一、头孢类抗生素的耐药性（论文文献综述）
马剑钢[1]（2021）在《动物源携带tet（X3）/tet（X4）基因的细菌耐药性及传播特性研究》文中研究指明携带tet（X）基因变体的质粒的流行,将对临床耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（Carbapenem-Resistant-Enterobacteriaceae,CRE）的治疗带来威胁,也给畜禽养殖治疗药物的选择加大了难度。tet（X3）和tet（X4）基因是近两年发现可通过质粒介导细菌对替加环素产生高水平耐药性,同时也可以对四环素及其它四环素类衍生物产生高水平耐药。尽管替加环素未在兽医临床上应用,但已在多地区猪、鸡、牛等多种动物源细菌中鉴定出tet（X3）/tet（X4）基因,其产生机制及流行趋势尚不清楚。明确携带tet（X3）/tet（X4）基因细菌在各地区中的流行及耐药趋势,阐明耐药基因的传播机制对临床用药和防范耐药基因的传播具有指导意义。本研究从陕西、宁夏、山西、四川、青海等8省市采集猪、羊和朱鹮粪便样品共计1362份,分离替加环素耐药菌,对tet（X3）/tet（X4）基因的分布进行了调查,同时对分离到的tet（X3）/tet（X4）基因阳性菌株进行药敏试验,了解这些菌株对其他类别抗生素的耐药情况;对部分菌株进行全基因测序分析,分析tet（X3）/tet（X4）基因阳性菌株的遗传多态性以及基因定位情况,对不同菌种中tet（X3）/tet（X4）基因的核心结构进行分析;最后通过接合实验、适应性代价及基因稳定性试验研究tet（X3）/tet（X4）基因的传播特性。具体研究如下:1.将采集的1362份样品通过替加环素抗性琼脂培养基筛选耐药菌,建立多重PCR检测方法对分离到的耐药菌进行tet（X3）/tet（X4）基因的检测,并进行风险因素分析。结果显示仅在猪源样品中分离到218株替加环素耐药菌,各地区的分离率分别为宁夏56%（14/25）、广西54.9%（112/204）、陕西51.33%（58/113）、山西26.67%（4/15）和四川8.73%（11/126）,包括大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和多种不动杆菌属细菌;风险因素分析不同地区和不同规模养殖场的耐药菌阳性率差异显着。本研究发现宁夏、广西和陕西的猪场中广泛存在携带tet（X3）/tet（X4）基因的细菌。2.通过微量肉汤稀释法对分离到的203株携带tet（X3）/tet（X4）基因的菌株进行了14种抗生素的药敏试验,并对药敏结果进行差异分析。结果显示携带tet（X3）/tet（X4）基因的菌株均对四环素、多西环素和替加环素表现出高度耐药,对氟苯尼考和磺胺异恶唑共同耐药性分别为100%和99.51%,对氨苄西林（91.63%）、复方阿莫西林（79.31%）和恩诺沙星（73.99%）耐药严重,多重耐药性严重;所有菌株均对美罗培南和多粘菌素敏感;不同地区之间菌株对头孢噻呋、头孢他啶、亚胺培南、庆大霉素和恩诺沙星的耐药性差异较大。本研究发现携带tet（X3）/tet（X4）基因的菌株多重耐药性严重,氟苯尼考、磺胺异恶唑和氨苄西林是耐药性最严重的抗生素。3.为了获得携带tet（X3）/tet（X4）基因的菌株基因组信息和质粒谱信息,通过二代全基因测序、脉冲场凝胶电泳以及Southern blot印记杂交对部分菌株进行遗传特性分析。结果显示大肠杆菌未发现明显的克隆传播,91.02%的大肠杆菌菌株中tet（X4）基因位于其质粒DNA上,并且这些菌株中多携带Inc X1型复制子的质粒;肺炎克雷伯菌存在一定克隆传播,ST727型最多（占84.62%）,但tet（X4）基因均位于质粒上;多种不动杆菌携带的tet（X3）基因位于质粒上,主要通过质粒传播耐药基因。本研究发现质粒是传播tet（X3）/tet（X4）基因的重要因素,其中Inc X1型质粒是大肠杆菌间传播tet（X4）基因的主要原因。4.为进一步获得不同菌种中携带tet（X3）/tet（X4）基因的基因组精细结构信息,通过三代全基因测序对携带tet（X3）/tet（X4）基因的不同菌种进行全基因组测序,比较质粒信息以及核心遗传结构。结果显示肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中携带的质粒骨架结构相似,由Inc HI1型质粒介导。Towneri不动杆菌（Acinetobacter towneri）中携带tet（X3）基因的质粒与肠杆菌科细菌中携带tet（X4）的质粒无相关性。Indicus不动杆菌（A.indicus）携带的tet（X4）基因位于染色体上并且有串联排列的17个拷贝。插入元件IS26和ISCR2与tet（X3）/tet（X4）基因的转移存在相关性,tet（X3）的核心遗传结构为?ISCR2-IS26-Lys R-aph（3’）-Ia-IS26-xer D-tet（X3）-resolvase-hp-ISCR2,tet（X4）的核心遗传结构为abh-tet（X4）-ISCR2和ISCR2-abhtet（X4）-ISCR2。5.对携带tet（X3）/tet（X4）基因的菌株进行接合实验,以大肠杆菌26R 793为接合受体研究野生菌株中质粒的转移能力;通过分子克隆获得表达tet（X3）/tet（X4）基因的大肠杆菌DH10β-tet（X3）和DH10β-tet（X4）,比较菌株的生长速率;此外还通过对tet（X4）基因不同拷贝数的菌株进行传代培养,研究其多拷贝形成机制。结果显示57.14%的大肠杆菌和50%阴沟肠杆菌可通过接合转移将携带tet（X4）基因的质粒传递到受体菌中,同时将多种耐药性共同传递给受体菌;比较大肠杆菌DH10β、DH10β-tet（X3）和DH10β-tet（X4）的生长曲线并未表现出明显的适应性代价;对不同拷贝tet（X4）基因的菌株传代结果显示替加环素对多拷贝的形成和维持具有重要作用,菌株通过插入元件ISCR2进行滚环复制形成串联重复基因,能一定程度上提高菌株对替加环素的耐药值。本研究证实大肠杆菌主要通过质粒进行tet（X4）基因的传递,其中插入序列ISCR2基因可介导串联重复tet（X4）基因的产生。虽然医院临床上还很少检测到携带tet（X）变体的细菌,但已在多省市的动物中发现,且多数细菌可通过接合转移的形式水平传播tet（X）基因变体。不仅会造成tet（X）变体在动物中广泛传播,限制四环素类抗生素的应用,还可能在未来某种压力作用下从动物源细菌大量传播到人源细菌中,对CRE感染病人的治疗造成威胁。本研究调查了多省市动物源细菌中tet（X3）/tet（X4）基因的流行现状,并对tet（X3）/tet（X4）基因的遗传环境进行了分析,初步阐明替加环素耐药菌株的流行规律以及tet（X3）/tet（X4）基因的传播特性,为替加环素耐药菌的有效防控提供相关数据支持。
周永林[2]（2021）在《齐墩果酸抑制β-内酰胺酶和细菌性溶血素活性作用及其机制研究》文中提出近年来抗菌药物在畜牧养殖过程中的广泛应用与细菌耐药性形成已成恶性循环,同时诱导和加速多种耐药菌如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的出现和流行,导致抗生素治疗日趋无效。金黄色葡萄球菌是兽医临床上重要的病原菌,可导致乳房炎和肺炎等多种疾病,严重威胁畜禽养殖业的发展。金黄色葡萄球菌可通过分泌β-内酰胺酶对β-内酰胺类抗生素产生抗性,舒巴坦等竞争性酶抑制剂对B类金属β-内酰胺酶抑制作用差,而MRSA如USA300携带多种金属β-内酰胺酶,这使得耐药金黄色葡萄球菌感染的防控难度加大。此外,在NDM-1耐药酶未报道之前,碳青霉烯类抗生素一直被用于治疗临床上严重耐药肠杆菌的感染。然而,随着NDMs和KPCs等碳青霉烯酶的出现和广泛传播,导致所有β-内酰胺类抗生素在碳青霉烯酶阳性菌感染后治疗无效。而且临床上已经出现同时携带ndm和mcr基因的大肠杆菌等革兰氏阴性菌。因此,临床上迫切需要研发广谱β-内酰胺酶抑制剂协同抗菌药物以控制携带β-内酰胺酶耐药菌尤其耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的感染。细菌性溶血素是细菌在致病过程中所分泌的一类重要毒力蛋白,常见的细菌性溶血素包括金黄色葡萄球菌溶血素Hla,李斯特菌溶血素LLO、肺炎链球菌溶血素PLY和猪链球菌溶血素SLY等。细菌性溶血素可裂解组织细胞和协助细菌逃避机体免疫攻击和获取营养,在细菌感染建立过程中发挥着不可或缺的作用。如金黄色葡萄球菌溶血素敲除菌株在细菌性肺炎、乳房炎和肾炎等模型中毒力显着减弱,甚至缺失。因此,以细菌性溶血素为药物靶点进行抑制剂筛选是抑制细菌致病性的一种有效策略。综上,筛选获得一种可同时抑制耐药酶和毒力因子的天然化合物,这将可能极大的提高耐药致病菌感染的治疗效果,同时减少开发药物的成本。本研究最初的目标是通过酶活性抑制试验从天然化合物中筛选出一种可抑制金黄色葡萄球菌携带的β-内酰胺酶活性的抑制剂。经筛选发现,齐墩果酸可显着抑制金黄色葡萄球菌携带的β-内酰胺酶的水解活性,同时对主要碳青霉烯酶如NDM-1、KPC-2和VIM-1也有显着的抑制作用,而对头孢菌素酶Amp C和超广谱β-内酰胺酶的抑制作用不显着。此外,加入不同金属离子进行酶活性抑制试验发现,齐墩果酸仅在锌离子存在的缓冲液中对NDM-1的抑制作用受到影响,在其它金属离子存在的缓冲液中无显着影响,提示齐墩果酸并非特异性金属离子螯合剂。本研究进一步通过棋盘法最小抑菌浓度试验、生长曲线试验、时间-杀菌曲线试验和细菌染色试验等验证了齐墩果酸及其类似物可显着增强β-内酰胺类抗生素对β-内酰胺酶阳性金黄色葡萄球菌和碳青霉烯酶阳性肠杆菌的抗菌作用（FIC≤0.33±0.07）,而舒巴坦仅对金黄色葡萄球菌与β-内酰胺类抗生素具有显着的协同效果,而与美罗培南联合对NDM-1阳性大肠杆菌无显着的协同效果。齐墩果酸在远大于32μg/m L浓度条件下对受试菌株的生长无显着影响。此外,本研究结果显示,齐墩果酸单独使用不会诱导耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300和NDM-1阳性大肠杆菌ZJ487对β-内酰胺类抗生素产生耐药性,而耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300在β-内酰胺类抗生素压力下可产生严重的耐药性。为确定齐墩果酸联合β-内酰胺类抗生素的体内协同效果,本研究建立了小鼠耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染肺炎模型,通过小鼠存活率、肺组织菌落定殖、肺组织β-内酰胺酶活性检测、靶器官病理变化和炎症反应等指标评价齐墩果酸与β-内酰胺类抗生素的体内协同效果。与单独青霉素G钠治疗相比,齐墩果酸联合青霉素G钠治疗后金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活率提高50.0%,而舒巴坦联合青霉素G钠治疗后的存活率提高37.5%,略差于齐墩果酸联合组。此外,单独齐墩果酸对金黄色葡萄球菌感染小鼠具有一定的治疗效果,这提示齐墩果酸在针对金黄色葡萄球菌感染过程还具有其它药理学作用,我们推测其可能抑制了金黄色葡萄球菌致病相关毒力因子。为验证上述推测,本研究通过溶血试验和细胞保护试验等进行了验证,结果显示齐墩果酸及其类似物在4μg/m L浓度条件下可显着抑制多种不同的细菌性溶血素的溶红细胞活性,齐墩果酸可显着降低MH-S细胞和A549细胞由金黄色葡萄球菌溶血素Hla介导的损伤。这一结果进一步证实了齐墩果酸单独使用可降低耐药金黄色葡萄球菌的致病性从而发挥保护作用。本研究通过酶活性抑制试验、溶血试验、荧光定量PCR试验、蛋白免疫印迹试验、分子动力学模拟、氨基酸定点突变和荧光淬灭等试验确定了齐墩果酸不影响金黄色葡萄球菌携带的β-内酰胺酶和金属β-内酰胺酶以及金黄色葡萄球菌溶血素Hla蛋白的分泌和表达,而是与NDM-1蛋白和Hla蛋白通过范德华力直接结合发挥抑制作用。进一步通过对突变子蛋白进行酶活性抑制试验、溶血试验和突变子菌株最小抑菌浓度检测试验确证了分子动力学模拟结果的可靠性。综上所述,作为β-内酰胺酶和细菌性溶血素双靶标抑制剂,齐墩果酸可显着降低由细菌性溶血素对机体造成的损伤和显着恢复β-内酰胺类抗生素的体内外抗菌活性。为基于抑制细菌致病性和耐药性的双靶标抗耐药致病菌感染新药研发奠定了良好的前期试验基础和提供了先导化合物。
吴上[3]（2021）在《食品加工理化因子对鼠伤寒沙门氏菌耐药性的影响及相关机制研究》文中认为鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella enterica serovar Typhimurium）的抗生素耐药性已成为食品中的关键安全隐患。食品加工过程中的亚致死性环境压力会使沙门氏菌通过适应基因型和表型来应对环境压力,从而减少压力的影响并增加细胞活力,引发抗生素耐药性的变化,对食品安全和人类健康造成安全隐患。耐药沙门氏菌的耐药产生和传播机制已经成为当前研究热点,当今大部分研究集中于基因层面,需要在分子生物学和生化方面对耐药机制进行更全面的阐释。本论文以鸡肉加工过程分离株（CPI）和猪养殖分离株（PFI）两组野生型菌株,以及ATCC 14028标准菌株（14028s）作为研究对象,研究加工过程中理化环境胁迫后的鼠伤寒沙门氏菌耐药性消长规律,并基于代谢组学和转录组学分析胁迫后的耐药性变化在基因层面和代谢层面的响应,为肉类生产加工提供指导,为耐药机制研究提供有价值的参考。主要内容如下:研究不同p H、温度胁迫后的鼠伤寒沙门氏菌耐药性消长规律,探究了酸碱环境对细菌胞外三磷酸腺苷（Adenosine-triphosphate,ATP）和膜表面形态的影响。结果表明,酸碱环境（p H 5.0,p H 6.0,p H 8.0,p H 9.0）胁迫降低了鼠伤寒沙门菌对8种抗生素的抗性,同时增加了三株受试菌株对美罗培南（MERO）的抗性。美罗培南的最小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration,MIC）提高了16～64倍。在酸或碱胁迫下,细胞外ATP含量增加,扫描电镜（SEM）结果清楚地显示沙门氏菌外膜出现皱纹和孔洞。这些观察结果意味着膜通透性的改变,这可能会降低沙门氏菌的耐药性。冷（-20℃,4℃）、热（55℃）胁迫使鼠伤寒沙门菌对四环素、头孢噻肟、头孢他啶、萘啶酸、阿奇霉素和氨苄西林的抗性增强,MIC增加2～4倍。抗菌素的抗性只有在冷热胁迫发生一定时间后才发生变化,此后不再随着胁迫时间延长而改变。研究消毒剂刺激后标准菌株14028s的抗性变化及代谢轮廓。选取次氯酸钠（1μg/m L）、氯已定（2μg/m L）、苯扎氯铵（8μg/m L）和十六烷基氯化吡啶（8μg/m L）分别胁迫14028s,胁迫8 h后菌株经消毒剂抗性测定及抗生素耐药性测定。结果表明,胁迫后的菌株对4种消毒剂的抗性几乎不变,而对部分抗生素的抗性产生显着变化,其中经氯已定、次氯酸钠胁迫的菌株对环丙沙星和氨苄西林的耐药性显着增强,MIC增加2～4倍;对庆大霉素的耐药性减弱,MIC减少2倍;苯扎氯铵、十六烷基氯化吡啶胁迫的菌株对环丙沙星、四环素和庆大霉素的耐药性提升,MIC增加4倍。代谢结果表明,最小抑菌浓度的苯扎氯铵和次氯酸钠胁迫使细胞体内的泛酸、甘氨酸和谷氨酸等代谢产物下调,对氨基酸代谢相关通路和能量代谢相关通路影响巨大。研究了酸胁迫后标准菌株14028s耐药性变化的机制。运用转录组学和代谢组学联合分析的方法,了解酸胁迫下抗生素耐药性变化的生理机制。结果表明,代谢组学和转录组学分析表明,酸性应激诱导的沙门氏菌通过上调嘌呤代谢途径和增强三羧酸（TCA）循环来加速能量代谢（代谢产物黄嘌呤、腺嘌呤、柠檬酸、琥珀酸、ATP和gua C基因上调）,细菌趋化性减弱（基因tcp、che A、che W、trg和代谢物D-核糖下调）,生物膜合成能力下降,这些与14028s对抗生素、阿奇霉素、磺胺甲恶唑和SM的耐药性降低的现象有关。酸性胁迫导致孔蛋白的损伤或严重减少,阻碍碳青霉烯类通过外膜系统（OM）进入细菌,导致沙门氏菌对美罗培南的抗性增强。转录组学分析显示沙门氏菌上调omp F基因以补偿酸处理下的孔蛋白损伤。
王哲红[4]（2021）在《新疆集约化牛场肺炎克雷伯菌分子流行病学调查及耐药特性研究》文中研究说明肺炎克雷伯菌是重要的人畜共患病原菌,牛感染后会引起乳房炎、肠炎和呼吸道疾病综合征等,给养牛业带来一定的经济损失。为调查新疆地区犊牛肺炎克雷伯菌感染情况及其耐药特性,本研究在2020年3月～2020年12月采集了新疆14个集约化牛场犊牛的鼻拭子与肛拭子,通过PCR方法扩增肺炎克雷伯菌的特异性基因khe,进行肺炎克雷伯菌分子流行病学调查,阳性样品进行细菌分离培养获得肺炎克雷伯菌株;分离株通过PCR鉴定、全基因组测序确定其血清型与ST分型,通过PCR方法检测分析肺炎克雷伯菌16个毒力基因的携带分布情况;微量肉汤稀释法检测分离株对20种临床常用抗生素的敏感性,并通过PCR方法分析其24种耐药基因的携带情况。结果显示:1.在新疆14个集约化牛场采集了犊牛495份鼻拭子样本、527份肛拭子样本,以肺炎克雷伯菌khe基因引物进行PCR扩增,鼻拭子样本中检出57份含有khe基因样本,检出率为11.52%（57/495）,肛拭子中检出150份,检出率为28.46%（150/527）;含有khe基因阳性样本经细菌分离培养、16S r RNA与khe基因的PCR鉴定,获得122株肺炎克雷伯菌分离株。2.选取53株肺炎克雷伯菌分离株采用PCR方法进行荚膜血清型鉴定、毒力基因鉴定。结果显示:5株分离株中检测出三种荚膜血清型,分别为K2型2株、K5型1株、K54型2株;在分离株中,肺炎克雷伯菌的16种毒力基因中检测到11种毒力基因,分别为wab G、uge、fim H、mrk D、ent B、ybt A、kfu、iut A、icu B、ure A、all S;40株分离株经MLST鉴定,其中33株分离株成功比对到ST型,总共检出23种ST型,7株未定型。ST14型、ST35型与ST2140型为优势ST型。3.药敏试验及耐药基因检测发现,40株分离株均对碳青霉烯类、氨基糖苷类（阿米卡星）、多肽类抗生素表现为不同程度的敏感,其中33株菌对青霉素类、头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类（卡那霉素、庆大霉素）、四环素类、磺胺类抗生素呈现出不同程度的耐药,耐药率为5.00%～60.00%。多重耐药菌株在分离株中占比为50.00%。24种耐药基因中有8种耐药基因被检测到,为SHV、gyrA、par C、oqx A、oqx B、Sul 1、Sul 2、Acr AB。其中gyrA基因与Acr AB基因的检出率最高,为100.00%,统计发现分离株最少携带2种耐药基因。结论:从新疆地区集约化牛场采集的犊牛呼吸道、消化道的样本中均检测出肺炎克雷伯菌,检出率为11.52%和28.46%。分离株至少存在三种荚膜血清型及11种毒力基因。经MLST鉴定出23种ST型,呈现ST型的高度多样性。药敏试验及耐药基因检测发现在抽样的集约化牛场中存在多种耐药基因、多重耐药的现象,提示新疆地区集约化牛场流行的肺炎克雷伯菌ST型多样性丰富、耐药性较强。本研究为该地区犊牛肺炎克雷伯菌病的防治提供了理论依据。
方超策[5]（2021）在《恩施地区某三甲医院NICU病原菌分布及耐药性分析》文中提出目的:分析恩施地区某三甲医院2017年1月至2019年12月间NICU内细菌培养阳性的新生儿临床特点、常见病原菌分布、构成与病原菌耐药情况,对临床新生儿的管理及抗菌药物的合理选择提供循证依据。方法:通过收集湖北民族大学附属民大医院NICU内2017年1月-2019年12月收住的细菌培养阳性新生儿的病历资料,进行回顾性分析,统计三年中各类标本（包括血液、痰液、脑脊液、粪便、尿液及各类分泌物等）分离的病原菌情况,分析患儿的临床特点、分离病原菌的构成、分布及主要病原菌的耐药情况。同时应用SPSS20.0软件包对所有研究数据进行统计学分析及处理,计数资料以频数或百分率表示,组间比较采用卡方检验,P<0.05即认为有统计学意义。结果:（1）2017年1月-2019年12月于恩施地区某三甲医院NICU住院患儿各类送检标本共5645份,送检标本共分离病原菌327株,培养阳性率5.79%,按相应排除标准筛选,纳入研究的细菌培养阳性新生儿共166例,其中男性100例,女性66例,男女比例1.51:1,共分离菌株共218株,其中仅1人未使用抗生素治疗,抗生素使用率达99.4%;对比这三年病原菌检出在性别、出生体重及季节分布上差异无统计学意义（P（29）0.05）,与患儿胎龄相关,2019年早产儿病原菌检出量明显升高（P（27）0.05）。（2）革兰氏阴性菌为NICU主要病原菌,其次为革兰氏阳性菌与真菌,从2017年至2019年,革兰氏阴性菌检出数量及占比呈上升趋势（P（27）0.05）。主要革兰氏阴性菌株为大肠埃希菌37株、肺炎克雷伯菌25株、铜绿假单胞菌13株、阴沟肠杆菌12株、鲍曼不动杆菌6株;革兰氏阳性菌株中排名前三位的分别是金黄色葡萄球菌43株、表皮葡萄球菌19株、溶血葡萄球菌9株;检出的真菌种类为近平滑假丝酵母菌、白假丝酵母菌及都柏林假丝酵母菌;（3）病原菌标本构成:检出量占首位的为痰培养,其他依次为分泌物培养和血培养,主要感染部位为肺部感染;（4）早产儿中革兰氏阴性菌、真菌检出率较足月儿高,革兰氏阳性菌检出率低于足月儿;极低出生体重儿中革兰氏阴性菌检出率较正常出生体重儿高,革兰氏阳性菌检出率低于正常出生体重儿;早发型败血症及新生儿肺炎患儿中革兰氏阴性菌检出率较高;晚发型败血症患儿革兰氏阳性菌检出率高;（5）耐药性分析:对NICU病房常见革兰氏阴性菌药敏结果进行分析可得大肠埃希菌对氨苄西林耐药率81.1%,同时对头孢菌素类抗生素耐药率处于较高水平,肺炎克雷伯菌对氯霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、米诺环素、美罗培南耐药率均在10%以下;铜绿假单胞菌对大部分抗生素敏感;主要革兰氏阳性菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺均高度敏感。结论:NICU内病原菌分布仍以革兰氏阴性菌为主,其检出菌株数量与相应比例呈上升趋势,其次为革兰氏阳性菌与真菌;其中革兰氏阴性菌主要为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对半合成青霉素类、头孢菌素类抗生素耐药性较高,多数耐药率在60%以上,对哌拉西林他唑巴坦、头孢哌酮舒巴坦、米诺环素、美罗培南耐药性较低。铜绿假单胞菌对大多数抗生素敏感,耐药率多数在10%以下。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌为NICU检出的主要革兰氏阳性菌,其对青霉素、阿奇霉素耐药率较高,对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺耐药率处于较低水平。本研究分析了本地区NICU内病原菌分布、构成及病原菌耐药情况,为针对新生儿的合理使用抗菌药物及重症管理提供了循证依据。
张海龙[6]（2021）在《河北省鸡源大肠杆菌的分离鉴定及毒力与耐药性检测》文中指出为了分析河北省鸡源大肠杆菌的血清型、毒力以及耐药情况,本试验对采集样品进行常规细菌分离培养、染色镜检和PCR方法进行鉴定,采用玻板凝集试验鉴定菌株的血清型,用PCR方法进行分离株的毒力、耐药基因的检测,用K-B药敏纸片法进行分离株抗生素的检测。研究内容和结果如下:1.菌株的分离鉴定:本试验对2019～2020年河北省采集的225份病死鸡样品进行分离鉴定,共分离出181株大肠杆菌,分离率为80.44%（181/225）,其中2019年的135份样品共分离出105株大肠杆菌,分离率为77.78%（105/135）,2020年90份样品共分离出76株大肠杆菌,分离率为84.44%（76/90）。采用玻板凝集试验对2018年实验室保存的105株大肠杆菌及2019～2020年分离鉴定的181株大肠杆菌进行血清型鉴定,结果显示2018年菌株以O1、O2、O78、O142血清型为主,分别占比20.95%、15.24%、13.33%、11.43%;2019年菌株以O26、O1、O18、O78血清型为主,分别占比18.10%、14.29%、12.38%、9.52%;2020年菌株以O78、O2、O1血清型为主,分别占比22.37%、17.11%、14.47%。三年以O1、O78、O2血清型为主,总检出率分别为16.78%、14.34%、12.94%。2.毒力基因及致病性检测:对2018～2020年的286株大肠杆菌采用PCR方法进行20种毒力基因的检测,共检测到16种毒力基因,总检出率为80%,其中2018年以iut A、Iss、fim C、omp T、hly F毒力基因为主,检出率为71.43%～92.38%,而iut B、ast A、Vat、tsh的检出率较低,在29.52%～47.62%;2019年以iut A、iro N、hly F、omp T、Iss、fim C、Ecs3703毒力基因为主,检出率为83.81%～96.19%,而Vat、colv、iut B、fyu A的检出率较低,在7.62%～48.57%;2020年以hly F、iuc D、Iss、omp T、fim C、iut A、Ecs3737毒力基因为主,检出率为77.63%～100%,而Vat、iut B、colv的检出率较低,在2.63%～42.11%。三年以hly F、omp T、fim C、Iss、iut A为主,检出率为86.36%～89.86%。而pap C、sfa、Ler、eae A毒力基因连续三年未检出。致病性试验结果表明,攻毒组的雏鸡发病率为100%,不同组的雏鸡死亡率为60%～100%,总死亡率高达91.82%。3.耐药表型与耐药基因检测:耐药表型检测结果表明,2018～2020年的286株大肠杆菌对24种抗生素均有不同程度的耐药,且具有严重的多重交叉耐药情况。其中2018年的大肠杆菌对复方新诺明、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、土霉素、多西环素、头孢拉啶、阿莫西林、青霉素的耐药率较高,为72.38%～98.10%,而对头孢噻呋、诺氟沙星、庆大霉素、阿米卡星、大观霉素的耐药率较低,为15.24%～39.05%;2019年的大肠杆菌对青霉素、氨苄西林、多西环素、土霉素、磺胺二甲氧嘧啶、林可霉素、替米考星、阿莫西林、复方新诺明、头孢噻呋、氟苯尼考、头孢曲松的耐药率较高,为70.48%～99.05%,而对庆大霉素、大观霉素、阿米卡星的耐药率较低,为24.76%～38.10%;2020年的大肠杆菌对林可霉素的耐药率为100%,对替米考星、磺胺二甲氧嘧啶、青霉素、土霉素、多西环素、氨苄西林、阿莫西林、磺胺间甲氧嘧啶的耐药率为84.21%～98.68%,而对大观霉素、阿米卡星、庆大霉素的耐药率较低,为9.21%～36.84%。而头孢曲松、替米考星、磺胺二甲氧嘧啶、林可霉素这四种抗生素的耐药率逐年增长,变化最明显的是替米考星,耐药率直线上升,从2018年的38.10%增加到2020年的98.68%。庆大霉素、大观霉素、阿米卡星连续三年的耐药率均低于40%。对2018～2020年的286株大肠杆菌的40种耐药基因进行检测,结果发现2018年以CTX-M、sul-2、aad A1、gyr B、Tet（C）耐药基因为主,检出率为75.24%～87.62%;2019年以sul-2、aad A1、gyr B、gyr A、par C耐药基因为主,检出率在75.24%～96.19%;2020年的oqx A、gyr A、par C检出率高达100%,Oxa-5、Str B、gyr B、sul-2、aad A1检出率在78.95%以上。其中gyr B、aad A1、gyr A、par C、sul-2三年的总检出率较高,分别为85.66%、85.31%、84.62%、81.12%、79.37%。
刘鑫[7]（2021）在《肺炎克雷伯菌噬菌体的分离鉴定及基因组分析》文中研究表明肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,KP）是一种革兰氏阴性菌,可以引起坏死性肺炎、肝脓肿,以及呼吸道、泌尿道、伤口和血液感染。肺炎克雷伯菌为条件致病菌,它是肠道及泌尿系统中正常菌群,机体免疫力低下、菌群失调时会引起各种炎症。目前,随着抗生素的广泛使用,多重耐药KP的分离率逐年上升。噬菌体是一种病毒,它侵染并杀灭细菌。噬菌体作为一种抗菌物质,可以特异性识别宿主菌并对其进行裂解。本研究包括肺炎克雷伯菌的分离纯化、噬菌体的分离鉴定及噬菌体全基因组分析。结果分离纯化出6株肺炎克雷伯菌。经检测,这6株KP均具有形成生物被膜的能力,基因组中均携带如I型菌毛相关基因fim、wab G基因等毒力基因和耐药基因,且这6株分离菌均对多种抗生素具有耐药性,均为多重耐药肺炎克雷伯菌。以这6株KP作为宿主菌,经污水富集法从未经处理的医院废水中分离筛选出2株裂解性噬菌体,分别命名为ABTNL-1、ABTNL-2。经宿主谱测定结果显示,噬菌体ABTNL-1、ABTNL-2能裂解两株及以上细菌;透射电镜观察显示,这两株噬菌体形态学均属于有尾噬菌体目、长尾噬菌体科;通过测定最佳感染复数,噬菌体ABTNL-1和ABTNL-2的最佳感染复数分别为0.1和1;通过测定一步生长曲线测定噬菌体的裂解能力,ABTNL-1和ABTNL-2的潜伏期分别为30 min和40 min,裂解量分别为200 PFU/cell和150 PFU/Cell;2株噬菌体对氯仿均不敏感;在0℃至40℃时,两株噬菌体处于相对稳定的状态,可以维持较高的效价,达到50℃后,噬菌体ABTNL-1失去活性,噬菌体ABTNL-2活性降低,当温度达到60℃时,两株噬菌体均失去活性;在中性pH时稳定,在过酸或过碱的条件下失去活性;单一噬菌体在不同感染复数下均能抑制宿主菌增长,但在5 h后细菌数量上升,推测可能产生噬菌体抗性菌株;采用噬菌体鸡尾酒在抑制宿主菌细胞生长方面更有效,且噬菌体抗性菌株出现的时间为10 h。噬菌体全基因组通过蛋白酶K/SDS方法获得,进行高通量二代测序,获得基因组序列,并对其基因进行分析。噬菌体ABTNL-1、ABTNL-2均为双链线性DNA:噬菌体ABTNL-1、ABTNL-2基因组全长分别为112841和49159 bp,GC含量分别为45.54%和51.03%,t RNA数目分别为25和0。基因组功能注释结果显示:噬菌体ABTNL-1、ABTNL-2分别含有144和77个ORFs,具有已知功能的ORFs数目分别是55和36个。经过比对,这2株噬菌体基因组中均不含溶原基因、抗生素耐药基因和毒力基因,证明这2株噬菌体在基因水平上的安全性。通过末端酶大亚基和主要衣壳蛋白基因建立进化树。结果显示,噬菌体ABTNL-1与Demerecviridae亚科,Sugarlandvirus属的噬菌体之间的亲缘关系相对较近;噬菌体ABTNL-2与Drexlerviridae亚科,Webervirus属的噬菌体之间的亲缘关系相对较近。本研究筛选裂解性噬菌体,旨在杀灭多重耐药肺炎克雷伯菌,并研究其特征,并对基因组进行分析,为将噬菌体应用于肺炎克雷伯菌感染奠定基础。
王佳佳[8]（2021）在《葛根芩连汤干预大肠埃希菌耐药性的作用机制研究》文中进行了进一步梳理目的:本课题研究通过收集临床湿热泻患儿的粪便样本,以耐药性大肠埃希菌为研究对象,运用药敏检测方法分析儿童粪便源性大肠埃希菌的抗生素耐药谱。应用中医经典方剂葛根芩连汤,主要针对群体感应系统（quorum sensing,QS）及生物膜（bacterial biofilm,BBF）,分析葛根芩连汤对耐药性大肠埃希菌生物膜的干预作用及生物膜与细菌群体感应系统的相关性,在分子水平阐释葛根芩连汤对耐药性大肠埃希菌的作用机制。方法:1.耐药性大肠埃希菌的分离鉴定及药敏检测儿童粪便源性大肠埃希菌的分离、纯化、鉴定及耐药谱检测,微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）测定,最小杀菌浓度（MBC）测定,革兰氏染色（快速法）。2.耐药性大肠埃希菌生物膜（BBF）的形态学观察结晶紫染色法筛选强成膜菌株,应用异硫氰酸荧光素标记的刀豆蛋白A（FITC-Con A）和碘化吡啶（PI）荧光染色,采用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察的实验方法,镜下观察葛根芩连汤对儿童粪便源性耐药性大肠埃希菌生物膜形成的形态学改变。3.葛根芩连汤对耐药性大肠埃希菌群体感应系统（QS）的影响运用实时定量荧光PCR（RT-PCR）分析葛根芩连汤对儿童粪便源性耐药性大肠埃希菌生物膜的作用是否与群体感应系统相关。结果:1.对儿童粪便源性大肠埃希菌分离株进行了包含氨基糖苷类、碳青霉烯类、头孢菌素类、青霉素类、β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合物、喹诺酮类和四环素类等11大类共计21种抗生素敏感性检测。分离菌株对21种抗生素的耐药率为6%～86%,多药耐药菌菌株比例高达88%。头孢菌素类抗生素的耐药率为56.5%（CAZ%18%,CZ%74%,FEP%66%,CTX%68%）、喹诺酮类抗生素的耐药率约为46.7%（CIP%44%,LVX%46%,MXF%50%）。分离菌株对阿米卡星和碳青霉烯类抗生素耐药率较低（0%和8%）。头孢唑林、头孢吡肟和氨苄西林对ESBL表型大肠埃希菌的MIC最高值均为>16μg/ml、头孢噻肟对ESBL表型大肠埃希菌的MIC最高值为>32μg/ml、庆大霉素、四环素和阿莫西林-克拉维酸对ESBL表型大肠埃希菌的MIC最高值均为>8μg/ml,甲氧苄啶/磺胺甲基异恶唑对ESBL表型大肠埃希菌的MIC最高值为>32μg/ml、环丙沙星和莫西沙星的MIC最高值分别为>2μg/ml和>4μg/ml,粘菌素MIC最高值为1μg/ml,均呈现高水平耐药。2.激光共聚焦显微镜镜下观察儿童粪便源性耐药性大肠埃希菌生物膜的形态学改变,药物作用48小时绿色荧光逐渐增强增多,红色信号开始有小团聚集,表示生物膜已逐步增多,并比较稳定。临床分离耐药性大肠埃希菌经不同浓度黄连、黄芩处理后均粘附力降低,菌体形态发生改变。3.临床分离菌株菌经1/4MIC（400μg/m）的黄芩作用后,hflX、LuxS、motA、pfS、sdiA共5个基因的mRNA表达量下调。结合共聚焦显微镜镜下观察及RT-PCR的结果,1/4MIC（400μg/ml）黄芩是抑制生物膜的最适浓度。菌株经1/4MIC（400μg/ml）黄连作用后,pfS、motA、hfl A共3个基因的mRNA表达量均下调,fitsQ、hflX、omp A、sdiA共4个基因的表达则出现不同程度的上调。1/8MIC（200μg/ml）黄芩、黄连作用后,基因mRNA表达量均上调。但是激光共聚焦显微镜观察,1/8MIC（200μg/ml）的黄芩、黄连对于生物膜的形成均具有抑制作用。结论:1.临床分离鉴定大肠埃希菌显示多药耐药菌菌株比例高。其中头孢菌素类抗生素、喹诺酮类抗生素的耐药率较高,分别为56.5%和46.7%,儿童抗生素耐药严峻。2.黄连、黄芩对儿童粪便源性耐药性大肠埃希菌的生物膜形成具有抑制作用,相同浓度情况下,对生物膜形成的抑制作用黄芩强于黄连,相同药物情况下,对生物膜形成的抑制作用,药物浓度更大,其作用越强。结合激光共聚焦显微镜及RT-PCR,其中1/4MIC（400μg/ml）黄芩为生物膜形成的最佳抑制浓度。3.1/4MIC（400μg/ml）黄芩抑制耐药性大肠埃希菌的生物膜形成,其机制是通过下调hflX、LuxS、motA、pfS、sdiA共5个基因的mRNA表达量,抑制LuxS/AI-2介导的种间QS系统的AI-2信号分子的合成阶段。1/4MIC（400μg/ml）黄连抑制耐药性大肠埃希菌的生物膜形成,其机制是抑制了与大肠埃希菌鞭毛驱动紧密相连的双组分系统qse BC,进而AI-2生成减少。1/8MIC（200μg/ml）黄芩、黄连作用后,基因mRNA表达量均上调,但是激光共聚焦显微镜观察,1/8MIC（200μg/ml）的黄芩、黄连对于生物膜的形成均具有抑制作用,经RT-PCR后考虑可能与其他机制相关,后续可从其它角度研究其可能的作用机制。
冯莉茹[9]（2021）在《山西省2014-2019年小儿感染性腹泻病细菌谱及耐药性变化分析》文中提出目的:了解2014年1月～2019年12月山西省小儿急性感染性腹泻病感染细菌谱及耐药性的变化,为小儿细菌感染性腹泻病的临床诊疗和合理使用抗生素提供依据。方法:回顾性研究分析2014年1月～2019年12月山西省儿童医院因急性感染性腹泻病住院患儿大便培养为阳性的病例,病例涵盖山西省11个地级市、26个市辖及下属县级市、县。由于2017年以后山西省儿童医院粪便细菌培养分离鉴定方法经过改善,故将2014～2016年及2017～2019年培养分离结果分别进行分析讨论,包括对感染性腹泻粪便培养阳性病例的性别、发病季节、发病年龄等一般资料、细菌谱变化的分析;将2014～2016年与2017～2019年分离菌株药敏结果进行对比分析。采用Microscan Walk-Away-40全自动微生物分析对粪便标本中的菌株进行鉴定,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。采用SPSS22.0软件对病历资料进行χ2检验统计学分析。结果:2014～2016年共分离菌株260株,主要分离菌株位于前四位的是肺炎克雷伯杆菌（96株,37.5%）、大肠埃希菌（48株,18.8%）、非伤寒非副伤寒沙门菌（47株,18.4%）、金黄色葡萄球菌（31株,12.1%）。其中,这四种细菌感染阳性率在性别、发病季节方面差异均无统计学意义,肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌感染阳性病例以0-1岁患儿为主,非伤寒非副伤寒沙门菌感染以>1岁为主,且差异均有统计学意义。2017～2019年共分离菌株992株,主要分离细菌有非伤寒非副伤寒沙门菌（469株、47.3%）、大肠埃希菌（135株、13.6%）、肺炎克雷柏杆菌（130株、13.1%）、金黄色葡萄球菌（65株、6.6%）。其中,这四种细菌感染阳性率在性别方面差异均无统计学意义;发病季节方面,肺炎克雷伯杆菌以冬季分离率最高,大肠埃希菌以夏秋季分离率最高,金黄色葡萄球菌以春夏季检出率最高,以上细菌季节分布差异具有统计学意义,非伤寒非副伤寒检出率最高为夏秋季,但差异无统计学意义;发病年龄段方面,非伤寒非副伤寒沙门菌以>1岁阳性率更高,肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌以0-1岁阳性率更高,且差异均有统计学意义,金黄色葡萄球菌阳性率年龄段差异无统计学意义。非伤寒非副伤寒沙门菌对头孢他啶、头孢噻肟耐药性增加显着;致泻性大肠埃希菌对头孢曲松耐药性增加显着;金黄色葡萄球菌对红霉素、克拉霉素、阿奇霉素耐药率较高。结论:1.2014～2016年山西省儿童感染性腹泻主要致病菌为肺炎克雷柏杆菌,多数细菌感染无明显性别、发病时间差异,发病年龄段多集中在0-1岁;2017～2019年主要致病菌为非伤寒非副伤寒沙门菌,多数细菌感染无明显性别差异,发病多集中在夏秋季,感染性腹泻高发年龄段与菌种相关。2.病原菌对常用抗生素的耐药率近年来呈现出不断上升趋势,多数细菌对一二代头孢类抗生素耐药性较高,对三代头孢类抗生素耐药率增加。
高晗[10]（2021）在《碳青霉烯酶活性的实时监测及双芳基酰腙对酶活性的抑制研究》文中研究表明β-内酰胺酶介导的细菌耐药性严重威胁着人类健康,细菌耐药性的遏制是G20峰会（2016,中国杭州）公布的全球行动计划和中国《遏制细菌耐药国家行动计划》。β-内酰胺酶分为A-D四个组群。其中,A、B及D组酶统称为碳青霉烯酶。目前,对产碳青霉烯酶耐药细菌的监测和抑制研究是世界卫生组织及各国政府卫生部门密切关注的热点。鉴于细菌耐药性研究的重要性,本论文从碳青霉烯酶活性的实时监测及其双芳基酰腙抑制剂的构建等方面进行了以下研究:1.发展了一种简单而直接的UV-Vis方法,用于活菌体内碳青霉烯酶活性的实时监测与抑制研究。实时活性监测显示,6株产β-内酰胺酶的菌株（大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等）均可水解法罗培南,而产NDM及KPC的肺炎克雷伯菌可水解四种抗生素（头孢唑啉、美罗培南、法罗培南和阿莫西林）,但普通大肠杆菌和金葡菌均不水解法罗培南。乙二胺四乙酸（EDTA）、依布硒、克拉维酸对肺炎克雷伯菌体内之NDM和KPC展现出显着的抑制,IC50值分别达1.2、84.7和13.3μM。此外,EDTA、D-卡托普利、及罗丹宁对大肠杆菌体内VIM-2表现出有效抑制,IC50值分别为1.3、510.8和9.3μM。这一工作证明,本研究发展的UV-Vis方法,可广泛应用于耐药细菌的实时监测及碳青霉烯酶抑制剂（药物）的筛选。2.设计合成了15个双芳基取代的酰腙衍生物,用1H,13C NMR和高分辨率质谱仪（HRMS）对其结构进行了表征和确认。生物活性评价表明,其中11个化合物对NDM-1展现出74%以上的抑制率,IC50值在1.2-15.2μM范围。化合物1对NDM-1的抑制率达96%以上(IC50=1.2μM)。化合物6及8对NDM-1、Imi S及L1表现出广谱抑制活性,IC50值在2.4-16.9μM范围。构性关系研究揭示,取代基2-吡啶及2-羟基苯可促进抑制剂对NDM-1的抑制活性。酶动力学及ITC表征表明,酰腙1可逆地竞争性地抑制NDM-1,Ki值为0.29±0.05μM。MIC评价显示,酰腙抑制剂可协同美罗培南使得其对产NDM-1大肠杆菌的抗菌活性提高了2-16倍。动物实验表明,化合物1可与美罗培南协同,降低小鼠脾脏和肝脏中产NDM-1肺炎克雷伯菌的感染。细胞毒性评价表明,酰腙的毒性较低。这项工作为发展碳青霉烯酶的抑制剂（药物）提供了新骨架和新途径。
二、头孢类抗生素的耐药性（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、头孢类抗生素的耐药性（论文提纲范文）
（1）动物源携带tet（X3）/tet（X4）基因的细菌耐药性及传播特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 四环素类抗生素及耐药机制研究进展 |
| 1.1 四环素类抗生素概述 |
| 1.2 四环素类抗生素抗菌机制 |
| 1.3 替加环素抗菌谱 |
| 1.4 细菌对替加环素的耐药机制 |
| 1.5 tet(X)基因家族的发现 |
| 1.6 tet(X)基因家族的流行现状 |
| 1.7 tet(X3)/tet(X4)基因的遗传环境 |
| 1.8 研究意义和目的 |
| 试验研究 |
| 第二章 动物源tet(X3)/tet(X4)基因阳性细菌的分离鉴定 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 样品及菌株 |
| 2.1.2 试剂耗材 |
| 2.1.3 仪器设备 |
| 2.1.4 试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 样品采集 |
| 2.2.2 耐药菌的分离保存 |
| 2.2.3 多重PCR方法建立及应用 |
| 2.2.4 菌种鉴定 |
| 2.2.5 数据分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 各地区样品耐药菌的分离鉴定 |
| 2.3.2 PCR检测方法建立及应用 |
| 2.3.3 tet(X3)和tet(X4)基因的分布 |
| 2.3.4 风险因素统计分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 携带tet(X3)/tet(X4)基因菌株的耐药性分析 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 菌株 |
| 3.1.2 试剂耗材 |
| 3.2 研究方法 |
| 3.2.1 菌株复苏 |
| 3.2.2 最小抑菌浓度(MIC)测定 |
| 3.2.3 数据分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 四环素类抗生素MIC分布 |
| 3.3.2 其他抗生素体外药敏结果 |
| 3.3.3 多重耐药情况 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 携带tet(X3)/tet(X4)基因菌株遗传多态性和基因定位 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 菌株 |
| 4.1.2 试剂耗材 |
| 4.1.3 仪器设备 |
| 4.1.4 试剂配制 |
| 4.2 研究方法 |
| 4.2.1 基因组和质粒DNA提取 |
| 4.2.2 二代全基因测序 |
| 4.2.3 生物信息学分析 |
| 4.2.4 脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE) |
| 4.2.5 Southern blot印记杂交 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 MLST分型 |
| 4.3.2 不同菌种耐药基因谱 |
| 4.3.3 质粒谱和基因定位 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 携带tet(X3)/tet(X4)基因菌株的比较基因组分析 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 菌株 |
| 5.1.2 试剂耗材 |
| 5.1.3 仪器设备 |
| 5.1.4 试剂配制 |
| 5.2 研究方法 |
| 5.2.1 基因组DNA提取 |
| 5.2.2 全基因测序 |
| 5.2.3 生物信息学分析 |
| 5.2.4 反向PCR |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 携带tet(X4)基因大肠杆菌基因组分析 |
| 5.3.2 携带tet(X3)/tet(X4)基因不动杆菌基因组分析 |
| 5.3.3 携带tet(X4)基因肺炎克雷伯菌基因组分析 |
| 5.3.4 携带tet(X4)基因阴沟肠杆菌基因组分析 |
| 5.3.5 菌种间tet(X3)/tet(X4)核心基因比较 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 tet(X3)/tet(X4)基因传播特性研究 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.1.1 菌株 |
| 6.1.2 试剂耗材 |
| 6.1.3 仪器设备 |
| 6.1.4 试剂配制 |
| 6.2 研究方法 |
| 6.2.1 接合转移实验 |
| 6.2.2 适应性代价 |
| 6.2.3 传代突变 |
| 6.2.4 绝对定量 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 接合转移结果 |
| 6.3.2 生长曲线 |
| 6.3.3 传代菌株稳定性 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）齐墩果酸抑制β-内酰胺酶和细菌性溶血素活性作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 革兰氏阴性菌耐药性研究进展 |
| 1.1 肠杆菌科细菌耐药性研究现状 |
| 1.2 铜绿假单胞菌耐药性研究现状 |
| 1.3 不动杆菌耐药性研究现状 |
| 第2章 金黄色葡萄球菌耐药性研究进展 |
| 2.1 金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性研究 |
| 2.2 金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药性研究 |
| 2.3 金黄色葡萄球菌对氨基糖苷类抗生素耐药性研究 |
| 2.4 金黄色葡萄球菌对四环素类抗生素耐药性研究 |
| 2.5 金黄色葡萄球菌对磷霉素耐药性研究 |
| 2.6 金黄色葡萄球菌对氯霉素耐药性研究 |
| 2.7 金黄色葡萄球菌对氟喹诺酮类抗生素耐药性研究 |
| 2.8 金黄色葡萄球菌对磺胺类抗生素耐药性研究 |
| 2.9 金黄色葡萄球菌对其它抗生素耐药性研究 |
| 第3章 细菌性溶血素研究进展 |
| 3.1 金黄色葡萄球菌溶血素在其致病过程中的作用研究 |
| 3.2 单增李斯特菌溶血素(LLO) |
| 3.3 肺炎球菌溶血素(PLY) |
| 3.4 猪链球菌溶血素(SLY) |
| 3.5 产气荚膜梭菌溶血素(PFO) |
| 3.6 大肠杆菌溶血素 |
| 第4章 主要五环三萜类化合物的药理学作用研究进展 |
| 4.1 齐墩果酸 |
| 4.2 熊果酸 |
| 4.3 山楂酸 |
| 4.4 科罗索酸 |
| 4.5 其它五环三萜化合物 |
| 第5章 新型抗耐药菌感染药物研究进展 |
| 5.1 现有抗生素的改造和联合使用研究 |
| 5.2 新型抗菌药物的研究 |
| 5.3 天然化合物在抗耐药菌感染中的替代策略研究 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 广谱β-内酰胺酶抑制剂的筛选 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第2章 齐墩果酸与β-内酰胺类抗生素的体外协同作用研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 齐墩果酸与β-内酰胺类抗生素的体内协同作用研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 齐墩果酸抑制细菌性溶血素活性作用的发现 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 齐墩果酸抑制Β-内酰胺酶和细菌性溶血素活性作用机制的确证 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 本硕博连读期间发表学术论文 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（3）食品加工理化因子对鼠伤寒沙门氏菌耐药性的影响及相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语索引 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 沙门氏菌及其耐药性概述 |
| 1.1.1 沙门氏菌简介 |
| 1.1.2 食品中沙门氏菌污染现状 |
| 1.1.3 沙门氏菌耐药现状 |
| 1.2 沙门氏菌耐药机制研究进展 |
| 1.2.1 染色体突变介导的耐药 |
| 1.2.2 酶水解或修饰药物介导的耐药 |
| 1.2.3 药物靶点的改变和替代介导的耐药 |
| 1.2.4 流出系统、孔蛋白和膜渗透性的改变介导的耐药 |
| 1.3 食品中加工理化因子对细菌耐药性的影响 |
| 1.3.1 酸、碱胁迫对细菌耐药性的影响 |
| 1.3.2 冷、热胁迫对细菌耐药性的影响 |
| 1.3.3 消毒剂胁迫对细菌耐药性的影响 |
| 1.4 组学技术手段在细菌耐药中的研究与应用 |
| 1.4.1 转录组学及其在细菌耐药中的研究与应用 |
| 1.4.2 代谢组学及其在细菌耐药中的研究与应用 |
| 1.5 立题背景与意义 |
| 1.6 主要研究内容 |
| 第二章 不同pH、温度胁迫后的鼠伤寒沙门氏菌耐药性的变化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028s的采集、鉴定与培养 |
| 2.3.2 酸、碱应激沙门氏菌培养物的制备 |
| 2.3.3 冷、热应激沙门氏菌培养物的制备 |
| 2.3.4 菌株的活菌量测定 |
| 2.3.5 菌株的耐药性检测 |
| 2.3.6 SEM拍摄酸、碱胁迫菌株膜表面形态 |
| 2.3.7 酸、碱胁迫菌株胞外ATP含量测定 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 酸环境胁迫对鼠伤寒沙门菌敏感性的影响 |
| 2.4.2 碱环境胁迫对鼠伤寒沙门菌敏感性的影响 |
| 2.4.3 冷环境胁迫对鼠伤寒沙门菌敏感性的影响 |
| 2.4.4 热环境胁迫对鼠伤寒沙门菌敏感性的影响 |
| 2.4.5 酸、碱后沙门氏菌存活率、胞外ATP含量及菌膜表面的变化 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 消毒剂刺激后ATCC14028s的抗性变化及代谢轮廓研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 消毒剂胁迫后ATCC14028s的制备 |
| 3.3.2 细菌活菌量测试 |
| 3.3.3 消毒剂胁迫菌株的消毒剂抗性测定 |
| 3.3.4 消毒剂胁迫菌株的抗生素耐药性测定 |
| 3.3.5 菌体样本前处理 |
| 3.3.6 GC-TOFMS检测 |
| 3.3.7 代谢数据处理与统计分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 ATCC14028s对四种消毒剂的MIC值 |
| 3.4.2 消毒剂胁迫菌株的活菌量 |
| 3.4.3 消毒剂胁迫后ATCC14028s对消毒剂的抗性变化 |
| 3.4.4 消毒剂胁迫后ATCC 14028s对14 种抗生素耐药变化 |
| 3.4.5 多元统计分析 |
| 3.4.6 单元统计分析 |
| 3.4.7 差异代谢物分析 |
| 3.4.8 代谢通路富集研究 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 酸胁迫后鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028s耐药性变化的机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 酸处理后沙门氏菌的培养和收集 |
| 4.3.2 样品前处理及上机检测 |
| 4.3.3 代谢数据处理与统计分析 |
| 4.3.4 菌株胞内ATP含量测定 |
| 4.3.5 转录组学分析 |
| 4.3.6 双组学联合分析 |
| 4.3.7 RT-PCR验证目的基因表达量 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 多元统计分析 |
| 4.4.2 差异代谢物的筛选 |
| 4.4.3 代谢通路的富集研究 |
| 4.4.4 基于转录组学差异表达基因筛选 |
| 4.4.5 代谢产物学与差异基因的相关性分析 |
| 4.4.6 嘌呤代谢和细菌趋化性通路对耐药性的影响 |
| 4.4.7 生物膜合成与肽聚糖合成对耐药性的影响 |
| 4.4.8 美罗培南耐药性提高的机制阐释 |
| 4.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 A:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 附录 B:附表 |
（4）新疆集约化牛场肺炎克雷伯菌分子流行病学调查及耐药特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 肺炎克雷伯菌研究进展 |
| 1.1.1 肺炎克雷伯菌简介 |
| 1.1.2 肺炎克雷伯菌生物学特性 |
| 1.1.3 肺炎克雷伯菌分类 |
| 1.1.4 肺炎克雷伯菌流行病学 |
| 1.1.5 肺炎克雷伯菌分子流行病学检测方法 |
| 1.1.6 肺炎克雷伯菌致病机制 |
| 1.1.7 肺炎克雷伯菌耐药现状 |
| 1.2 本研究的目的与意义 |
| 第2章 新疆集约化牛场肺炎克雷伯菌流行病学调查 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.0 样品来源 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 样品DNA的提取 |
| 2.2.2 肺炎克雷伯氏菌溶血酵素基因(khe)鉴定 |
| 2.2.3 牛源肺炎克雷伯菌的分离培养 |
| 2.2.4 牛源肺炎克雷伯菌的鉴定 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 样品khe基因检测结果 |
| 2.3.2 细菌分离培养结果 |
| 2.3.3 细菌鉴定结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 新疆集约化牛场肺炎克雷伯菌的分子分型及毒力基因检测 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验菌株 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 菌种复苏 |
| 3.2.2 分离株血清型检测 |
| 3.2.3 分离株MLST分型检测 |
| 3.2.4 分离株毒力基因检测 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 血清型检测结果 |
| 3.3.2 MLST分型结果 |
| 3.3.3 毒力基因检测结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 新疆集约化牛场肺炎克雷伯菌耐药特性研究 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验菌株 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 菌种复苏 |
| 4.2.2 分离株药敏试验 |
| 4.2.3 分离株耐药基因检测 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 药敏试验结果 |
| 4.3.2 耐药基因检测结果 |
| 4.3.3 耐药表型与基因型比对结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）恩施地区某三甲医院NICU病原菌分布及耐药性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 研究对象及方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 病原菌分布 |
| 2.3 病原菌标本分布 |
| 2.4 感染部位分布 |
| 2.5 主要病原菌变迁 |
| 2.6 耐药性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 一般情况分析 |
| 3.2 常见病原菌及构成比分析 |
| 3.3 病原菌标本构成与感染部位分析 |
| 3.4 革兰氏阴性菌耐药情况分析 |
| 3.5 革兰氏阳性菌耐药情况分析 |
| 3.6 研究的创新性与局限性 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 民大医院NICU个案调查表 |
| 综述 肺炎克雷伯菌流行、毒力、耐药机制及治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果、参加学术会议及获奖 |
| 致谢 |
（6）河北省鸡源大肠杆菌的分离鉴定及毒力与耐药性检测（论文提纲范文）
| 缩略词 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 鸡大肠杆菌的生物学特征 |
| 1.1.1 形态特征 |
| 1.1.2 培养条件 |
| 1.1.3 生化特性 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.3 临床症状及病理变化 |
| 1.4 大肠杆菌的致病机理 |
| 1.5 大肠杆菌的耐药性与耐药机制 |
| 1.5.1 大肠杆菌的耐药现状 |
| 1.5.2 大肠杆菌对不同种类药物的耐药机制 |
| 1.6 研究意义 |
| 第二章 河北省鸡源大肠杆菌的分离鉴定 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 样品来源 |
| 2.1.2 主要试剂及其配制 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 细菌的分离培养 |
| 2.2.2 细菌的鉴定 |
| 2.2.3 E.coli分离菌株的血清型鉴定 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 细菌分离鉴定结果 |
| 2.3.2 细菌的生化鉴定结果 |
| 2.3.3 分离菌株的16SrRNA鉴定结果 |
| 2.3.4 分离菌株血清型检测结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 河北省鸡源大肠杆菌毒力基因及致病性检测 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 主要菌株 |
| 3.1.2 试验动物 |
| 3.1.3 主要试剂及仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 菌株复苏 |
| 3.2.2 E.coli分离菌株毒力基因的检测 |
| 3.2.3 E.coli优势血清型代表株的致病性试验 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 毒力基因检测结果 |
| 3.3.2 多重毒力基因携带情况 |
| 3.3.3 致病性试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 河北省鸡源致病性大肠杆菌耐药性及耐药基因检测 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验菌株 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 |
| 4.1.3 药敏纸片 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 菌液复苏 |
| 4.2.2 菌液制备 |
| 4.2.3 药物敏感试验 |
| 4.2.4 耐药基因检测 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 河北省E.coli分离株的耐药情况 |
| 4.3.2 不同年份大肠杆菌分离株的多重耐药携带情况 |
| 4.3.3 河北省E.coli分离株耐药基因PCR检测结果 |
| 4.3.4 河北省E.coli分离株多重耐药基因携带情况 |
| 4.3.5 河北省E.coli分离株耐药表型与耐药基因相关性 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 耐药性检测分析 |
| 4.4.2 耐药基因检测分析 |
| 4.4.3 耐药表型与耐药基因相关性 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 论文受资助情况 |
| 致谢 |
（7）肺炎克雷伯菌噬菌体的分离鉴定及基因组分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 肺炎克雷伯菌概述 |
| 1.2 肺炎克雷伯菌毒力因子 |
| 1.2.1 荚膜多糖 |
| 1.2.2 脂多糖 |
| 1.2.3 铁载体系统 |
| 1.2.4 菌毛黏附蛋白 |
| 1.2.5 孔蛋白 |
| 1.3 肺炎克雷伯菌耐药性分析 |
| 1.3.1 对β内酰胺类抗生素耐药机制 |
| 1.3.2 对喹诺酮类抗生素耐药机制 |
| 1.3.3 对氨基糖苷类抗生素耐药机制 |
| 1.3.4 对替加环素耐药机制 |
| 1.4 噬菌体概述 |
| 1.4.1 噬菌体治疗历史 |
| 1.4.2 噬菌体防控 |
| 1.4.3 噬菌体应用治疗肺炎克雷伯菌感染 |
| 1.5 细菌噬菌体抗性机制 |
| 1.5.1 防止噬菌体吸附 |
| 1.5.2 防止噬菌体DNA进入 |
| 1.5.3 切割噬菌体核酸限制性修饰系统 |
| 1.5.4 流产感染系统 |
| 1.6 噬菌体与抗生素比较 |
| 1.7 噬菌体临床应用治疗实例 |
| 1.8 研究意义及思路 |
| 2 肺炎克雷伯菌的分离与鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验用品 |
| 2.2.1 实验样本 |
| 2.2.2 实验材料 |
| 2.2.3 实验仪器与设备 |
| 2.2.4 主要试剂的配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 肺炎克雷伯菌的分离培养 |
| 2.3.2 分子生物学鉴定 |
| 2.3.3 生物被膜形成能力测定 |
| 2.3.4 毒力基因及耐药基因检测 |
| 2.3.5 肺炎克雷伯菌生长曲线的测定 |
| 2.3.6 肺炎克雷伯菌抗生素敏感性测定 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 肺炎克雷伯菌的分离纯化 |
| 2.4.2 16S rRNA PCR结果 |
| 2.4.3 生物被膜形成能力 |
| 2.4.4 特异性基因、毒力基因及耐药基因检测结果 |
| 2.4.5 肺炎克雷伯菌生长曲线的测定 |
| 2.4.6 肺炎克雷伯菌耐药性分析 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 3 裂解性噬菌体的分离纯化与鉴定 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验用品 |
| 3.2.1 实验样本 |
| 3.2.2 实验材料 |
| 3.2.3 实验仪器与设备 |
| 3.2.4 主要试剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 噬菌体的分离纯化 |
| 3.3.2 噬菌体宿主谱的测定 |
| 3.3.3 噬菌体最佳感染复数的测定 |
| 3.3.4 噬菌体一步生长曲线的测定 |
| 3.3.5 氯仿对噬菌体稳定性的测定 |
| 3.3.6 温度和pH变化对噬菌体效价变化的影响测定 |
| 3.3.7 噬菌体颗粒的浓缩 |
| 3.3.8 噬菌体电镜观察 |
| 3.3.9 单一噬菌体在不同MOI条件下的体外抑菌实验 |
| 3.3.10 噬菌体鸡尾酒作用效果测定 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 噬菌体分离鉴定与形态学观察 |
| 3.4.2 噬菌体宿主谱分析 |
| 3.4.3 噬菌体最佳感染复数测定 |
| 3.4.4 噬菌体的一步生长曲线 |
| 3.4.5 氯仿对噬菌体的影响 |
| 3.4.6 温度和pH对噬菌体效价的影响 |
| 3.4.7 单一噬菌体在不同条件下的体外抑菌实验 |
| 3.4.8 噬菌体鸡尾酒抑菌实验 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 噬菌体的基因组分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验用品 |
| 4.2.1 实验样本 |
| 4.2.2 实验材料 |
| 4.2.3 主要试剂的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 噬菌体基因组的提取 |
| 4.3.2 噬菌体基因组测序 |
| 4.3.3 噬菌体基因组分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 噬菌体ABTNL-1 全基因组概况 |
| 4.4.2 噬菌体ABTNL-1 的同源进化树 |
| 4.4.3 噬菌体ABTNL-1 全基因组图谱 |
| 4.4.4 噬菌体ABTNL-2 全基因组概况 |
| 4.4.5 噬菌体ABTNL-2 的同源进化树 |
| 4.4.6 噬菌体ABTNL-2 全基因组图谱 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（8）葛根芩连汤干预大肠埃希菌耐药性的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 大肠埃希菌耐药现状 |
| 2 大肠埃希菌耐药机制 |
| 3 葛根芩连汤的研究进展 |
| 4 其他中药缓解细菌耐药性的研究进展 |
| 5 小结 |
| 第二章 实验研究 |
| 一、耐药性大肠埃希菌分离鉴定及药敏检测 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验菌株 |
| 1.2 实验药物 |
| 2 实验试剂与器械 |
| 2.1 实验试剂 |
| 2.2 实验器械 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 样本采集 |
| 3.2 样品的处理保存 |
| 3.3 耐药性大肠埃希菌的分离 |
| 3.4 革兰氏染色(快速法) |
| 3.5 生化鉴定及药敏检测 |
| 3.6 药物的配备 |
| 3.7 微量肉汤稀释法改良法测定MIC、MBC |
| 4 实验结果 |
| 4.1 患儿基本信息 |
| 4.2 耐药性大肠埃希菌分离结果 |
| 4.3 革兰氏染色(快速法)结果 |
| 4.4 药敏检测结果 |
| 4.5 MIC、MBC 测定的结果 |
| 5.小结 |
| 二、葛根芩连汤干预大肠埃希菌耐药性的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 大肠埃希菌的培养 |
| 2.2 生长曲线的绘制 |
| 2.3 结晶紫染色法筛选强成膜菌株 |
| 2.4 激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察 |
| 2.5 中药对生物膜形成相关基因表达及QS的影响 |
| 3 统计方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 生长曲线的绘制 |
| 4.2 强成膜菌株的筛选 |
| 4.3 激光共聚焦显微镜(LSCM)观察 |
| 4.4 RT-PCR(荧光实时定量PCR) |
| 5 小结 |
| 第三章 讨论与分析 |
| 第四章 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 原晓风教授辨证治疗儿科疾病学术经验粹集 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（9）山西省2014-2019年小儿感染性腹泻病细菌谱及耐药性变化分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 2014-2016 年小儿感染性腹泻特点 |
| 2.1.1 病原菌检出情况 |
| 2.1.2 .病原菌人群分布 |
| 2.1.3 发病季节分布 |
| 2.2 2017-2019 年小儿感染性腹泻特点 |
| 2.2.1 病原菌检出情况 |
| 2.2.2 .病原菌人群分布 |
| 2.2.3 发病季节分布 |
| 2.3 检出率的比较 |
| 2.4 2014-2019 年主要分离细菌耐药性比较 |
| 2.4.1 非伤寒非副伤寒沙门菌耐药性比较 |
| 2.4.2 .大肠埃希菌耐药性比较 |
| 2.4.3 .金黄色葡萄球菌耐药性比较 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 小儿感染性腹泻病细菌谱及耐药性变化的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（10）碳青霉烯酶活性的实时监测及双芳基酰腙对酶活性的抑制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 抗生素 |
| 1.1.1 抗生素的发现与发展 |
| 1.1.2 抗生素的分类及其杀菌机理 |
| 1.1.3 细菌耐药 |
| 1.1.4 抗生素耐药机制 |
| 1.2 β-内酰胺类抗生素及金属β-内酰胺酶 |
| 1.2.1 β-内酰胺类抗生素及其分类 |
| 1.2.2 β-内酰胺酶 |
| 1.2.3 金属β-内酰胺酶及其分类 |
| 1.3 金属β-内酰胺酶抑制剂 |
| 1.4 选题意义及研究内容 |
| 1.5 参考文献 |
| 第二章 活细菌体内碳青霉烯酶活性的实时监测与抑制 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 设计思路 |
| 2.3 仪器与试剂 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 VIM-2的表达与纯化 |
| 2.4.2 携带VIM-2基因的大肠杆菌的孵育及其实时监测 |
| 2.4.3 耐药细菌活力的评价 |
| 2.4.4 耐药细菌体内靶蛋白的抑制 |
| 2.4.5 抗生素摩尔吸光系数的测定和分析 |
| 2.5 结果与讨论 |
| 2.5.1 携带VIM-2基因的大肠杆菌水解抗生素的实时监测 |
| 2.5.2 工程菌体内VIM-2活性的实时监测 |
| 2.5.3 工程菌体内VIM-2活性的实时监测 |
| 2.5.4 临床耐药菌水解抗生素的实时监测 |
| 2.5.5 临床菌体内NDM活性的实时监测与抑制研究 |
| 2.5.6 临床菌体内KPC活性的实时监测与抑制研究 |
| 2.6 本章小结 |
| 2.7 参考文献 |
| 第三章 双芳基取代酰腙抑制剂的合成与活性研究 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 设计思路 |
| 3.3 酰腙化合物的合成方法 |
| 3.3.1 酰腙化合物的合成路线 |
| 3.3.2 仪器与试剂 |
| 3.3.3 酰腙化合物的合成与表征 |
| 3.4 酰腙化合物对金属β-内酰胺酶及其耐药菌的抑制活性评价 |
| 3.4.1 仪器与试剂 |
| 3.4.2 酰腙对金属β-内酰胺酶抑制活性的测定 |
| 3.4.3 酰腙对NDM-1抑制模式的表征 |
| 3.4.4 酰腙协同抗生素的抗菌活性测定 |
| 3.4.5 酰腙与抗生素体内的协同抗菌活性测定 |
| 3.4.6 酰腙化合物的细胞毒性评价 |
| 3.5 结果与讨论 |
| 3.5.1 酰腙的抑制活性评估 |
| 3.5.2 酰腙的抑制模式分析 |
| 3.5.3 酰腙的抗菌活性评价 |
| 3.5.4 酰腙与抗生素体内的协同抗菌活性测定 |
| 3.5.5 酰腙的细胞毒性评价 |
| 3.6 本章小结 |
| 3.7 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 |
四、头孢类抗生素的耐药性（论文参考文献）
- [1]动物源携带tet（X3）/tet（X4）基因的细菌耐药性及传播特性研究[D]. 马剑钢. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [2]齐墩果酸抑制β-内酰胺酶和细菌性溶血素活性作用及其机制研究[D]. 周永林. 吉林大学, 2021(01)
- [3]食品加工理化因子对鼠伤寒沙门氏菌耐药性的影响及相关机制研究[D]. 吴上. 江南大学, 2021(01)
- [4]新疆集约化牛场肺炎克雷伯菌分子流行病学调查及耐药特性研究[D]. 王哲红. 塔里木大学, 2021
- [5]恩施地区某三甲医院NICU病原菌分布及耐药性分析[D]. 方超策. 湖北民族大学, 2021(02)
- [6]河北省鸡源大肠杆菌的分离鉴定及毒力与耐药性检测[D]. 张海龙. 河北科技师范学院, 2021(08)
- [7]肺炎克雷伯菌噬菌体的分离鉴定及基因组分析[D]. 刘鑫. 大连理工大学, 2021(01)
- [8]葛根芩连汤干预大肠埃希菌耐药性的作用机制研究[D]. 王佳佳. 长春中医药大学, 2021(01)
- [9]山西省2014-2019年小儿感染性腹泻病细菌谱及耐药性变化分析[D]. 冯莉茹. 山西医科大学, 2021(01)
- [10]碳青霉烯酶活性的实时监测及双芳基酰腙对酶活性的抑制研究[D]. 高晗. 西北大学, 2021(12)