2016年4月间行膝关节置换术的OA患者（67.9±7.2岁,男:女,11:39）关节液标本（n=50）。同时采集安徽医科大学第一附属医院30例（62.8±11.2岁,男:女,1:4）无OA或其他关节疾病史的外伤患者关节液标本。采用ELISA试剂盒检测OA和创伤患者关节液中CTHRC1和IL-1β的表达水平。制备原代大鼠膝关节软骨细胞,用IL-1β处理诱发骨关节炎细胞模型,通过Western blot观察CTHRC1和JNK1/2的表达量变化,CCK-8试剂盒分析IL-1β作用后软骨细胞的增殖能力的变化,流式细胞术分析IL-1β作用后软骨细胞的凋亡比例变化,分析CTHRC1、IL-1β和JNK1/2信号通路在骨关节炎中的关系。随后使用表达CTHRC1和CTHRC1-sh RNA的慢病毒感染骨关节炎细胞模型,分析CTHRC1表达水平的变化对骨关节炎中软骨细胞凋亡的影响。结果OA患者关节液中CTHRC1和IL-1β的含量明显高于创伤患者。在OA患者的关节液中,CTHRC1水平比创伤组高,IL-1β水平高于创伤组（P<0.01）。分离获得的原代大鼠软骨细胞形态呈多角形,采用免疫组织化学鉴定显示其中软骨细胞标记物Collagen II和SOX9高表达,确认为软骨细胞。在培养基中加入适量IL-1β,成功建立了骨关节炎细胞模型,Western blot和荧光定量PCR检测显示IL-1β处理后软骨细胞中CTHRC1的表达水平增加,细胞增殖能力下降,且下降程度与IL-1β的含量呈正比。使用携带CTHRC1的慢病毒转染原代大鼠软骨细胞后,荧光定量PCR和Western blot实验的结果显示与对照组相比CTHRC1 mRNA和蛋白的表达水平均显着升高（P<0.01）;Western blot分析显示CTHRC1的过表达能够显着激活JNK1/2通路,JNK1/2的抑制剂SP600125能够抑制这种激活状态。过表达CTHRC1的大鼠软骨细胞中caspase-3的活性均显着上调,凋亡细胞比例也显着升高（P<0.01）,而JNK抑制剂SP600125能够显着降低过表达CTHRC1引起的细胞凋亡比例和caspase-3的活性升高（P<0.01）;此外,Western blot结果提示在大鼠软骨细胞中上调CTHRC1的表达,能够促进MMP-13、Bax、PARP-1和cleaved caspase-3的表达（P<0.01）,但抑制Bcl-2的表达,差异有统计学意义（P<0.01）;JNK抑制剂SP600125处理大鼠软骨细胞后MMP-13、Bax、PARP-1和cleaved caspase-3的表达下降（P<0.01）,Bcl-2的表达增加（P<0.01）。将表达CTHRC1sh RNA的慢病毒感染大鼠成软骨细胞后与未感染组相比CTHRC1的表达水平显着下降,再使用10ng/ml的IL-1β处理6h后p-JNK1/2和JNK1/2的表达水平显着上升（P<0.01）;然而CTHRC1下调后p-JNK1/2和JNK1/2的表达水平显着下降了（P<0.01）;流式细胞分析的结果表明下调CTHRC1凋亡比例显着下降（P<0.01）。通过western blot分析下调CTHRC1以及使用抑制剂SP600125后均能抑制IL-1β引起的软骨细胞凋亡。通过q RT-PCR和western blot分析显示与未转染组相比IL-1β组Bcl-2的表达明显降低（P<0.01）,MMP-13、Bax、PARP-1和cleaved caspase-3的表达显着上升（P<0.01）,但使用慢病毒下调CTHRC1表达或使用JNK抑制剂SP600125处理细胞后Bcl-2的表达显着上升（P<0.01）,MMP-13、Bax、PARP-1和cleaved caspase-3的表达显着下降（P<0.01）。结论本研究的结果显示在IL-1β引起的大鼠骨关节炎细胞模型中抑制CTHRC1的表达能够通过JNK信号通路抑制软骨细胞凋亡;而上调CTHRC1的表达后情况正好相反。这些结果提示CTHRC1通过JNK信号通路参与了软骨细胞凋亡过程,CTHRC1可能作为治疗OA患者软骨再生的新靶点。
朴尚[5]（2020）在《保护素DX在骨关节炎中的治疗作用和机制研究》文中指出目的:骨关节炎是最常见的一种年龄相关的慢性关节疾病。目前的骨关节炎治疗以药物治疗为主,而其目的多局限于缓解症状,最常用的非甾体抗炎药尽管在临床一线取得了良好的临床疗效,但其对心血管和胃肠道的副作用的负面影响不容忽视,新型抗炎药物的研发迫在眉睫。近些年来发现一类名为“特殊促炎症消退介质”的药物在众多疾病模型中起到了强大广泛的抗炎的作用,其中保护素DX是其中的代表成员,在既往研究中体现其抗炎能力。同一家族的其他成员已经证明了在体外对关节炎进展的抑制,所以保护素DX在关节炎模型中的抗炎作用有待于进一步探究。NF-κB作为经典的炎症通路,已被证明是许多抗骨关节药物的治疗作用机制,而AMPK这一广泛存在于组织中的经典蛋白在以往的研究中表现出与保护素DX紧密的联系,AMPK/NF-κB通路是否是保护素DX的治疗机制有待于进一步的探究。以上研究将为新型药物治疗骨关节炎提供理论研究基础。研究方法:第一部分材料选用大鼠原代软骨细胞进行研究,首先进行培养鉴定,再次进行不同浓度不同时间的保护素DX（Protectin DX,PDX）选取最适合的浓度梯度,然后用ELISA、Western bloting和PCR的方法检测炎症相关蛋白的表达和基因转录水平变化情况。第二部分材料选用大鼠原代滑膜成纤维细胞进行研究,首先进行培养鉴定,再次进行不同浓度不同时间的PDX选取最适合的浓度梯度,然后用同第一部分的方法检验炎症相关蛋白和基因转录水平变化情况,然后用Western blot和细胞免疫荧光的方法检测是否在滑膜成纤维细胞中发现其NF-κB p65核转位的情况。第三部分对膝关节腔注射碘乙酸建立大鼠膝关节骨关节炎模型,然后分空白组、OA组、OA+PDX组进行给药、取材,进行组织学、影像学、免疫印迹分析,检测PDX在体内对骨关节炎的治疗作用。第四部分材料选用大鼠原代软骨细胞进行研究,根据第一部分结果选取抗炎作用最大的浓度,用ELISA、Western blot和细胞免疫荧光的方法,在IL-1β基础上施加PDX或NF-κB抑制剂PDTC,探究NF-κB与下游蛋白的联系,然后相同条件下进一步施加PDX和或AMPK抑制剂compound C,探究AMPK激活与NF-κB和下游炎症相关蛋白的联系。结果:第一部分:保护素DX对炎症模型大鼠原代软骨细胞的治疗作用1.在24h和48h分别干预后,PDX在0.5、1、2和4μM浓度下细胞活力与空白组相比无差异,而在8μM浓度下,细胞活力明显降低。所以0.5、1、2和4μM的PDX浓度可以作为后续实验的工作浓度。2.在向软骨细胞施加IL-1β（10ng/ml）后,发现细胞活力明显降低,但在给予递增梯度浓度的PDX后,软骨细胞活性得以改善。3.IL-1β明显刺激大鼠软骨细胞分泌NO,但在此基础上给予递增浓度梯度PDX后NO逐渐降低。4.IL-1β明显刺激大鼠软骨细胞分泌PGE2,但在此基础上给予递增浓度梯度PDX后PGE2逐渐降低。5.在给予除空白组外各组IL-1β（10 ng/ml）的炎性刺激下,对干预组给予递增浓度梯度的PDX（1、2和4μM）,RT-q PCR检测炎症相关基因m RNA水平发现IL-1β明显刺激软骨细胞炎症相关m RNA表达增加,但在此基础上给予递增浓度梯度的PDX后其炎症相关m RNA表达量逐渐降低,有统计学意义。6.在给予除空白组外各组IL-1β（10 ng/ml）的炎性刺激下,对干预组给予递增浓度梯度的PDX（1、2和4μM）,Western blotting检测炎症相关蛋白水平发现IL-1β明显刺激软骨细胞炎症相关蛋白（i NOS、COX-2、MMP3、MMP13、ADAMTS4、COLLAGEN II）表达量增加,但在此基础上给予递增浓度梯度的PDX后其炎症相关蛋白表达量逐渐降低,有统计学意义。第二部分:保护素DX对炎症模型大鼠原代滑膜成纤维细胞的治疗作用1.24h和48h后,PDX在0.25、0.5、1、2μM浓度梯度中细胞活力与空白组相比无差异,而在4μM浓度下,细胞活力明显降低。所以0.5、1和2μM的PDX浓度可以作为后续实验的工作浓度。2.IL-1β刺激大鼠滑膜成纤维细胞分泌NO,此基础上给予递增浓度梯度PDX后NO表达量逐渐降低。3.IL-1β明显刺激大鼠滑膜成纤维细胞分泌PGE2,但在此基础上给予递增浓度梯度的PDX后PGE2表达量逐渐降低。4.RT-qPCR检测mRNA水平发现IL-1β明显使大鼠滑膜成纤维细胞炎症相关mRNA表达增加,但在此基础上给予递增浓度梯度的PDX后其炎症相关m RNA表达量逐渐降低,有统计学意义。5.Western blotting检测炎症的相关蛋白水平发现IL-1β明显刺激大鼠滑膜成纤维细胞炎症相关蛋白（i NOS、COX-2和MMP3、MMP13）表达量增加,但在此基础上给予递增浓度梯度的PDX后其炎症相关蛋白表达量逐渐降低,有统计学意义。6.IL-1β（5 ng/ml）刺激后,滑膜成纤维细胞发生NF-κB核转位,而在PDX刺激下,滑膜成纤维细胞核转位现象被逆转,重新分布在细胞核外,和IL-1β相比有明显区别。第三部分:保护素DX对炎症模型大鼠膝关节的治疗作用1.OA组明显软骨及周围组织被破坏,而给予PDX腹腔注射组明显看到组织条件改善。2.HE和翻红固绿染色、OARSI评分结果表现OA组较相对于空白组关节破坏严重,而PDX的加入明显改善了这种炎症破坏。3.通过用ELISA检测血清和关节腔灌洗液的TNF-α结果显示在血清和关节腔灌洗液中OA组TNF-α的水平最高,在OA+PDX组降低。4.Western blot实验显示在II型胶原在空白组表达最多,OA组明显减少,PDX的加入改善软骨的破坏,MMP13的WB结果也证明了PDX的体内抗炎作用。第四部分:保护素DX治疗炎症模型大鼠原代软骨细胞机制研究1.IL-1β处理后NF-κB p65和IκBα的磷酸化水平明显升高,而且IL-1β导致了IκBα明显降解。然而,PDX可以剂量依赖地抑制IL-1β介导的NF-κB p65和IκBα磷酸化升高。2.细胞中加入NF-κB的选择性抑制剂PDTC,可以部分地抑制IL-1β介导的炎性反应,i NOS,MMP13和NO的指标均在PDX施加后明显降低。3.AMPK的磷酸化水平被IL-1β降低,然后其水平被PDX升高。同时Compound C减轻了PDX导致的AMPK活化程度。在相同条件下,p65的磷酸化水平被IL-1β刺激升高,然后被PDX抑制。在此基础上加入Compound C后NF‐κB p65的活化水平被降低。同样,MMP13这一重要的炎症蛋白的变化同P65一样。4.多数P65在空白组的胞浆中存在,在IL-1β刺激后p65核内移表现出来,而PDX可以阻断这种表现并将p65重新转移到胞浆。进一步在此基础上compound C逆转了前面的核外移现象。结论:1.大鼠原代软骨细胞对浓度为1、2、4μM的PDX没有细胞毒性反应,IL-1β（10ng/ml）对大鼠原代软骨细胞增殖有明显的抑制作用,而PDX可以改善其对软骨细胞活力的抑制。2.在IL-1β诱导炎性反应的情况下,PDX可以改善其引起软骨基质成分的合成分泌以及降解的功能改变。3.在IL-1β诱导炎性反应的情况下,PDX可以改善其引起滑膜成纤维细胞表型的改变,尤其是对软骨基质成分的合成分泌以及降解的炎性介质和机制降解酶的改变。4.PDX可通过抑制滑膜成纤维细胞内NF-κB向核内转位而发挥抗炎作用。5.碘乙酸膝关节腔注射可以引起膝关节炎症改变,而腹腔注射PDX可以减轻其带来的膝关节局部和全身的炎症反应。6.在IL-1β介导炎性反应的情况下,PDX可阻断NF-κB信号通路的活化。7.PDX可通过AMPK/NF-κB信号通路发挥其抗炎作用。
郑明岳[6]（2019）在《WNT信号通路介导电针干预CCI大鼠模型及其与nNOS关系的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:（1）观察电针肾俞穴对坐骨神经痛模型大鼠的疼痛行为学的影响及其对炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-18、p65的表达的影响。（2）观察坐骨神经痛大鼠模型脊髓中WNT信号通路活性的改变;观察坐骨神经痛大鼠中神经元型一氧化氮合酶含量是否有所改变,模型大鼠的坐骨神经痛症状、WNT信号通路的激活是否与脊髓nNOS含量有关;方法:实验1方法:18只健康雄性SD大鼠,随机分成假手术组、模型组、治疗组,每组6只。建立坐骨神经慢性压榨损伤大鼠模型。治疗组于术后第一天开始电针肾俞穴进行治疗。使用Von-Fair对大鼠进行行为学检测,监测三组大鼠术前1天、治疗后第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天、第13天机械缩足痛阈变化,并对检测结果进行统计学分析。于第14天处死取材,Western Blot检测各组大鼠脊髓中p65蛋白含量变化,Elisa检测各组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-18含量变化。实验2方法:30只健康雄性SD大鼠,随机分成假手术组、模型组、治疗组、抑制剂组、抑制剂+针灸组,建立坐骨神经慢性压榨损伤大鼠模型。治疗组、抑制剂组、抑制剂+针灸组于术后第3天起进行电针肾俞穴治疗,共13天。使用Von-Fair对大鼠进行行为学检测,监测三组大鼠在术前1天、治疗第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天、第13天机械缩足痛阈变化,在术后第14天处死取材,Western Blot、PCR检测各组大鼠脊髓中nNOS、β-连环蛋白、cMyc蛋白、m RNA含量变化。结果:（1）模型组较假手术组机械缩足痛阈明显降低（P<0.05）,具有统计学意义,与模型组大鼠相比,治疗组机械缩足痛阈有所升高（P<0.05）,具有统计学意义。模型组大鼠较假手术组大鼠p65、TNF-α、IL-1β、IL-18含量明显升高（P<0.05）,具有统计学意义;经过治疗后,治疗组大鼠脊髓中p65、TNF-α、IL-1β、IL-18含量均有所降低（P<0.05）,具有统计学意义。（2）与假手术组相比,模型组大鼠β-连环蛋白、wnt3a蛋白含量均明显升高（P<0.05）,具有统计学意义,经治疗后,治疗组大鼠脊髓中nNOS蛋白、β-连环蛋白、wnt3a、c-Myc含量均有所下降（P<0.05）,具有统计学意义。抑制剂组大鼠模型中的β-连环蛋白、wnt3a蛋白、m RNA含量均明显降低（P<0.05）,具有统计学意义;与模型组相比,经过治疗后,治疗组、抑制剂组、抑制剂+针灸组大鼠模型中的β-连环蛋白、wnt3a蛋白、m RNA含量均明显降低（P<0.05）,具有统计学意义。结论:（1）电针肾俞穴治疗坐骨神经慢性压榨损伤大鼠模型可提高其机械缩足痛阈值,坐骨神经慢性压榨损伤大鼠模型中p65、TNF-α、IL-1β、IL-18表达增多。（2）β-连环蛋白、wnt3a蛋白明显升高,模型中WNT信号通路被激活。治疗组大鼠经针灸治疗后可降低WNT信号通路相关蛋白的活性。（3）坐骨神经慢性压榨损伤大鼠模型脊髓中nNOS蛋白、m RNA含量明显升高,抑制剂组在降低nNOS含量后,大鼠机械缩足痛阈也明显改善;电针治疗后,nNOS含量明显降低,抑制剂+针灸组大鼠较抑制剂组、治疗组大鼠机械缩足痛阈值改善更明显。（4）经针灸治疗、注射nNOS抑制剂、结合针灸治疗+抑制剂后,WNT信号通路活性明显降低,表明电针治疗可通过降低nNOS的含量下调WNT信号通路活性。
浦承波[7]（2019）在《脱细胞细胞外基质增强软骨细胞抗炎性及其SIRT1介导机制的研究》文中研究表明[目的]自体软骨细胞植入（Autologous chondrocyte implantation,ACI）是一种很有前途的修复软骨缺损的方法。然而,关节炎症环境影响临床最终结局。干细胞诱导的脱细胞胞外基质（Decellularized extracellular matrix,DECM）已被用作间充质干细胞的培养基可改善细胞增殖和特异性的分化。在本研究中,我们使用DECM作为关节软骨细胞的体外增殖体系,并评估了 DECM增殖的软骨细胞对白细胞介素1β（Interleukin-1 β,IL-1β）或肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor α,TNF-α）所诱导的炎症环境的反应情况。[研究方法]使用细胞外基质（DECM）和常规组织聚苯乙烯培养板（tissue culture polystyrene plates,TCPS）培养新西兰大白兔膝关节软骨细胞。CCK-8法测定细胞增殖能力,并拍照。通过在软骨形成培养基中培养DECM和TCPS增殖的软骨细胞制作的高密度细胞团块,测定软骨基质的合成以及相关基因的表达。通过在软骨形成培养基中全程加入IL-1β或TNF-α,培养DECM和TCPS增殖的软骨细胞制作的高密度细胞团块。对比二者在炎症环境中,保护软骨细胞形成特异性软骨基质能力的作用。我们用IL-1β或TNF-α处理软骨细胞团块7天,来评价炎性细胞因子引发的软骨基质降解。最后,通过使用 抑制剂 NAM（Nicotinamide,尼克酰胺）,来体现 SIRT1（Silent information regulator type 1,沉默信息调节因子1）的基因的作用。[结果]与常规组织聚苯乙烯培养基（TCPS）上培养的软骨细胞相比,DECM增殖的细胞增殖率显着增高。软骨细胞在高密度细胞团块中诱导软骨分化,两组的软骨分化潜力可以对比。在低浓度（1ng/mL）的两种炎性细胞因子IL-1β或TNF-α作用21天的情况下,DECM上生长的软骨细胞显示出比TCPS组更高的软骨基质合成水平,然而,高浓度（5ng/mL）的IL-1β则均抑制了两组的分化。我们用IL-1β或TNF-α处理软骨细胞团块7天,发现在DECM上生长软骨细胞中基质降解相关酶的基因表达显着低于在TCPS上培养的软骨细胞的表达情况。我们还发现,在IL-1β或TNF-α存在下,NAM对SIRT1的抑制作用完全抵消了 DECM对软骨细胞的保护作用,从而展示了软骨细胞中SIRT1基因的作用。[结论]综上所述,这项研究表明干细胞诱导的DECM是体外软骨细胞增殖的优良培养基质,因为它提高了软骨细胞对IL-1β或TNF-α所形成的炎症环境的抵抗能力。将干细胞诱导的DECM使用在基于ACI的临床软骨细胞组织工程中具有巨大潜力。
刘茜[8]（2017）在《菊苣酸对神经炎症及认知功能障碍的干预作用及其分子机制研究》文中进行了进一步梳理随着生活水平的不断提高及人口老龄化的加剧,发掘具有脑部营养健康保护功能的食品成分并深入揭示其作用机制已成为食品科学领域内的研究热点。菊苣酸（Chicoric acid,CA）为天然酚酸类化合物,广泛存在于菊苣、生菜等蔬菜和紫锥菊、蒲公英等常见植物中,具有较强的抗氧化、抗HIV病毒和抗肥胖活性,然而关于其对脑部神经系统的保护作用鲜有报道。鉴于此,本论文以菊苣酸为研究对象,分析其代谢情况及抗氧化能力;并从细胞水平和动物水平研究菊苣酸的脑神经保护作用及相关分子机制。本论文主要研究内容与结果如下:（1）为探究CA的代谢情况及其抗氧化活力,采用液相质谱联用法检测CA在大鼠肝微粒体作用下的代谢产物,并且通过检测自由基清除能力、对自由基所诱导的生物大分子损伤的抑制作用及对脂多糖（LPS）诱导的BV2小胶质细胞的影响,比较CA及其代谢产物的生物活性。结果表明,CA在大鼠肝微粒体细胞色素P450酶的作用下,大部分以原型CA存在,少部分会代谢为咖啡酰酒石酸（CFA）和咖啡酸（CTA）。在一定浓度范围之内,CA对自由基的清除能力及蛋白质、脂质、DNA氧化损伤的抑制作用显着强于其代谢产物;另外,CA能够显着抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞内ROS的生成且其抑制作用显着强于其代谢产物。（2）为研究CA对炎症引起的认知功能障碍的影响,以C57BL/6J小鼠为研究对象,通过LPS腹腔注射构建炎症动物模型,探讨饮食补充CA对LPS诱导的系统性炎症小鼠学习记忆障碍的干预作用及其分子机制。动物行为学检测结果显示,饮食摄入CA能够显着降低模型小鼠的逃避潜伏期,增加穿越原平台所在象限的次数,显着改善小鼠的学习与认知能力。CA能够有效改善脑部神经元形态异常、促进神经元细胞增殖并抑制胶质细胞的过度激活,从而抑制炎症相关因子如iNOS、COX-2、IL-6、IL-1β和TNF?的表达。另外,CA处理组小鼠脑部淀粉样前体蛋白（APP）和β-分泌酶（BACE1）的表达显着下降,即CA能够显着抑制A?1-42的合成与积累。同时,CA可显着增加乙酰胆碱转移酶（ChAT）活力,降低乙酰胆碱酯酶（AChE）活力,增加脑部乙酰胆碱（ACh）含量,干预LPS诱导的小鼠脑部胆碱能系统紊乱。研究发现,饮食摄入CA能够显着下调LPS诱导的小鼠脑部ERK、JNK、p38 MAPK和NFκB的磷酸化,促进抗氧化应激损伤主要防御机制Nrf2、Keap-1及其下游II相解毒酶如HO-1、NQO-1和抗氧化酶类如谷胱甘肽过氧化物酶1（GPX-1）、锰超氧化物歧化酶（MnSOD）、过氧化氢酶（CAT）等的表达,从而干预系统性炎症诱导的认知功能障碍及淀粉样蛋白沉积。（3）为研究CA对神经炎症的影响,以BV2小胶质细胞为研究对象,探讨CA对LPS诱导的胶质细胞炎症反应的干预作用。结果表明,CA能够显着抑制LPS诱导的细胞活力的降低、形态学改变及炎症相关因子如iNOS、COX-2、IL-1β和TNF-?等的表达。另外,CA可显着缓解细胞线粒体膜电势及线粒体呼吸链复合物I、IV蛋白表达的降低,升高细胞内ATP及第二信使cAMP、Ca2+水平,改善线粒体功能。同时,分子模拟结果显示CA和Keap-1之间通过6个氢键和2个π-π键相互连接,进而促进了Nrf2核位移及下游HO-1、NQO-1的表达,上调CAT、SOD的活力,升高GSH水平,显着抑制细胞内ROS生成,维持细胞内氧化还原平衡。此外,CA能够显着抑制LPS诱导的小胶质细胞MAPKs及AKT的磷酸化,抑制NFκB核位移。采用ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）处理细胞,结果表明,CA通过抑制上游信号分子ROS的生成,进而抑制MAPKs、PI3K/AKT磷酸化及核转录因子NFκB核位移,从而干预了LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应。（4）为研究CA对炎症引起的神经元细胞损伤的影响,采用BV2小胶质条件培养基与SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞共培养体系,探讨CA对炎症介导的SH-SY5Y神经细胞凋亡的干预作用及相关分子机制。结果显示,CA能够显着改善小胶质细胞条件培养基介导的SH-SY5Y细胞活力及形态改变。进一步研究表明,CA能够显着降低Bax/Bcl-2比值,抑制细胞色素c释放、caspase-3激活和PARP片段化,显着抑制炎症诱导的细胞凋亡。另外,CA能够显着上调自噬泡延伸相关基因Atg5和Atg12的mRNA水平,从而促进细胞自噬泡的形成及自噬标志蛋白Beclin-1、LC3 II的表达。进一步探讨其神经保护作用机制,结果表明CA可显着抑制线粒体膜电势的降低,促进线粒体呼吸链复合物I和IV的表达,降低ROS水平,改善线粒体功能并调节氧化还原平衡相关信号通路如MAPKs及PI3K/AKT的活化状态。同时,CA预孵后的条件培养基可显着促进PGC1-α、SIRT1的表达及AMPK的磷酸化,促进线粒体的生物发生。加入CA、NO清除剂、IL-1受体拮抗剂和TNF-α,结果显示,CA对SH-SY5Y神经细胞的保护作用一方面来源于其直接作用,另一方面依赖于其对于小胶质细胞炎症因子释放的抑制作用。综上所述,菊苣酸能够通过改善细胞线粒体功能,调节氧化应激状态,从而抑制神经炎症及其相关的认知功能障碍,为天然功能性食物组分的神经营养干预研究奠定理论基础,同时为菊苣酸作为主要功能成分的保健食品开发提供新思路。
金英利[9]（2014）在《针刀对KOA兔韧带力学改变及韧带胶原相关因子基因蛋白表达的影响研究》文中指出膝关节骨性关节炎（knee osteoarthritis, KOA）,随着年龄增长,膝骨关节炎的发病率逐渐增高。临床表现为缓慢发展的关节疼痛、压痛、僵硬、关节肿胀、活动受限和关节畸形等。临床应用针刀治疗膝骨关节炎有较好的疗效,但对力学方面的其作用机理尚无深入研究。本研究是依托中国自然科学基金“针刀干预对膝骨关节炎韧带力学改变及软骨细胞力学信号转导的影响”的部分内容。本实验从周围软组织的角度进行相应的基础研究,以明确针刀治疗对膝骨关节炎兔韧带组织的力学特性及韧带胶原相关因子基因和蛋白表达等的调整作用,将为临床治疗膝骨关节炎提供新的思路和方法。研究目的通过针刀“调筋治骨法”治疗膝骨关节炎,观察针刀治疗对膝骨关节炎兔模型韧带力学改变和韧带胶原相关因子基因蛋白表达等的影响,验证针刀治疗膝骨关节炎是通过松解局部韧带等软组织的粘连,调整韧带的力学平衡,调控韧带转化生长因子-β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶-13基因和蛋白表达,恢复韧带结构和功能,有利于膝关节的稳定性,减少软骨不良刺激,阻抑软骨基质的退变,恢复膝关节力学平衡这一假说,揭示中医基础理论中关于经筋“束骨利关节”的科学内涵,为针刀的基础研究开创新的篇章。研究方法将6月龄健康清洁级新西兰兔50只（雌雄各半）随机分为空白组、模型组、针刀组和电针组,应用左后肢伸直位固定制动法制作膝骨关节炎兔模型。针刀组和电针组于造模结束1周后分别进行治疗干预。治疗前后观察各组兔的行为学、影像学表现；光镜和电镜观察各组兔软骨和韧带组织的病理表现；对外侧副韧带进行应力松弛、蠕变、拉伸等力学检测；Real-time PCR法和Western blot法检测转化生长因子-81、工型胶原、基质金属蛋白酶-13及基质金属蛋白酶抑制剂-1基因和蛋白表达水平。分别对以上指标进行比较分析,观察针刀对膝骨关节炎兔的调节作用。研究结果1行为学结果：治疗前,模型组、针刀组和电针组Lequesne MG评分无统计学意义（p>0.05）,治疗后,三组都有不同程度变化,其中针刀组治疗前后计分差值最为明显（p<0.01）,针刀治疗可以改善膝骨关节炎兔关节疼痛、活动度、肿胀和步态等行为学指标。2影像学结果：治疗前,模型组、针刀组和电针组正侧位X片显示膝骨关节炎兔膝关节内外侧间隙变窄、关节表面变形、关节面凹凸不平,胫骨平台骨质增生,软骨下骨密度不均,治疗后,针刀组和电针组有不同程度改善,兔膝关节间隙稍增宽,骨质增生有所减轻。3局部组织形态学结果：观察光镜和电镜显示,造模后,局部组织炎症反应明显,治疗后,针刀组和电针组都有不同程度变化,但针刀组较电针组明显改善。针刀治疗可减轻膝骨关节炎兔局部组织的炎症反应,减少细胞异常增生,减少胶原纤维异常变化,减少基质退变,促进组织修复。针刀治疗对软骨和韧带组织有调节作用。4生物力学结果：造模后,模型组外侧副韧带的应力松弛、蠕变和拉伸等力学特性较空白组出现了显着的差异。治疗后,针刀组和电针组有不同程度变化,两组均可以改善力学特性,针刀对松弛率产生了良好的影响,较电针组明显改善,接近于空白组的水平。5Real-time PCR法和Western blot法检测结果：造模后,膝骨关节炎兔外侧副韧带中转化生长因子-β1、Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶抑制剂-1基因和蛋白表达水平降低,基质金属蛋白酶-13表达水平上升,较空白组均有统计差异。治疗后,针刀组和电针组均有调节作用,可以转化生长因子-β1、Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶抑制剂-1基因和蛋白表达水平上调,基质金属蛋白酶-13表达水平下调。提示针刀或电针治疗对韧带中转化生长因子-β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶-13和基质金属蛋白酶抑制剂-1基因和蛋白表达发挥了良好调节作用,但针刀的调节作用优于电针。研究结论1针刀治疗可以改善膝骨关节炎兔局部组织的炎症反应,减少基质退变,促进组织修复。针刀干预对软骨和韧带组织有良好修复作用。2针刀治疗有效地调整关节韧带的生物力学特性,恢复韧带受力,调节韧带功能,恢复膝关节力学平衡。3针刀治疗有效地调节韧带基质,恢复韧带的结构和功能,抑制膝骨关节炎病理进程。4针刀治疗对膝关节力学调整作用,可能是治疗膝骨关节炎的重要机制之一。
陈江[10]（2011）在《静水压下芹菜素对人椎间盘髓核细胞凋亡及基质代谢的影响》文中进行了进一步梳理研究背景由于腰椎间盘退变导致的腰椎间盘突出、腰椎管狭窄等疾病是骨科门诊的常见病。随着我国老龄化社会的到来,腰椎退行性疾患对人民健康已构成威胁并严重影响患者的生活质量。随着机械化及电脑办公的普及,以坐姿进行工作的人越来越多,由此导致的腰椎间盘突出症患者呈上升趋势,且发病趋于年轻化,因此腰椎间盘退行性病变已成为当今研究的热点问题。椎间盘退变已成为困扰骨科医生的问题之一,椎间盘一旦退变难以逆转。目前的治疗方法有保守治疗和手术治疗,手术在一定程度上缓解了临床症状,但仍未阻断椎间盘的退变进程。而且脊柱内固定手术会导致脊柱生物力学结构的改变,加速邻近节段椎间盘的退变,同时给患者在心理上和经济上带来严重的负担。因此,如何阻止或延缓腰椎间盘退变成为研究的焦点。研究目的探讨人髓核细胞在体外构建的静水压环境下,芹菜素（Apigenin, API）对其功能状态、凋亡率及基质金属蛋白酶MMP-3及其抑制因子TIMP-1的影响。研究芹菜素作为一种中药类一氧化氮合酶（NOS）抑制剂在延缓腰椎间盘退变方面的可能性并揭示其部分作用机理,为中医药防治椎间盘退行性疾病寻求新的思路。研究方法1.选择由美国ScienCell Research Laboratories提供的人椎间盘髓核细胞Human Nucleus Pulposus Cells （HNPC）进行实验室培养扩增、传代,并对各代次（P1-P7）髓核细胞进行形态学观察,生长增殖活性检测以及主要细胞外基质表达（蛋白多糖、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原）进行分析,选择合适代次的髓核细胞进行药物及静水压干预研究。2.研究芹菜素对体外单层培养的人髓核细胞NO产生量的影响及药物的剂量依赖性,使用经典一氧化氮供体药物（Sodium Nitroprusside,Dihydrate, SNAP）及一氧化氮合酶抑制剂（NG-Monomethyl-L-arginine, Monoacetate Salt, L-NMMA）与芹菜素进行对照分析研究,探讨芹菜素作为一种类一氧化氮合酶（NOS）抑制剂的可行性。3.对原英国牛津大学生理学研究所和日本宇宙开发医学研究中心共同研制的静水压装置进行合理改进,构建一种加压方便,操作安全的体外单层细胞静水压加载系统。分析不同静水压环境下髓核细胞在形态、存活率以及功能状态等方面的差异,论证该细胞静水压加载系统的可行性,确定下一步实验所采用的静水压力值及加载时间。4.使用已构建的单层细胞静水压加载系统及具有NOS抑制作用药物芹菜素对人髓核细胞进行综合干预。观察不同静水压环境下芹菜素对人髓核细胞的影响,对髓核细胞凋亡率、MMP-3及TIMP-1产生量以及Ⅱ型胶原表达情况进行检测,对实验结果进行统计学处理,分析芹菜素在不同静水压环境下对髓核细胞凋亡率、MMP-3与TIMP.1的平衡表达及细胞外基质的影响。探讨中药芹菜素用于延缓腰椎间盘退变的可行性并揭示部分作用机理。研究结果1.人正常椎间盘髓核细胞可以在体外单层培养条件下获得良好的生长状态。前4代细胞形态良好,增殖能力强,并且表型表达稳定,属于正常状态的人髓核细胞。随着传代次数的增多会出现“去分化”现象：传5代时不仅蛋白多糖和Ⅱ型胶原表达减少,同时细胞增殖能力降低,而且出现Ⅰ型胶原的表达,说明细胞出现老化现象,不宜作为椎间盘髓核细胞研究的对象。2.芹菜素和L-NMMA在抑制髓核细胞NO产生方面具有类似的作用,当芹菜素浓度为12.5μmol/L时能明显降低髓核细胞NO产生量,L-NMMA药物浓度为200μmol/L时也能明显降低髓核细胞NO产生量,两者在抑制作用方面没有明显差异,但芹菜素药用浓度明显低于L-NMMA。SNAP药物浓度在500μmol/L时能明显增加髓核细胞NO产生量。3.构建的细胞静水压加载系统能提供较宽范围的应力水平,符合多种实验研究的需要,且具有良好的生物相容性。单层培养的髓核细胞在0.3Mpa静水压下,持续受压120min时,髓核细胞的形态较好,存活率相对较高,蛋白多糖等胞外基质表达旺盛,而在3Mpa静水压下持续受压120min时,髓核细胞的存活率下降,胞外基质表达明显较少,处于功能抑制状态。4.芹菜素作为一种NOS抑制剂能够对髓核细胞的功能状态、凋亡率以及基质金属蛋白酶的代谢产生影响,而且这种影响在不同的静水压环境下有所不同：在0.3Mpa静水压下,芹菜素通过调节基质金属蛋白酶MMP-3与TIMP-1之间的平衡能减少髓核细胞外基质PG及Ⅱ型胶原的分解,改善由于高浓度NO引起的髓核细胞功能抑制状态；而在3Mpa静水压下,芹菜素在降低髓核细胞的凋亡率,减少胞外基质的过度分解方面有一定作用。结论芹菜素是一种安全有效的中药类NOS合酶抑制剂,能够减少髓核细胞的NO产生量。芹菜素通过调节基质金属蛋白酶MMP-3与TIMP-1之间的平衡减少髓核细胞外基质PG及Ⅱ型胶原的分解,改善由于NO刺激引起的髓核细胞功能抑制状态,并能降低高静水压下髓核细胞的凋亡率,从而对椎间盘髓核细胞及胞外基质起到一定的保护作用。
二、一氧化氮合酶抑制剂对炎性刺激下软骨细胞增殖和基质代谢的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、一氧化氮合酶抑制剂对炎性刺激下软骨细胞增殖和基质代谢的影响（论文提纲范文）
（1）白细胞介素18介导的软骨细胞自噬调控在骨关节炎中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 1.绪论 |
| 1.1 骨性关节炎概况 |
| 1.2 白细胞介素18在OA发生中的作用 |
| 1.3 PI3K-Akt-mTOR信号通路在OA进展中的重要作用 |
| 2.第一章 IL-18对软骨细胞凋亡的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3.第二章 IL-18对软骨细胞自噬的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4.第三章 IL-18引起软骨细胞自噬不足的具体分子机制研究及其与软骨细胞退变的相关性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 5.第四章 雷帕霉素对IL-18介导的软骨细胞自噬不足和凋亡的作用研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 炎性衰老在骨性关节炎中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
（2）鹿茸多肽对骨关节炎软骨细胞的保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 骨关节炎 |
| 1.2 OA生物学标志 |
| 1.2.1 IL |
| 1.2.2 ROS |
| 1.2.3 NO |
| 1.2.4 MMPS |
| 1.2.5 软骨细胞凋亡 |
| 1.3 鹿茸 |
| 1.3.1 鹿茸多肽 |
| 1.3.2 鹿茸多肽与OA |
| 1.3.3 鹿茸补肾汤 |
| 1.4 骨关节炎相关信号通路 |
| 1.4.1 Notch信号通路与OA |
| 1.4.2 MAPKs信号通路与OA |
| 1.4.3 Wnt信号通路与OA |
| 1.4.4 NF-κB信号通路与OA |
| 1.4.5 TGF-β信号通路与OA |
| 1.5 本研究的内容及意义 |
| 2 软骨细胞培养及鹿茸多肽活性验证 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 溶液配置 |
| 2.2.2 软骨细胞分离 |
| 2.2.3 软骨细胞培养 |
| 2.2.4 细胞计数 |
| 2.2.5 软骨细胞鉴定 |
| 2.2.6 药物MTT实验 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 原代软骨细胞的分离与培养 |
| 2.3.2 软骨细胞表型鉴定 |
| 2.3.3 鹿茸多肽对软骨细胞毒性作用 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 VAP对IL-1β诱导的软骨细胞的作用效果 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 溶液配置 |
| 3.2.2 活性氧检测实验 |
| 3.2.3 一氧化氮检测实验 |
| 3.2.4 蛋白免疫印迹分析 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR(RT-qPCR) |
| 3.2.6 统计学处理 |
| 3.3 结果及讨论 |
| 3.3.1 VAP对IL-1β诱导的软骨细胞的活性影响 |
| 3.3.2 VAP抑制IL-1β诱导的软骨细胞中ROS的产生 |
| 3.3.3 VAP抑制IL-1β诱导的软骨细胞基质金属蛋白酶表达水平 |
| 3.3.4 VAP减少IL-1β诱导的NO的产生 |
| 3.3.5 VAP抑制IL-1β诱导的软骨细胞iNOS的表达 |
| 3.3.6 VAP调节IL-1β诱导的凋亡相关蛋白的表达 |
| 3.3.7 VAP调节IL-1β诱导的TGF-β/Smad信号通路 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 鹿茸补肾汤对兔骨关节炎模型的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 溶液配制 |
| 4.2.2 动物分组及处理 |
| 4.2.3 血常规检测 |
| 4.2.4 统计学处理 |
| 4.3 结果及讨论 |
| 4.3.1 鹿茸补肾汤对骨关节炎新西兰大耳白兔体重影响 |
| 4.3.2 20项血液参数测定结果 |
| 4.3.3 白细胞系统测定结果 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（3）木香烃内酯治疗骨关节炎的作用及其机制的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 不同浓度的木香烃内酯对软骨细胞活性的影响 |
| 2.4 番红O染色 |
| 2.5 软骨细胞处理 |
| 2.6 荧光定量PCR分析(RT-qPCR) |
| 2.7 蛋白质印迹实验(western-blot实验) |
| 2.8 免疫荧光染色 |
| 2.9 动物实验 |
| 2.10 组织学评价 |
| 2.11 免疫组织化学染色 |
| 2.12 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 木香烃内酯对软骨细胞活力和表型维持的影响 |
| 3.2 木香烃内酯对软骨细胞目的基因表达及其蛋白水平的影响 |
| 3.3 木香烃内酯对IL-1β诱导的软骨细胞NF-κB信号通路激活的影响 |
| 3.4 木香烃内酯对IL-1β诱导的软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路激活的影响 |
| 3.5 木香烃内酯对骨关节炎模型大鼠软骨的保护作用 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 活性氧在骨关节炎中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（4）CTHRC1通过JNK1/2信号通路介导IL-1β诱导的成软骨细胞凋亡（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 CTHRC1在胶原表达及转化生长因子β信号转导中的作用 |
| 参考文献 |
（5）保护素DX在骨关节炎中的治疗作用和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 保护素DX对炎症模型大鼠原代软骨细胞的治疗作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验耗材 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.1.5 主要试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠原代软骨细胞的提取、培养和鉴定 |
| 2.2.2 细胞免疫染色 |
| 2.2.3 CCK8细胞活力测定 |
| 2.2.4 Western-Blot方法检测细胞MMP3、MMP13、ADAMTS4、COL2、COX-2、i NOS和β-Actin等蛋白的表达 |
| 2.2.5 RT-q PCR方法检测细胞内MMP3、MMP13、ADAMTS4、COL2、等基因的mRNA水平 |
| 2.2.6 总一氧化氮试剂盒测定NO |
| 2.2.7 ELISA试剂盒测定PGE |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠原代软骨细胞照相与鉴定 |
| 3.2 不同浓度PDX对于大鼠原代软骨细胞细胞毒性测定 |
| 3.3 CCK8 检测PDX对 IL-1β抑制软骨细胞增殖情况下的保护作用 |
| 3.4 总一氧化氮试剂盒检测PDX对 IL-1β诱导下大鼠原代软骨细胞NO的表达水平 |
| 3.5 .ELISA试剂盒检测PDX对 IL-1β诱导下大鼠原代软骨细胞PGE2 的表达水平 |
| 3.6 RT-q PCR检测PDX对 IL-1β诱导下大鼠原代软骨细胞炎症相关基因转录水平 |
| 3.7 Western blot检测PDX对 IL-1β诱导下大鼠原代软骨细胞炎症相关蛋白的表达水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 保护素DX对炎症模型大鼠原代滑膜成纤维细胞的治疗作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 动物饲养 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要耗材 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.1.5 试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠原代滑膜成纤维细胞的提取、培养和鉴定 |
| 2.2.2 免疫荧光 vimentin 检测鉴定大鼠成纤维滑膜细胞 |
| 2.2.3 CCK8细胞活力测定 |
| 2.2.4 Western-Blot方法检测细胞MMP3、MMP13、COX-2、i NOS和 β-Actin等蛋白的表达 |
| 2.2.5 RT-q PCR方法检测细胞等基因的MMP3、MMP13 m RNA水平 |
| 2.2.6 总一氧化氮试剂盒测定NO |
| 2.2.7 ELISA试剂盒测定PGE |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠原代滑膜成纤维细胞照相与鉴定 |
| 3.2 不同浓度PDX对于大鼠原代滑膜成纤维细胞细胞细胞活力测定 |
| 3.3 总一氧化氮试剂盒检测PDX对 IL-1β诱导下大鼠原代细胞滑膜NO表达水平 |
| 3.4 ELISA试剂盒检测PDX对 IL-1β诱导下大鼠原代滑膜成纤维细胞PGE2 的表达水平 |
| 3.5 RT-q PCR检测PDX对 IL-1β诱导下大鼠原代滑膜成纤维细胞炎症相关基因转录水平 |
| 3.6 Western blot检测PDX对 IL-1β诱导下大鼠原代滑膜成纤维细胞炎症相关蛋白的表达水平 |
| 3.7 Western blot检测PDX对 IL-1β诱导下大鼠原代滑膜成纤维细胞NF-κB通路相关蛋白水平变化并免疫荧光检测NF-κB核转位现象 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 保护素DX对炎症模型大鼠膝关节的治疗作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要耗材 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.1.5 试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 SD大鼠膝关节骨性关节炎模型的构建 |
| 2.2.2 膝关节X-ray拍摄分析评分 |
| 2.2.3 脱钙脱水、石蜡包埋、切片 |
| 2.2.4 大体和组织学观察评价骨关节炎 |
| 2.2.5 Western-Blot 方法检测软骨 COL2 和 MMP13 蛋白的表达 |
| 2.2.6 ELISA 试剂盒测定 TNF-α |
| 2.2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 膝关节的影像学和大体外观评价 |
| 3.2 膝关节的组织学评价 |
| 3.3 血清和关节腔灌洗液的ELISA检测 |
| 3.4 Ⅱ型胶原和MMP13在关节软骨中的变化 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四部分 保护素DX对炎症模型大鼠原代软骨细胞治疗作用的机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验耗材 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 Western-Blot方法检测细胞MMP13、i NOS、P-P65、P-65、P-IκB、IκB、P-AMPK、AMPK和 β-Actin等蛋白的表达 |
| 2.2.2 细胞免疫荧光测定NF-κBP65核转移 |
| 2.2.3 总一氧化氮试剂盒测定NO |
| 2.2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠原代滑膜细胞在IL-1β刺激下NF-κB通路相关蛋白的表达变化 |
| 3.2 Western-Blot检测NF-κB的抑制剂PDTC对下游炎症蛋白的表达变化 |
| 3.3 Western-Blot检测AMPK的选择性抑制剂Compound C对下游NF-κB和炎症蛋白的表达变化 |
| 3.4 Westernblot检测PDX对 IL-1β诱导下大鼠原代软骨细胞NF-κB通路相关蛋白水平变化并免疫荧光检测NF-κB核转位现象 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本论文创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）WNT信号通路介导电针干预CCI大鼠模型及其与nNOS关系的机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩写词索引 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 电针肾俞穴对CCI大鼠模型行为学效应观察及相关炎症因子的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 仪器与设备 |
| 1.3 主要试剂与材料 |
| 1.4 动物模型制备 |
| 1.5 分组与治疗 |
| 2.取材 |
| 3.机械缩足痛阈值测定 |
| 4.Western Blot实验步骤 |
| 4.1 总蛋白的提取 |
| 4.2 蛋白浓度的测定 |
| 4.3 蛋白变性 |
| 4.4 SDS-PAGE胶的制备 |
| 4.5 电泳分离 |
| 4.6 电转移 |
| 4.7 封闭 |
| 4.8 一抗 |
| 4.9 显色曝光 |
| 5.ELISA酶联免疫双抗体夹心法 |
| 5.1 试剂盒组成 |
| 5.2 试剂的准备 |
| 5.3 手工洗板 |
| 5.4 操作步骤 |
| 5.5 结果判断 |
| 6.统计方法 |
| 7.结果 |
| 7.1 机械痛阈在各组大鼠中的差异 |
| 7.2 Western blot各组大鼠脊髓中p65 的表达 |
| 7.3 ELISA结果 |
| 8.分析与讨论 |
| 8.1 坐骨神经痛动物模型的选择 |
| 8.2 对于本实验的动物行为学结果分析 |
| 8.3 炎症因子、p65与坐骨神经痛的关系 |
| 8.4 实验结果分析 |
| 第二部分 电针CCI大鼠模型脊髓WNT信号通路的影响及其与nNOS的关系 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 仪器与设备 |
| 1.3 主要试剂与材料 |
| 1.4 动物模型制备 |
| 1.5 分组与治疗 |
| 2.取材 |
| 3.机械缩足痛阈的测定 |
| 4.Wstern blot实验步骤 |
| 5.实时荧光定量PCR |
| 5.1 引物序列 |
| 5.2 实验步骤 |
| 6.统计学分析 |
| 7.结果 |
| 7.1 机械痛阈在各组大鼠中的差异 |
| 7.2 Western blot各组大鼠脊髓中nNOS的表达水平 |
| 7.3 各组脊髓中nNOS m RNA的表达 |
| 7.4 Western blot各组大鼠脊髓中β-连环蛋白、Wnt3a的表达水平 |
| 7.5 各组大鼠脊髓中β-连环蛋白、wnt3am RNA的表达 |
| 8.分析和讨论 |
| 8.1 WNT信号通路与坐骨神经痛 |
| 8.2 wnt信号通路与炎症因子的关系 |
| 8.3 一氧化氮及一氧化氮合酶与坐骨神经痛的关系 |
| 8.4 神经元型一氧化氮合酶 |
| 8.5 nNOS与 WNT信号通路的关系 |
| 8.6 神经元型一氧化氮合酶与坐骨神经痛的关系 |
| 8.7 西医对坐骨神经痛的认识 |
| 8.8 中医对坐骨神经痛的认识 |
| 8.9 电针治疗坐骨神经痛的实验分析 |
| 创新点 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 神经元型一氧化合酶(nNOS)与神经系统疾病的关系 |
| 参考文献 |
| 在校期间已发表及录用论文 |
| 在校期间参加学术会议及参与编写着作 |
（7）脱细胞细胞外基质增强软骨细胞抗炎性及其SIRT1介导机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 1.1 骨性关节炎 |
| 1.2 自体软骨细胞植入 |
| 1.3 骨性关节炎中的炎性细胞因子 |
| 1.4 干细胞来源的脱细胞细胞外基质 |
| 1.5 SIRT1在骨性关节炎中的作用 |
| 材料与方法 |
| 2.1 材料和仪器 |
| 2.2 兔关节软骨细胞和滑膜来源的间充质干细胞的分离 |
| 2.3 干细胞来源的脱细胞细胞外基质的制备方法 |
| 2.4 软骨细胞在脱细胞细胞外基质中的培养 |
| 2.5 细胞增殖分析方法 |
| 2.6 体外诱导软骨细胞的分化方法 |
| 2.7 炎性细胞因子和SIRT1抑制剂的处理方法 |
| 2.8 组织学和免疫组织化学 |
| 2.9 逆转录-定量聚合酶链反应 |
| 2.10 蛋白质免疫印迹实验 |
| 2.11 统计学分析 |
| 结果 |
| 3.1 评估DECM对软骨细胞增殖的影响 |
| 3.2 评估DECM对软骨细胞分化潜能的影响 |
| 3.3 炎症环境下,DECM对软骨细胞的基质合成功能的影响 |
| 3.4 炎症环境下,DECM对软骨细胞基质降解的影响 |
| 3.5 SIRT1介导的信号通路在软骨细胞分化中的作用 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词对照表 |
| 致谢 |
（8）菊苣酸对神经炎症及认知功能障碍的干预作用及其分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 菊苣酸研究进展 |
| 1.1.1 菊苣酸的分布 |
| 1.1.2 菊苣酸的结构和性质 |
| 1.1.3 菊苣酸的功能活性 |
| 1.2 神经炎症研究进展 |
| 1.2.1 小胶质细胞与神经炎症 |
| 1.2.2 炎性介质的释放及作用 |
| 1.2.3 神经炎症机制研究 |
| 1.2.4 神经炎症与阿尔兹海默病 |
| 1.2.5 天然功能成分神经保护活性研究 |
| 1.3 研究意义与内容 |
| 1.3.1 研究意义 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.3.3 技术路线 |
| 第二章 菊苣酸肝微粒代谢及其代谢产物生物活性比较 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 技术路线图 |
| 2.3 材料与方法 |
| 2.3.1 细胞株 |
| 2.3.2 材料与试剂 |
| 2.3.3 仪器与设备 |
| 2.3.4 试验方法 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 菊苣酸大鼠肝微粒体的代谢动力学特征 |
| 2.4.2 HPLC-MS/MS法鉴定菊苣酸肝微粒体代谢产物 |
| 2.4.3 菊苣酸及其代谢物清除自由基能力比较 |
| 2.4.4 菊苣酸及其代谢物对蛋白氧化损伤的抑制作用 |
| 2.4.5 菊苣酸及其代谢物对脂质氧化损伤的抑制作用 |
| 2.4.6 菊苣酸及其代谢物对DNA氧化损伤的抑制作用 |
| 2.4.7 菊苣酸及其代谢物对LPS诱导BV2小胶质细胞的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 菊苣酸对LPS诱导的炎症模型小鼠学习记忆障碍的干预作用及分子机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 技术路线图 |
| 3.3 材料与方法 |
| 3.3.1 实验动物 |
| 3.3.2 材料与试剂 |
| 3.3.3 仪器与设备 |
| 3.3.4 试验方法 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 菊苣酸对LPS诱导的小鼠体重及组织重量的影响 |
| 3.4.2 菊苣酸对LPS诱导的小鼠学习记忆障碍的干预作用 |
| 3.4.3 菊苣酸对LPS诱导的小鼠脑部淀粉样蛋白合成和积累的干预作用 |
| 3.4.4 菊苣酸对LPS诱导的小鼠脑部神经元损伤和神经营养因子表达的影响.. |
| 3.4.5 菊苣酸对LPS诱导的小鼠脑部胶质细胞过度激活的干预作用 |
| 3.4.6 菊苣酸对LPS诱导的小鼠脑部炎症反应的干预作用 |
| 3.4.7 菊苣酸通过调节氧化应激状态干预LPS诱导的小鼠学习记忆障碍 |
| 3.4.8 MAPKs、NFκB信号通路介导菊苣酸对LPS诱导的小鼠学习记忆障碍的干预作用 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 菊苣酸对LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的干预作用及分子机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 技术路线图 |
| 4.3 材料与方法 |
| 4.3.1 细胞株 |
| 4.3.2 材料与试剂 |
| 4.3.3 仪器与设备 |
| 4.3.4 试验方法 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 菊苣酸对LPS诱导BV2小胶质细胞活力及形态的影响 |
| 4.4.2 菊苣酸对LPS诱导BV2小胶质细胞炎症反应的干预作用 |
| 4.4.3 菊苣酸对LPS诱导BV2小胶质细胞线粒体功能的影响 |
| 4.4.4 菊苣酸对LPS诱导BV2小胶质细胞氧化还原状态的影响 |
| 4.4.5 Keap-1/Nrf2 信号通路介导菊苣酸对神经炎症的干预作用 |
| 4.4.6 PI3K/AKT信号通路介导菊苣酸对神经炎症的干预作用 |
| 4.4.7 MAPKs信号通路介导菊苣酸对神经炎症的干预作用 |
| 4.4.8 NFκB信号通路介导菊苣酸对神经炎症的干预作用 |
| 4.4.9 MAPKs、PI3K/AKT和 NFκB信号通路的交互作用 |
| 4.4.10 NAC对菊苣酸干预LPS诱导BV2 小胶质细胞炎症反应的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 菊苣酸对炎症介导的SH-SY5Y神经细胞凋亡的干预作用及分子机制研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 技术路线图 |
| 5.3 材料与方法 |
| 5.3.1 细胞株 |
| 5.3.2 材料与试剂 |
| 5.3.3 仪器与设备 |
| 5.3.4 试验方法 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 菊苣酸对条件培养基介导的SH-SY5Y神经细胞活力及形态的影响 |
| 5.4.2 菊苣酸对条件培养基介导的SH-SY5Y神经细胞凋亡的干预作用 |
| 5.4.3 菊苣酸对条件培养基介导的SH-SY5Y神经细胞自噬的干预作用 |
| 5.4.4 菊苣酸对条件培养基介导的SH-SY5Y神经细胞线粒体功能障碍及能量代谢相关蛋白表达的影响 |
| 5.4.5 PI3K/AKT、MAPKs信号通路介导菊苣酸对条件培养基诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡的干预作用 |
| 5.4.6 菊苣酸干预条件培养基诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡的机制研究 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第六章 结论、创新点与展望 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 主要创新点 |
| 6.3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）针刀对KOA兔韧带力学改变及韧带胶原相关因子基因蛋白表达的影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 膝关节生物力学的研究现状 |
| 1 膝关节韧带生物力学的研究现状 |
| 2 膝关节骨与软骨的生物力学的研究现状 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 膝骨关节炎与生物因子相关性研究现状 |
| 1 细胞因子与膝骨关节炎 |
| 2 基质金属蛋白酶与膝骨关节炎 |
| 3 胶原与膝骨关节炎 |
| 4 生物因子之间相互作用 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 综述三 针刀治疗膝骨关节炎的研究现状 |
| 1 针刀治疗膝骨关节炎的实验研究 |
| 2 针刀治疗膝骨关节炎的临床研究 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 针刀对膝骨关节炎兔的局部形态学的影响研究 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验动物造模 |
| 2.3 干预措施 |
| 2.4 取材及指标观察 |
| 2.5 数据处理及统计处理 |
| 实验结果 |
| 1 一般情况观察 |
| 2 兔膝关节行为学观察 |
| 3 兔膝关节影像学X线正位片观察 |
| 4 兔膝关节大体观察 |
| 5 兔膝关节韧带和软骨组织光镜观察 |
| 6 兔膝关节软骨组织扫描电镜观察 |
| 讨论 |
| 1 关于KOA的动物模型 |
| 2 制动模型的机理分析 |
| 3 本实验造模符合KOA的病理特点 |
| 4 治疗结果分析 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 针刀对膝骨关节炎兔外侧副韧带生物力学的影响研究 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验动物造棋 |
| 2.3 干预措施 |
| 2.4 取材及指标观察 |
| 2.5 数据处理及统计处理 |
| 实验结果 |
| 1 外侧副韧带应力松弛测试结果 |
| 2 外侧副韧带蠕变测试结果 |
| 3 外侧副韧带力学拉伸测试结果 |
| 讨论 |
| 1 关于膝关节韧带与膝骨关节炎 |
| 1.1 膝关节外侧副韧带的解剖功能 |
| 1.2 探讨膝关节韧带与膝骨关节炎关系 |
| 2 针刀干预对外侧副韧带生物力学性能影响 |
| 3 经筋理论与KOA关系 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 实验三 针刀对KOA韧带胶原相关因子基因蛋白表达的影响研究 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验动物造模 |
| 2.3 干预措施 |
| 2.4 取材及指标观察 |
| 2.5 数据处理及统计处理 |
| 实验结果 |
| 1 针刀对KOA兔韧带TGF-β1、COL-I、MMP-13及TIMP-1基因表达的影响 |
| 2 针刀对KOA兔韧带TGF-β1、COL-I、MMP-13及TIMP-1蛋白表达的影响 |
| 讨论 |
| 1 针刀对KOA兔韧带TGF-β1基因和蛋白表达的影响 |
| 2 针刀对KOA兔韧带COL-I基因和蛋白表达的影响 |
| 3 针刀对KOA兔韧带MMP-13及TIMP-1基因和蛋白表达的影响 |
| 4 TGF-β1、COL-I、MMP-13及TIMP-1在KOA中作用 |
| 5 关于韧带生物力学特性与生物学关系 |
| 6 针刀与电针对KOA不同治疗作用 |
| 7 小结 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附图 |
（10）静水压下芹菜素对人椎间盘髓核细胞凋亡及基质代谢的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语词 |
| 文献综述 |
| 综述1 腰椎间盘退变与生物力学因素关系的研究进展 |
| 1. 椎间盘的生物力学特性 |
| 2. 压应力对椎间盘细胞及细胞外基质的影响 |
| 3. 牵拉应力对椎间盘细胞及细胞外基质的影响 |
| 4. 椎间盘细胞应答生物力学干预的机制研究进展 |
| 5. 总结和展望 |
| 参考文献 |
| 综述2 腰椎间盘退变与基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制因子(TIMPs)的关系 |
| 1. MMPs及TIMPs的理化特性及功能 |
| 2. MMPs及TIMPs与椎间盘退变的关系 |
| 3. 影响MMPs和TIMPs失衡的因子及调节机制 |
| 4. 总结和展望 |
| 参考文献 |
| 综述3 椎间盘退变与一氧化氮(NO)关系的研究进展 |
| 1. 一氧化氮(NO)在退变椎间盘中的组织学定位研究 |
| 2. 一氧化氮(NO)对椎间盘基质及细胞的影响 |
| 3. 一氧化氮(NO)引起椎间盘退变的相关机制研究 |
| 4. 总结和展望 |
| 参考文献 |
| 综述4 腰椎间盘退变与细胞生长因子关系的研究进展 |
| 1. 转化生长因子-β(TGF-β) |
| 2. 胰岛素样生长因子(IGFs)和血小板衍生生长因子(PDGF) |
| 3. 成纤维细胞生长因子(FGF)和表皮生长因子(EGF) |
| 4. 总结和展望 |
| 参考文献 |
| 综述5 中药提取物——芹菜素(apigenin,API)药理研究进展 |
| 1. 对组织、器官及系统的保护作用 |
| 2. 保健作用 |
| 3. 抗肿瘤 |
| 4. 降压和降脂 |
| 5. 降糖 |
| 6. 其他作用 |
| 7. 总结和展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 1.腰椎间盘退行性病变的现状 |
| 2.腰椎间盘退变的病因、病理学基础 |
| 3.研究意义 |
| 第一部分 人椎间盘髓核细胞的培养扩增、传代及生物学特性的研究 |
| 引言 |
| 由美国ScienCell~(TM)实验室提供的人髓核细胞证书 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 主要实验仪器及用品 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 髓核细胞株(HNPC)的培养、增殖及传代过程 |
| 2.2 髓核细胞(HNPC)培养的连续形态学观察 |
| 2.3 髓核细胞计数 |
| 2.4 髓核细胞增殖活性检测(MTT) |
| 2.5 髓核细胞主要基质成分表达量检测 |
| 3. 统计学处理 |
| 结果 |
| 1. 髓核细胞形态学观察情况 |
| 1.1 倒置相差显微镜下观察情况 |
| 1.2 透射电子显微镜下观察情况 |
| 2. 髓核细胞计数与细胞生长曲线 |
| 3. MTT摄取实验检测髓核细胞增殖活性 |
| 4. 髓核细胞主要基质成分表达量检测 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 芹菜素、SNAP、L-NMMA对人髓核细胞产生NO的剂量依赖性研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 主要实验仪器及用品 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验对象:使用传4代髓核细胞进行实验 |
| 2.2 干预药物(芹菜素、SNAP、L-NMMA)溶液的制备 |
| 2.3 药物干预剂量范围设定 |
| 2.4 实验分组 |
| 2.5 药物干预NO释放量测定 |
| 3. 统计学处理 |
| 实验结果 |
| 1. 各组药物对髓核细胞一氧化氮释放量的影响 |
| 2. 各组药物作用后髓核细胞形态学观察 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 构建髓核细胞体外静水压加载系统及其可行性探讨 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 主要实验仪器及用品 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 静水压加载系统的设计原理及主要构成 |
| 2.1.1 静水压装置的设计原理 |
| 2.1.2 静水压加载系统的设计标准及主要构成 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.2.1 髓核细胞的传代、铺片 |
| 2.2.2 髓核细胞静水压加载 |
| 2.2.3 髓核细胞静水压加载实验分组 |
| 2.2.4 髓核细胞形态学观察 |
| 2.2.5 髓核细胞存活率检测 |
| 2.2.6 髓核细胞蛋白多糖表达情况检测 |
| 3. 统计学处理 |
| 实验结果 |
| 1. 显微镜下观察静水压对髓核细胞形态的影响 |
| 2. 髓核细胞成活率检测结果 |
| 3. 髓核细胞Alcian blue染色结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 静水压下芹菜素对人髓核细胞凋亡率及基质金属蛋白酶代谢的影响 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 主要实验试剂 |
| 1.2 主要实验仪器及用品 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验对象:髓核细胞的传代、爬片和增殖 |
| 2.2 干预药物(芹菜素、SNAP)溶液的制备及浓度调整 |
| 2.3 静水压加载大小及作用时间选择 |
| 2.4 实验分组 |
| 2.5 髓核细胞凋亡率检测方法 |
| 2.6 髓核细胞MMP-3及TIMP-1表达免疫组织化学染色法检测 |
| 2.7 髓核细胞Ⅱ型胶原表达的免疫组织化学染色法检测 |
| 3. 统计学处理 |
| 实验结果 |
| 1. 静水压下各实验组髓核细胞凋亡率检测结果 |
| 2. 静水压下各实验组髓核细胞MMP-3及TIMP-1表达情况 |
| 3. 静水压下各实验组髓核细胞Ⅱ型胶原表达情况 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 课题创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、一氧化氮合酶抑制剂对炎性刺激下软骨细胞增殖和基质代谢的影响（论文参考文献）
- [1]白细胞介素18介导的软骨细胞自噬调控在骨关节炎中的作用及机制研究[D]. 陈中概. 浙江大学, 2020(01)
- [2]鹿茸多肽对骨关节炎软骨细胞的保护作用[D]. 侯雅婷. 大连理工大学, 2020(02)
- [3]木香烃内酯治疗骨关节炎的作用及其机制的研究[D]. 何宇哲. 浙江大学, 2020(02)
- [4]CTHRC1通过JNK1/2信号通路介导IL-1β诱导的成软骨细胞凋亡[D]. 张琦. 安徽医科大学, 2020(01)
- [5]保护素DX在骨关节炎中的治疗作用和机制研究[D]. 朴尚. 中国医科大学, 2020(01)
- [6]WNT信号通路介导电针干预CCI大鼠模型及其与nNOS关系的机制研究[D]. 郑明岳. 上海中医药大学, 2019(02)
- [7]脱细胞细胞外基质增强软骨细胞抗炎性及其SIRT1介导机制的研究[D]. 浦承波. 苏州大学, 2019(04)
- [8]菊苣酸对神经炎症及认知功能障碍的干预作用及其分子机制研究[D]. 刘茜. 西北农林科技大学, 2017(01)
- [9]针刀对KOA兔韧带力学改变及韧带胶原相关因子基因蛋白表达的影响研究[D]. 金英利. 北京中医药大学, 2014(01)
- [10]静水压下芹菜素对人椎间盘髓核细胞凋亡及基质代谢的影响[D]. 陈江. 北京中医药大学, 2011(10)