一、鸡马立克氏病CVI988/Rispens疫苗免疫效力试验（论文文献综述）
白雪雁[1]（2019）在《表达基因Ⅶ型新城疫病毒融合蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗株构建及其免疫效力试验》文中研究表明新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus）引起的禽类急性、烈性、高度接触性传染病。近年来,在我国流行的NDV强毒株主要是基因VII型,而广泛使用的La Sota疫苗毒株是基因II型。虽然La Sota疫苗对基因VII型NDV毒株可提供良好的临床保护,但是并不能有效阻止感染禽的排毒。因此,研制与NDV流行毒株基因型相匹配的疫苗对于ND的防控具有重要意义。火鸡疱疹病毒（HVT）FC126株在抗原性上与马立克氏病毒（MDV）相近,常用于鸡马立克氏病（MD）的预防。由于HVTFC126株的基因组含有较多可供外源基因插入的复制非必需区,同时又可以冻干保存,常作为禽用重组病毒疫苗的载体。融合（F）蛋白是NDV囊膜表面的主要糖蛋白,与NDV的致病性直接相关,也是主要保护性抗原。本研究以HVT FC126株的US2复制非必需区作为外源基因的插入位点,构建表达基因VII型NDVF蛋白的重组病毒疫苗株;此外,还将构建缺失F蛋白跨膜区的重组病毒,以期将表达的F蛋白分泌到重组病毒囊膜外,避免机体内抗体的中和作用,并评价了两株重组病毒疫苗的免疫效力首先构建含HVT FC126株外源基因插入位点处上下游序列的中间质粒pCR2.1-US2,然后将EGFP基因表达盒克隆到此中间质粒,获得转移载体质粒pCR2.1-US2-EGFP;采用磷酸钙共沉淀法,将pCR2.1-EGFP和HVT FC126株基因组DNA共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,经同源重组获得表达EGFP的重组病毒rHVT-EGFP。采用与上述类似的方法和步骤,用基因VII型NDV F基因表达盒替代rHVT-EGFP的EGFP基因表达盒,构建表达NDVF蛋白的重组病毒。以基因VII型NDVDT2014毒株基因组为模板,采用RT-PCR扩增其F基因。将F基因插入至真核表达载体pEASY（?）-M3中,再经PCR扩增含CMV启动子、TK ployA终止子和Flag标签的F基因表达盒。将F基因表达盒克隆到中间质粒pCR2.1-US2,构建转移载体pCR2.1-US2-F。对F基因的跨膜区进行分析,显示F蛋白含有两个跨膜区,分别位于117-139和502-525位氨基酸的位置;以pCR2.1-US2-F为模板,采用重叠延伸PCR的方法分别对两个跨膜区进行缺失,构建缺失跨膜区的转移载体pCR2.1-US2-△F。分别将pCR2.1-US2-F和pCR2.1-US2-△F与rHVT-EGFP基因组DNA共转染CEF,拯救出两株重组病毒rHVT-NDV-VII-F和rHVT-NDV-VII-△F。用有限稀释法对重组病毒进行反复纯化,直至病毒蚀斑在荧光显微镜下观察均不带荧光。通过PCR验证,F基因正确插入到重组病毒基因组。以基因Ⅶ型NDV的阳性血清为一抗,进行间接免疫荧光试验,两株重组病毒均呈阳性反应;以Flag标签蛋白作为一抗,进行Western-blot试验,重组病毒rHVT-NDV-VII-F成功表达了约55kDa和60kDa的目的条带,重组病毒rHVT-NDV-VII-△F成功表达约60kDa的目的条带。两株重组病毒在CEF细胞上的生长特性与HVT FC126株疫苗毒株相似。为了评价重组病毒rHVT-NDV-VII-F和rHVT-NDV-VII-△F的免疫效力,用1日龄SPF鸡进行了动物试验。动物试验分组依次是:rHVT-NDV-VII-F组、rHVT-NDV-VII-△F组、弱毒疫苗组、攻毒对照组、空白对照组,每组各20只鸡。首先对rHVT-NDV-VII-F组和rHVT-NDV-VII-△F组的1日龄鸡只进行免疫接种,颈部皮下注射相应的重组病毒,剂量为5000蚀斑形成单位（PFU）/鸡;弱毒疫苗组则在鸡只7日龄时,接种La Sota疫苗。除空白对照组外,其余各组于鸡只21日龄时攻毒,以滴鼻点眼的方式接种105EID5o/鸡的NDV DT-2014株。攻毒后连续观察14天,统计各实验组的临床症状和死亡率。并于攻毒后第3天,采集各组咽喉、泄殖腔的棉拭样品,提取RNA,以荧光定量PCR的方法检测排毒情况。动物试验结果显示:在攻毒后的第3天,两株重组病毒免疫组的排毒量显着低于攻毒对照组,其中重组病毒rHVT-NDV-VII-F组排毒量最低,其次是重组病毒rHVT-NDV-VII-AF 组。针对 NDV DT-2014 株强毒的攻击,两株重组病毒可使鸡的发病和死亡时间大大推迟,rHVT-NDV-VII-F组的存活率为40%。表明重组病毒rHVT-NDV-VII-F对基因Ⅶ型NDV可提供一定的保护,可望作为预防和控制ND的疫苗候选株。
崔治中,苏帅,罗俊,钱琨,庄国庆,孙爱军,滕蔓[2]（2019）在《鸡马立克病毒的研究进展》文中研究说明马立克病毒（Marek’s disease virus,MDV）是一类可感染鸡诱发急性或亚急性淋巴细胞肉瘤的疱疹病毒。本文在对MDV的经典病毒学及分子生物学研究的早期成果进行概述的基础上,对近十多年来感染性克隆技术用于探索MDV主要蛋白基因的功能、以病毒编码的全部蛋白质为对象的蛋白组学、病毒编码的有调控作用的RNA及基因工程疫苗等方面的研究进展进行综述,并展望MDV进一步的研究方向和内容。
楚电峰[3]（2018）在《表达H9亚型禽流感病毒血凝素的重组火鸡疱疹病毒构建及其安全性与免疫效力试验》文中研究指明H9亚型禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）对鸡的致病性低,仅引起轻微的呼吸道症状和短时间产蛋下降,但混合感染或继发感染其他病原可导致较高的发病率和死亡率。H9亚型禽流感对养鸡业危害较大,免疫接种是防控该病的主要策略之一。目前生产上常用的H9亚型禽流感疫苗为全病毒灭活疫苗,这类疫苗仅能诱导产生高水平的循环抗体,而不能有效地激发细胞免疫和黏膜免疫应答。近年来,以火鸡疱疹病毒（herpesvirus of turkey,HVT）为载体的重组病毒活疫苗已经成为研究热点。一方面,HVT具有较多的复制非必需区可供外源基因插入;另一方面HVT是常用的家禽疫苗,可供1日龄雏鸡免疫或18日龄胚内注射免疫,能够更早地诱导免疫应答。本研究旨在以HVT为载体,构建能稳定表达H9亚型AIV血凝素（HA）的重组病毒活疫苗候选毒株,与现有灭活疫苗组合使用,以提供更加有效的免疫保护。1.rHVT-YBF003株的构建及其遗传稳定性与安全性评价重组病毒构建:对近年分离的21株H9亚型AIV进行HA基因测序和遗传进化分析,发现这些毒株处于h9.4.2.5分支,为目前H9亚型AIV的优势流行毒株。因此,本研究选取其中的YBF003株,用于重组病毒的构建。采用RT-PCR扩增H9亚型AIV YBF003株的HA基因,将HA基因插入到含HVT FC-126疫苗株同源臂和CMV启动子的载体,构建转移载体pFR-H9。将pFR-H9与表达绿色荧光蛋白（EGFP）的重组HVT（rHVT-EGFP）基因组共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,以同源重组的方式将rHVT-EGFP的EGFP基因替换为HA基因表达盒,获得重组病毒rHVT-YBF003株。在CEF单层上反复纯化rHVT-YBF003株,直至所有重组病毒空斑均不带绿色荧光。经PCR鉴定,HA基因表达盒正确插入到HVT基因组;进一步进行Western-blot和IFA鉴定,rHVT-YBF003株能够表达HA蛋白。分别用rHVT-YBF003株和HVTFC-126株感染CEF,两者的生长特性并无显着差异。将rHVT-YBF003株在CEF上连续传20代,再接种于CEF单层,待形成典型空斑后,通过PCR从随机挑选的20个空斑中均能检测到HA基因表达盒;将第20代rHVT-YBF003株接种于CEF单层,通过间接免疫荧光试验（IFA）证明rHVT-YBF003株能够稳定表达H9亚型AIV的HA蛋白。重组病毒的遗传稳定性:1日龄SPF鸡颈部皮下接种rHVT-YBF003株,5.0×103 PFU/只;21日龄时,从血液中分离淋巴细胞,再接种于另一批次1日龄SPF鸡（3.0×106个淋巴细胞/羽份）。如此反复传代6次,经PCR检测传代后的rHVT-YBF003株中均存在HA基因,IFA证明传代后的重组病毒仍能稳定表达H9亚型AIV的HA蛋白。1日龄SPF鸡颈部皮下接种rHVT-YBF003株,5.0×103PFU/羽份;每隔7天采血分离淋巴细胞,再接种于CEF单层,进行病毒分离和计数。结果显示,rHVT-YBF003株在鸡体内的病毒载量不断提高,至9周龄时,病毒载量达到峰值,此后呈下降趋势,直到第20周龄时仍能检测到少量重组病毒存在,说明该重组病毒可在鸡体内维持较长时间。重组病毒的安全性:以5.0X 104PFU/羽份的rHVT-YBF003株接种1日龄SPF鸡,对鸡群进行连续8周的临床观察、生长状况监测,结果显示接种重组病毒的试验鸡精神、采食、饮水均正常,剖检和组织切片检查均未发现病理变化。以5.0×104PFU/头份的rHVT-YBF003株接种4周龄ICR小鼠,接种后ICR小鼠的采食、精神均正常;接种后14天,对小鼠内脏器官检查并称重,显示接种重组病毒对小鼠无不良影响。因此,重组病毒对易感动物和非易感动物均具有良好的安全性。2.rHVT-YBF003株的免疫效力评价对SPF鸡的免疫保护效力试验:试验分为4组,分别为胚内免疫组、1日龄免疫组、灭活疫苗组和空白对照组;分别对18日龄SPF鸡胚胚内注射5.0X 103PFU/羽份的rHVT-YBF003株、1日龄SPF雏鸡皮下注射5.0X 103PFU/羽份的rHVT-YBF003株、14日龄SPF雏鸡肌肉注射H9亚型禽流感病毒灭活疫苗（YBF003株）、1日龄SPF雏鸡皮下注射0.5 mLPBS/只。28日龄时,采血测定各试验组针对H9亚型AIV的HI抗体效价,并以H9亚型AIV YBF003株攻毒（静脉注射1.0X 1 07 5 EID50/羽份）。28日龄时,胚内免疫组和1日龄免疫组的HI抗体效价分别为4.7±0.60和4.5±0.30,胚内免疫组比1日龄免疫组的HI抗体最大提高0.3±0.62个滴度,两组均能提供一定的早期保护;灭活疫苗组的HI抗体效价为6.5±0.75,攻毒保护率为50%;空白对照组的抗体为1.3±0.12,攻毒保护率为0%。对商品鸡的免疫保护效力试验:对商品鸡的分组及处理方式同SPF鸡。另外,增加重组病毒与灭活疫苗联合免疫组,该组于1日龄时颈部皮下注射5.0×103PFU/羽份的rHVT-YBF003株,14日龄时经肌肉注射H9亚型禽流感病毒灭活疫苗（YBF003株）。28日龄时,采血测定各试验组针对H9亚型AIV的HI抗体效价,并以H9亚型AIV YBF003株攻毒（静脉注射1.0×107.5EID50/羽份）。28日龄时,胚内免疫组、1日龄免疫组和灭活疫苗免疫组的HI抗体效价分别为4.3±0.49、4.1 ±0.89和6.2±0.34,攻毒保护率均为50%以上,差异不显着;而联合免疫组的抗体效价为7.8±0.45,攻毒保护率为70%;空白对照组的抗体为1.0±0.74,攻毒保护率为10%。3.重组病毒种子批建立与大规模培养工艺研究培养工艺研究:为提高重组病毒的效价,同时获得规模化生产条件下的重组病毒培养技术参数。我们对采用细胞工厂进行大规模培养的方法进行了研究。结合该病毒的培养特性,分别从宿主细胞的接种密度、种毒接种剂量和收毒时间等方面对培养工艺进行摸索,最终制定了最优的病毒培养技术工艺:即采用十层细胞工厂（总面积为6335 cm2,培养液为1200mL）,CEF密度为2.5×106个/mL时,接种3.0×106PFU的重组病毒,培养72 h,收获感染细胞,按照每个细胞工厂分装50支冻存管的标准进行收获,每支冻存管分装量为1.8mL,其收获的病毒效价可达5.0×106PFU/支以上,即成品疫苗可达5000 PFU/羽份以上,远高于2000 PFU/羽份的国家标准。种子批建立:将所收获的重组病毒分为原始种子、基础种子和生产种子。原始种子包括重组病毒的F1～F6代,基础种子包括F7～F12代,生产种子包括F13～F17代。并在各级种子批中随机选取一个代次的种子进行无菌检验、支原体检验、鉴别检验、安全性检验、免疫原性检验和外源病毒检验。无菌检验和支原体检验中,三个代次种毒的检验结果均为阴性;鉴别检验中,对HVT鉴定部分采用间接免疫荧光试验,结果显示,三个代次种毒形成的病毒空斑均呈现绿色荧光,说明形成的病毒空斑为HVT,对HVT表达的HA蛋白鉴定采用Western-blot方法鉴定,结果显示,三个代次种毒均能表达HA蛋白;安全性检验中,三个代次的种毒接种1日龄SPF鸡,免疫剂量为3.0×104PFU/羽,免疫后观察90天,所有免疫鸡均未观察到临床症状;外源病毒检验中,分别于1日龄和21日龄时,采用滴鼻、点眼（剂量为3.0×104PFU/羽份）和肌肉注射（剂量为3.0×104PFU/羽份）三种途径同时接种重组病毒,42日龄时采集血清,均未检测到外源病毒的抗体。结果显示,三个代次的重组病毒均符合种毒质量标准。综上所述,本研究构建了一株表达H9亚型AIV HA蛋白的重组HVT（rHVT-YBF003株）。在体内和体外传代过程中,rHVT-YBF003株所插入的HA基因均能稳定表达。在安全性评价方面,该重组病毒对易感和非易感动物均不具有致病性。该重组病毒可用于1日龄雏鸡和18日龄鸡胚内的早期免疫,虽然HI抗体低于灭活疫苗,但对H9亚型AIV的保护率等同于灭活疫苗。重组病毒与灭活疫苗联合使用具有协同效应,对H9防控效果更好。本研究还建立了种子批,并制定了符合大规模生产的重组病毒培养工艺,为将来工厂化生产打下了基础。
李凯[4]（2018）在《表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组马立克氏病病毒活载体疫苗研究》文中研究说明鸡马立克氏病（Marek’s disease,MD）和鸡传染性法氏囊病（infectious bursal disease,IBD）是危害我国养禽业健康发展的两种重要的免疫抑制病,其广泛流行给我国养禽业带来了巨大的经济损失。疫苗是控制MD和IBD的主要手段。目前MD主要通过血清1型弱毒疫苗预防。用于预防IBD的疫苗主要是传统活疫苗和灭活疫苗,但传统疫苗不仅易于受到母源抗体的干扰,而且IBD中等毒力活疫苗可以造成一定程度的法氏囊损伤和免疫抑制,因此迫切需要研制更加安全有效的新型IBD疫苗。本研究对我国IBDV超强毒（wIBDV）分离株的遗传变异、抗原性和致病性进行了分析。结果发现,我国wIBDV毒株正在发生持续性进化。与我国早期wIBDV分离株相比,我国2000年后分离的vvIBDV毒株的基因组A、B节段均有一定程度的变异发生;我国vvIBDV毒株与欧洲wIBDV参考毒株的抗原性无显着差异;目前wIBDV毒株的致病性有增强趋势。wIBDV HLJ0504毒株是目前我国的wIBDV流行毒株。鸡马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）弱毒疫苗株是构建重组活载体疫苗的理想载体。为了构建表达IBDV VP2基因的重组MDV活载体疫苗,本研究将MDV血清1型弱毒疫苗814株基因组DNA分段插入Fosmid粘粒,构建了 814株基因组粘粒文库;在此基础上,选取粘粒组合,建立了 MDV 814疫苗株多片段粘粒拯救系统。将eGFP基因表达盒分别插入MDV 814 株基因组不同位点,拯救获得5株稳定表达eGFP的重组病毒。经鉴定,5株重组病毒的复制特性与原疫苗株病毒基本一致;eGFP基因在UL区三个位点的表达水平无显着差异,高于US2位点,US10位点的表达水平最低。将wIBDV HLJ0504株的VP2基因分别插入MDV 814株基因组的UL41、US2、US10位点,获得3株表达VP2基因的重组MDV（r814UL41VP2、r814US2VP2 和 r814US10VP2）。其中,r814US2VP2免疫SPF鸡后,能够对wIBDV和wMDV的攻毒提供完全保护。通过r814US2VP2（命名为rMDV-VP2株）最小免疫剂量试验,确定了该疫苗的使用剂量为2000PFU/羽份。rMDV-VP2疫苗对wIBDV的保护效果与商品化Vaxxitek HVT-IBD疫苗相当,优于IBD中毒力活疫苗;rMDV-VP2疫苗对wMDV的保护效果与商品化MDV血清1型弱毒疫苗相当,显着优于Vaxxitek HVT-IBD疫苗。rMDV-VP2疫苗对不同的wIBDV分离株都能提供高效免疫保护,可以用于不同品种的商品蛋鸡和地方品种鸡。rMDV-VP2疫苗的免疫保护可以覆盖IBDV的易感期（3-8周龄）,并具有至少6个月的抗体持续期。rMDV-VP2疫苗对靶动物和非靶动物均是安全的;rMDV-VP2疫苗的水平传播能力极低,无垂直传播现象;疫苗株病毒免疫鸡后的排毒水平极低,在使用环境中不存在该疫苗株病毒及其病毒DNA的残留。综上所述,rMDV-VP2疫苗安全有效,可以作为一种IBD-MD重组二联活疫苗用于IBD和MD的预防。
陈洋宙[5]（2018）在《鸡马立克氏病病毒Meq蛋白特异性单克隆抗体研制及其初步应用》文中提出1.抗鸡马立克氏病病毒Meq蛋白特异性单克隆抗体研制本研究根据NCBI中己发表的MDV-RB2B-Meq序列,设计合成一条特异性引物,用聚合酶链式反应（PCR）方法扩增出特异性的Meq片段。利用EcoRI和XbaI两种限制性内切酶对Meq基因和Pcold-TF空载体进行酶切,将两者酶切产物进行连接,转化至BL21大肠杆菌,筛出阳性表达菌,获得重组质粒Pcold-TF-Meq。酶切分析、SDS-PAGE和Western blotting鉴定的结果表明:构建的Pcold-TF原核表达载体正确,基因序列分析结果与预期完全一致。转染BL21原核表达细菌通过大量诱导,并裂解细菌,结果在上清中获得大量表达的MDV-RB2B-Meq重组蛋白。经SDS-PAGE凝胶电泳和Wenstern Blot鉴定,结果在77 Kda分子量有一特异性条带。切取该特异性蛋白条带作为免疫原,对Balb/cc小鼠进行4次免疫,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0进行细胞融合,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光（IFA）检测杂交瘤细胞上清,结果成功获得了一株对Meq蛋白具有特异性的杂交瘤细胞,命名为MDV-5F4。经2次亚克隆,杂交瘤细胞达到100%分泌抗MDV-Meq蛋白特异性抗体。酶联免疫吸附实验（ELISA）对MDV-5F4进行亚类鉴定,结果表明该单抗亚类为IgM。该单抗的成功研制,为MDV性肿瘤鉴别诊断提供了条件。2.抗MDV-Meq蛋白单克隆抗体的初步应用家禽肿瘤病主要有马立克病,禽白血病,网状内皮细胞增生症以及不明原因的其他肿瘤性疾病。为了在临床上快速鉴别肿瘤的病原,本研究利用自行研制的抗MDV-Meq的特异性单克隆抗体MDV-5F4、实验室保存的抗MDV gB蛋白的单克隆抗体MDV-BD8、抗禽白血病病毒特异性单克隆抗体ALV-5D3和抗网状内皮细胞增生症病毒的单克隆抗体REV-6C12,建立了快速检测MDV、ALV和REV等三种病原性肿瘤快速鉴别的免疫组织化学检测方法和间接免疫荧光法（IFA）。研究结果表明,该方法可以用于临床马立克氏病病毒（MDV）和禽白血病病毒（ALSV）强毒感染鸡的肿瘤组织快速的检测,对于3种肿瘤疾病的鉴定具有较好的应用前景。
颜文光,屠颉,刘云迎,刘有昌,何叶峰,刘长清,周煜,崔治中,何海蓉[6]（2018）在《鸡马立克氏病meq基因缺失疫苗（SC9-1株）的临床应用效果比较研究》文中研究指明鸡马立克氏病基因缺失活疫苗（SC9-1株）的临床试验分别在3个鸡场进行,试验鸡分别为1日龄雪山黄鸡20 600只、1日龄京红1号蛋鸡17 000只、1日龄北京油鸡9 732只。临床安全性试验观察期内,免疫鸡群的精神状态、采食、饮水情况、生长性能与对照组无异。临床免疫效力试验期间,将免疫SC9-1鸡群与免疫CVI988/Rispens（市售）鸡群进行对比,SC9-1鸡群的死淘率分别为2.7%与0.4%,均低于CVI988/Rispens免疫鸡群的3.7%与1.2%（P>0.05）。另外分别将免疫SC9-1的鸡群与免疫CVI988/Rispens的鸡群在6日龄时攻击马立克超强毒Md5（1 000 pfu/只）,结果显示SC9-1株疫苗攻毒保护率分别为35/35与34/35,显着高于CVI988/Rispens株疫苗的25/35与27/35（P<0.05）。以上表明SC9-1株疫苗安全性良好,免疫效力较好,可能是一株理想的马立克氏病疫苗。
张言坤[7]（2018）在《鸡传染性贫血病毒感染对鸡马立克病疫苗免疫效力的影响》文中进行了进一步梳理鸡马立克病（Marek’s Disease,MD）是由鸡马立克病病毒（Marek’s Disease Virus,MDV）引起的一种常见的具有高度传染性的淋巴组织增生性疾病。目前主要靠疫苗免疫预防,但是近年来,鸡群虽然接种了鸡马立克病疫苗CVI988/Rispens株或814株,但是马立克病仍有发生。研究发现发病鸡群常伴随鸡传染性贫血病毒（Chicken Infections Anemia Virus,CIAV）、禽网状内皮组织增殖症病毒（Reticuloendosiliosis Virus,REV）等免疫抑制病毒感染的现象,免疫抑制病能导致机体生长迟缓等影响,从而给家禽养殖业造成巨大的经济损失。其中CIAV感染对MDV爆发的影响越来越引起人们的重视,CIAV主要引起鸡的再生障碍贫血以及免疫抑制,可以水平传播。早在19世纪80年代就发现MD发病鸡中感染CIAV,并且CIAV可以在鸡MDV肿瘤细胞系MDCC-MSB1细胞中传代并引起细胞病变。本研究利用SPF鸡人工模拟CIAV感染对MD疫苗免疫抑制的作用,从不同的角度揭示了CIAV对MD疫苗的免疫效果的影响,为鸡马立克病的预防提供科学的理论依据。1.感染CIAV SD15株显着降低马立克病疫苗对马立克病病毒的免疫保护力将200只1日龄的SPF鸡随机分为5组,饲养在动物房的负压空气过滤隔离罩内。1日龄时,第1、2、3、4组每组鸡均以正常剂量腹腔注射MDV商品化疫苗CVI988/Rispens,同时,第2和3组每组以400 EID50/只的剂量口服CIAV SD15株。5日龄第3、4、5组每组鸡均以2000 PFU/只的剂量腹腔注射MDV超强毒GX0101。整个试验为期90天,每天观察并记录鸡的病变及死亡情况。结果显示马立克病疫苗CVI988/Ripens能够对在5日龄感染2000 PFU GX0101的SPF鸡提供较好的免疫保护,CVI988/Rispens能够降低GX0101感染鸡的致病性,但是CIAV的感染增加了CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒鸡的死亡率,第1、2、3、4、5组鸡的死亡率分别为0%、14.3%、42.9%、5.71%以及31.4%。CIAV的感染降低了MD疫苗的免疫效果,增强MDV野毒的致病性。MDV GX0101株攻毒后第0、5、9、16、23、30、37、44天称量各组鸡的体重。10日龄时免疫禽流感、新城疫灭活疫苗,免疫后的第21、28、35天检测在鸡体诱导产生的抗体水平,在GX0101攻毒后第9天和第16天每组随机选取五只鸡进行剖检,采集脾脏、法氏囊和胸腺测量免疫器官指数。结果表明,相比CVI988/Rispens免疫组,CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒组,不同时间体重差异不显着（P>0.05）,而CVI988/Rispens免疫GX0101、CIAV攻毒组均显着降低（P<0.05）。CIAV的感染显着抑制鸡体AIV-H9、NDV灭活疫苗抗体的产生,相比CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒组,CVI988/Rispens免疫和GX0101、CIAV感染组抗体水平均显着降低（P<0.05）,CIAV感染诱发强烈的免疫抑制,引起胸腺、法氏囊的萎缩以及脾脏的肿大。2.感染CIAV SD15株显着降低马立克病疫苗对马立克病病毒复制的抑制作用MDV超强毒GX0101是从中国分离的含有REV-LTR片段的重组MDV,第3、4、5组在GX0101攻毒后5、9、16、23、30天,每组各随机选取6只鸡采集抗凝血分离淋巴细胞提取DNA,利用本实验室建立的荧光定量PCR方法检测GX0101的拷贝数。结果显示CVI988/Ripens能够抑制GX0101在鸡体内的复制水平,GX0101感染组在攻毒后第23天淋巴细胞中GX0101病毒拷贝数达到高峰,CVI988/Rispens免疫GX0101感染组攻毒后第16天淋巴细胞中GX0101拷贝数达到高峰,CVI988/Rispens免疫GX0101、CIAV感染组攻毒后淋巴细胞GX0101拷贝数持续增加至30天。在感染后不同时间检测GX0101拷贝数,GX0101感染组均显着高于CVI988/Rispens免疫GX0101、CIAV感染组（P<0.05）,高于CVI988/Rispens免疫GX0101感染组。第3、4组在GX0101攻毒后0、5、9、16、23天,每组随机选取6只鸡采集抗凝血分离淋巴细胞提取RNA,针对性的选择了参与炎症反应的IL-6,具有免疫调节抑制作用的IL-18,具有抗病毒活性的IFN-γ,从细胞转录水平揭示感染CIAV影响MD疫苗CVI988/Rispens对MDV的免疫效果。IL-6,IL-18和IFN-γ的mRNA表达在GX0101攻毒5天后显着增加,然后再降低。MD疫苗的保护效力下降可能与后期的IL-18和IFN-γmRNA水平降低相关。当与CIAV感染时,对鸡IL-6的缺乏也可能导致MDV滴度增加和对MD的疫苗免疫性降低。CIAV感染明显降低了MD疫苗的免疫效果,增强MDV野毒的复制水平。CIAV或者其它免疫抑制病的感染可能是近年来中国MD频发的一个原因。
韩妮[8]（2018）在《先天感染ALV-J对鸡马立克病疫苗免疫保护效果的影响及不同马立克病疫苗的分子鉴别》文中认为鸡马立克病（Marek’s disease,MD）是由鸡马立克病病毒（Marek’s disease virus,MDV）引起的一种鸡上最常见的T淋巴细胞增生性疾病。疫苗免疫是防控MD的主要措施。目前,我国使用最广泛的是CVI988/Rispens疫苗。然而近年来,有的鸡群免疫CVI988/Rispens疫苗后仍有马立克病的发生,影响了我国养禽业的健康发展,造成经济损失。禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）是一种可以引起多种肿瘤性疾病的免疫抑制性病原,它主要通过垂直感染的方式进行传播。流行病学调查显示,MDV感染鸡群常伴发ALV等免疫抑制性病原的共感染,ALV的先天感染有可能是造成免疫CVI988/Rispens疫苗鸡群仍发生MD的原因之一。为证实这一推论,本文通过动物试验人工模拟先天感染J亚群禽白血病病毒（ALV-J）探究对鸡马立克病疫苗免疫保护效果的影响。此外,针对本实验室研发的新型MD疫苗SC9-1株与市场其他疫苗株尚无特异性鉴别方法的问题,建立了区别SC9-1株与其他株MD疫苗的分子鉴别方法。1.先天感染ALV-J对马立克病疫苗免疫保护效果的影响为研究先天感染ALV-J对CVI988/Rispens疫苗免疫保护效果的影响,将200枚SPF鸡胚分为5组,每组40枚。第1、2组为先天感染ALV-J组,在6胚龄时通过卵黄囊途径接种500 TCID500 ALV-J NX0101株。出壳后,第1、2、3、5组鸡颈部皮下免疫CVI988/Rispens疫苗,6日龄对第2、3、4组鸡均以2000 PFU/只的剂量腹腔注射MDV超强毒GX0101。试验期间,观察并记录各组鸡的病变及死亡情况,统计死亡率和肿瘤发生率,对疑似马立克病特有的病变脏器做病理切片;MDV GX0101攻毒后第1、2、3、4、5、6周称量各组鸡的体重;所有鸡10日龄免疫禽流感、新城疫灭活苗,免疫后第3、4、5周检测相应抗体水平;在GX0101攻毒后第1周每组随机选取5只鸡进行剖检,选取胸腺和法氏囊测定免疫器官指数;第2、3、4组在GX0101攻毒后5、10、14、21、28天,每组各随机选取6只鸡采集抗凝血分离淋巴细胞提取DNA,利用荧光定量PCR方法检测GX0101的拷贝数。研究结果表明,先天感染ALV-J增加了CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒鸡的死亡率和肿瘤率,2组死亡鸡中一只鸡肝脏出现肿瘤,1、2、3、4、5各组鸡的死亡率分别为:5.7%、20%、2.9%、37.1%、0%;先天感染ALV-J、CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒组鸡的体重与CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒组鸡相比,体重显着降低（P<0.05）,引起胸腺和法氏囊的萎缩,显着抑制AIV-H9、NDV抗体的产生,GX0101的拷贝数在第14、21、28天显着高于CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒组。因此,先天感染ALV-J降低了CVI988/Rispens疫苗的免疫保护效果,引起感染鸡的免疫抑制,增强了GX0101在鸡体内的复制水平以及致病性,这或许表明先天感染ALV是造成免疫CVI988/Rispens疫苗后鸡群仍发生MD的原因之一。2.不同马立克病疫苗分子鉴别方法的建立为了对马立克病病毒meq基因缺失疫苗株SC9-1与商品化MD疫苗CVI988/Rispens株、814株和HVT Fc-126株进行分子鉴别,根据疫苗株SC9-1与其它MD疫苗株的基因组差异,分别针对I型MDV meq基因以及SC9-1基因组中的禽网状内皮组织增殖症病毒-长末端重复序列（REV-LTR）插入片段,设计三对PCR扩增引物,同时合成针对meq基因和REV-LTR片段的地高辛标记探针,通过PCR扩增和核酸斑点杂交方法区分SC9-1株与其他疫苗株。结果表明,使用针对meq基因的引物F1/R1进行PCR扩增,SC9-1株、CVI988/Rispens株、814株分别扩增出184bp、1297bp、1297bp目的片段,HVT Fc-126株没有条带;使用针对meq基因的引物F2/R2进行PCR扩增,CVI988/Rispens株、814株均扩增出746bp目的片段,SC9-1株、HVT Fc-126株均没有条带;使用针对REV-LTR片段设计的引物F3/R3进行PCR扩增,SC9-1株扩增出512bp目的片段,CVI988/Rispens株、814株、HVT Fc-126株均没有条带。同时,使用针对meq基因的探针进行核酸斑点杂交,CVI988/Rispens株、814株均显示阳性结果,SC9-1株、HVT Fc-126株均为阴性;使用针对REV-LTR的探针进行核酸斑点杂交,SC9-1株显示阳性结果,CVI988/Rispens株、814株、HVT Fc-126株均为阴性。因此,利用本研究设计的特异性PCR引物以及探针,通过PCR扩增和核酸斑点杂交方法可以有效区分SC9-1与市场其他MD疫苗株。
周忠文[9]（2018）在《表达REV env基因的重组马立克病毒的构建及生物学活性研究》文中研究指明禽网状内皮组织增生病（Reticuloendotheliosis,RE）、马立克病（Marek’s disease,MD）是危害我国养禽业健康发展的两大重要免疫抑制性疫病。前期对我省乃至全国范围内鸡群RE的检测,表明RE在鸡群的流行越来越普遍,然而,目前尚没有有效的疫苗对RE进行防控。苏帅等构建了马立克病毒（Marek’s disease virus,MDV）致肿瘤基因meq的缺失疫苗SC9-1,能够为免疫鸡提供100%的免疫保护,显着高于MD商品化疫苗CVI988/Rispens的免疫保护（保护率80-90%）。本研究利用SC9-1构建了表达禽网状内皮增生病病毒（Reticuloendotheliosi s virus,REV）env基因的重组MDV,并对其生物学活性进行了研究。1、构建表达REV env的重组MDV SC9-env,并对其致病性、免疫保护效果进行了研究以REV SNV株DNA为模板,PCR扩增其env基因,克隆进真核表达载体pcDNA3.1（+）;以其为模板,PCR扩增整个REV env基因真核表达盒与卡那霉素抗性基因分别克隆进pUC18载体;pUC18-env-kana为模板,利用含有MDV SC9-1株meq基因位点两侧同源臂的引物经PCR扩增REV env真核表达盒以及卡那霉素抗性基因,利用同源重组插入SC9-1的meq位点,分别筛选出阳性后,最终利用阿拉伯糖诱导表达flp重组酶,敲除卡那霉素抗性基因,阳性重组质粒命名为SC9-env BAC。选阳性重组质粒SC9-env BAC,转染CEF细胞,拯救重组MDV,利用MDV单抗H19以及REV单抗11B118经间接免疫荧光试验鉴定阳性,命名为SC9-env,分析在CEF细胞上的复制水平,利用动物实验评价SC9-env对SPF鸡的致病性以及SC9-env对SPF鸡感染MDV、REV的免疫保护效果。SC9-env接种SPF鸡没有引起死亡以及肿瘤的发生;SC9-env对感染MDV rMd5的SPF鸡能够提供92%的免疫保护,与SC9-1差异不显着;SC9-env能够降低SNV感染SPF鸡引起的体重减轻以及灭活苗抗体水平的下降。2、利用同源重组技术构建了表达REV env、gp90的不同重组MDV以REV SNV株DNA为模板,PCR扩增其env基因、gp90基因,克隆进真核表达载体pCAGGS;以其为模板,PCR扩增整个REV env基因真核表达盒、REV gp90基因真核表达盒并与卡那霉素抗性基因分别克隆进pUC18载体。以pUC18-env-kana为模板,利用含有MDV SC9-1株US10基因位点两侧同源臂的引物经PCR扩增REV env真核表达盒以及卡那霉素抗性基因;以pUC18-gp90-kana为模板,利用含有MDV SC9-1株US10基因位点两侧同源臂的引物经PCR扩增REV gp90真核表达盒以及卡那霉素抗性基因,利用同源重组插入SC9-1的US10位点;以pUC18-gp90-kana为模板,利用含有MDV SC9-1株meq基因位点两侧同源臂的引物经PCR扩增REV gp90真核表达盒以及卡那霉素抗性基因,利用同源重组插入SC9-1的meq位点。分别筛选出阳性后,最终利用阿拉伯糖诱导表达flp重组酶,敲除卡那霉素抗性基因,阳性重组质粒命名为SC9-gp90-2 BAC、SC9-env-3 BAC、SC9-gp90-4 BAC;分别提取SC9-gp90-2 BAC、SC9-env-3 BAC、SC9-gp90-4 BAC质粒,转染CEF细胞,拯救三种种重组MDV,利用MDV单抗H19以及REV单抗11B118经间接免疫荧光试验鉴定阳性,命名为SC9-gp90-2、SC9-env-3、SC9-gp90-4。本研究为进一步构建表达REV env基因的重组MDV并评价其免疫保护效果奠定基础。结果表明,利用同源重组技术构建的重组MDV SC9-env、SC9-env-3能够稳定表达REV env蛋白,SC9-gp90-2、SC9-gp90-4能够稳定表达REV gp90蛋白。重组MDV SC9-env在CEF细胞上的复制水平与亲本病毒SC9-1相似。3、不同启动子的真核重组质粒pcDNA-env、pCAGGS-env、gB-env在CEF细胞上REV env表达效果的比较比较带有不同启动子的重组质粒pcDNA-env、pCAGGS-env、gB-env在细胞上表达效果。结果表明β-actin启动子活性强于cmv启动子,而且cmv启动子活性强于gB启动子活性。重组gp90蛋白免疫鸡可诱导鸡产生特异性抗体,未发现不良反应,说明重组亚单位疫苗对雏鸡和种鸡是安全可靠的。结果表明,gp90蛋白具有良好的抗原性,RE亚单位疫苗可以诱导高水平的抗体反应,对雏鸡和种鸡均具有良好的免疫效力。本研究构建能够表达禽网状内皮组织增生病病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）env基因或gp90基因的重组MDV并对其生物学活性进行研究。本研究以前期构建的血清I型MDV meq基因缺失株SC9-1为载体,利用同源重组技术将REV env、gp90基因插入SC9-1的基因组,构建重组MDV,SC9-1为载体能够稳定表达外源基因,构建的重组MDV SC9-env对SPF鸡没有致病性,本研究对SPF鸡感染MDV、REV均具有一定的免疫保护效果为其它重组MDV的构建提供思路,也为REV的免疫防控奠定基础。
杨佳颖[10]（2018）在《安全性,免疫效力双重把控——鸡马立克氏病活疫苗（CVI988/Rispens株）》文中进行了进一步梳理鸡马立克病（Marek`s disease,MD）由疱疹病毒科的马立克氏病病毒（MDV）引起,MDV具有与宿主细胞结合的能力。鸡是MDV的自然宿主,其次火鸡、野鸡、珍珠鸡等均可自然感染。鸡MDV不易被控制是由于MDV感染鸡只会终生排毒,体内发育成熟后（23周）的MDV会随着髓羽根部脱落的皮屑在自然的环境中广泛传播,积存于孵化室、
二、鸡马立克氏病CVI988/Rispens疫苗免疫效力试验（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、鸡马立克氏病CVI988/Rispens疫苗免疫效力试验（论文提纲范文）
（1）表达基因Ⅶ型新城疫病毒融合蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗株构建及其免疫效力试验（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 NDV的病原学 |
| 1.1 NDV的分类与形态结构 |
| 1.2 NDV的理化特性 |
| 1.3 NDV的增殖特性 |
| 1.4 NDV的生物学活性 |
| 1.4.1 血凝活性 |
| 1.4.2 神经氨酸酶活性 |
| 1.4.3 细胞融合与溶血活性 |
| 1.4.4 抗肿瘤的作用 |
| 1.5 NDV的致病性 |
| 2 F蛋白的结构及功能 |
| 3 NDV疫苗的研究进展 |
| 3.1 活疫苗 |
| 3.2 灭活疫苗 |
| 3.3 基因工程疫苗 |
| 3.3.1 亚单位疫苗 |
| 3.3.2 重组活载体疫苗 |
| 4 新城疫的流行病学 |
| 第二章 表达基因Ⅶ型新城疫病毒融合蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗株构建及其免疫效力试验 |
| 1 材料 |
| 1.1 载体和菌株 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 重组病毒rHVT-EGFP的纯化 |
| 2.1.1 rHVT-EGFP重组病毒的构建 |
| 2.1.2 重组病毒rHVT-EGFP的纯化与扩大培养 |
| 2.1.3 重组病毒rHVT-EGFP的基因组的提取 |
| 2.1.4 重组病毒rHVT-EGFP的转染 |
| 2.2 新城疫病毒株(DT-2014)F基因的克隆与鉴定 |
| 2.2.1 引物设计 |
| 2.2.2 病毒RNA的提取 |
| 2.2.3 RT-PCR扩增NDV F基因 |
| 2.2.4 中间质粒pM3-F的构建 |
| 2.3 转移载体pCR2.1-US2-F和pCR-US2-AF的构建 |
| 2.3.1 引物设计 |
| 2.3.2 F基因表达盒的PCR扩增 |
| 2.3.3 中间质粒pCM V-F的构建 |
| 2.3.4 转移载体pCR-US2-F的构建 |
| 2.3.5 转移载体pCR-US2-△F的构建 |
| 2.4 转移载体pCR2.1-US2-F和pCR2.1-US2-AF的鉴定 |
| 2.4.1 酶切鉴定 |
| 2.4.2 Western-blot试验鉴定 |
| 2.4.3 间接免疫荧光试验(IFA)鉴定 |
| 2.5 重组病毒rHVT-NDV-VII-F和rHVT-NDV-VII-AF的拯救与纯化 |
| 2.5.1 转移载体的线性化 |
| 2.5.2 重组病毒rHVT-EGFP的提取 |
| 2.5.3 重组病毒的拯救 |
| 2.6 重组病毒rHVT-NDV-VII-F和rHVT-NDV-VII-AF的鉴定 |
| 2.6.1 PCR鉴定重组病毒 |
| 2.6.2 间接免疫荧光试验(IFA)鉴定重组病毒F蛋白表达 |
| 2.6.3 Western-blot试验鉴定重组病毒F蛋白的表达 |
| 2.6.4 重组病毒的效价测定试验 |
| 2.6.5 重组病毒在CEF上的生长特性 |
| 2.7 重组病毒针对NDV的免疫保护评价 |
| 2.7.1 重组病毒的免疫保护试验 |
| 2.7.2 排毒检测 |
| 2.7.3 不同试验组在攻毒后的生存曲线 |
| 3 结果 |
| 3.1 重组病毒rHVT-EGFP的纯化 |
| 3.2 真核表达载体pCR2.1-US2-F的构建 |
| 3.2.1 F基因的克隆鉴定 |
| 3.2.2 F基因表达盒的扩增 |
| 3.2.3 转移载体的酶切鉴定 |
| 3.2.4 转移载体Western-blot试验鉴定 |
| 3.2.5 转移载体间接免疫荧光(IFA)试验鉴定 |
| 3.3 重组病毒rHVT-NDV-VII-F和rHVT-NDV-VII-AF的拯救与鉴定 |
| 3.3.1 重组病毒的拯救 |
| 3.3.2 PCR鉴定重组病毒的F基因 |
| 3.3.3 PCR鉴定重组病毒F基因的表达盒 |
| 3.3.4 IFA试验鉴定重组病毒F蛋白的表达 |
| 3.3.5 Western-blot鉴定重组病毒F蛋白的表达 |
| 3.3.6 重组病毒的效价 |
| 3.3.7 重组病毒的生长曲线 |
| 3.4 重组病毒对NDV强毒的免疫保护试验 |
| 3.4.1 绝对荧光定量PCR检测排毒 |
| 3.4.2 不同试验组在攻毒后的生存曲线和保护率 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）鸡马立克病毒的研究进展（论文提纲范文）
| 1 MDV基因组早期研究概述 |
| 2 MDV基因组感染性克隆的构建及其应用进展 |
| 2.1 以粘粒为载体系统的MDV感染性克隆的构建及相关基因功能研究 |
| 2.2 以BAC为载体系统的MDV感染性克隆的构建及相关基因功能研究 |
| 2.3 BAC感染性克隆技术显着推进了不同毒株MDV全基因组测序 |
| 2.4 MDV感染性克隆技术对其它基因功能研究的进展 |
| 3 MDV的蛋白质组学 |
| 3.1 应用细菌或酵母双杂交系统对MDV蛋白组学的研究 |
| 3.2 应用非凝胶的“鸟枪”蛋白质组学对MDV的分析研究 |
| 3.3 强阳离子交换色谱和微毛细管反相液相色谱-串联质谱的应用 |
| 3.4 二维蛋白电泳和差异凝胶电泳在MDV蛋白组学研究上的应用 |
| 4 MDV基因组编码的有调控作用的RNA |
| 4.1 关于有调控作用的非编码RNA |
| 4.2 不同血清型编码MDV的mi RNA |
| 4.3 与致病性MDV1相关的mi RNA功能 |
| 5 MDV基因工程疫苗研究进展简介 |
| 5.1 以禽痘病毒为载体表达MDV基因的基因工程疫苗 |
| 5.2 通过敲除特定致病基因构建MDV基因工程疫苗候选株 |
| 5.2.1 pp38基因的敲除 |
| 5.2.2 vIL8基因的敲除 |
| 5.2.3 vTR基因的敲除 |
| 5.2.4 meq基因的敲除 |
| 5.3 敲除meq基因的Md5Δmeq和SC9-1具有比CVI988/Rispens更好的免疫效果 |
| 5.4 人工插入REV-LTR序列的CVI988/Rispens |
| 5.5 以MDV为疫苗载体表达其它病毒的免疫原性基因 |
| 5.6 利用CRISPR/Cas9技术构建重组MDV疫苗 |
| 6 MDV研究的期待和展望 |
（3）表达H9亚型禽流感病毒血凝素的重组火鸡疱疹病毒构建及其安全性与免疫效力试验（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 H9亚型禽流感病毒遗传进化与疫苗研究进展 |
| 1 禽流感病毒的基因组特征 |
| 2 H9亚型AIV的基因演化与变异 |
| 3 H9亚型AIV疫苗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二章 文献综述 以火鸡疱疹病毒(HVT)为载体的重组疫苗研究进展 |
| 1 HVT的特点 |
| 2 HVT的基因结构 |
| 3 HVT载体构建的方法 |
| 4 HVT作为载体的应用 |
| 5 重组HVT疫苗存在的问题 |
| 参考文献 |
| 第三章 表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组火鸡疱疹病毒构建和安全性评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 重组病毒的免疫效力评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 重组病毒rHVT-YBF003培养工艺研究与种子批建立 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（4）表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组马立克氏病病毒活载体疫苗研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 鸡传染性法氏囊病 |
| 1.1.1 概述 |
| 1.1.2 我国vvIBDV的流行趋势 |
| 1.1.3 IBDV的基因组和编码蛋白 |
| 1.1.4 我国IBD防控情况 |
| 1.2 马立克氏病 |
| 1.2.1 概述 |
| 1.2.2 MDV的毒力进化及流行情况 |
| 1.2.3 MDV的基因组结构 |
| 1.2.4 我国MD防控情况 |
| 1.3 重组MDV活载体疫苗研究进展 |
| 1.4 本研究的目的及意义 |
| 第二章 我国vvIBDV流行毒株的遗传变异、抗原性和致病性分析 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 病毒及细胞 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 IBDV分离株的遗传进化分析 |
| 2.1.4 IBDV分离株的抗原性分析 |
| 2.1.5 IBDV分离株的鸡胚半数感染量测定 |
| 2.1.6 IBDV分离株的致病性分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 我国vvIBDV分离株的遗传进化分析 |
| 2.2.2 我国vvIBDV分离株的抗原性分析 |
| 2.2.3 我国vvIBDV分离株的致病性分析 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 MDV多片段Fosmid粘粒拯救系统的建立 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 病毒及细胞 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 |
| 3.1.3 MDV培养及病毒基因组的提取 |
| 3.1.4 MDV基因组DNA的末端修饰 |
| 3.1.5 连接和包装 |
| 3.1.6 重组粘粒的鉴定和测序 |
| 3.1.7 亲本疫苗株病毒的拯救 |
| 3.1.8 拯救病毒的鉴定 |
| 3.1.9 拯救毒rMDV和原MDV疫苗株病毒生长曲线的测定 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 MDV病毒基因组Fosmid文库的构建 |
| 3.2.2 用于病毒拯救的重组粘粒的选择 |
| 3.2.3 拯救毒rMDV的鉴定 |
| 3.2.4 拯救毒rMDV与原MDV疫苗株病毒生长曲线的比较 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 MDV基因组外源基因插入位点的筛选 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 病毒及细胞 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 |
| 4.1.3 带有Kan-ccdB抗性基因表达框架的重组突变粘粒的构建 |
| 4.1.4 pENTR1-eGFP的构建 |
| 4.1.5 含有eGFP表达框架的重组突变粘粒的构建 |
| 4.1.6 重组病毒的拯救 |
| 4.1.7 重组病毒的鉴定 |
| 4.1.8 重组病毒的eGFP表达情况 |
| 4.1.9 重组病毒的生长曲线滴定 |
| 4.1.10 重组病毒的遗传稳定性检测 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 重组病毒的拯救 |
| 4.2.2 重组病毒的鉴定 |
| 4.2.3 重组病毒的eGFP表达水平的比较 |
| 4.2.4 重组病毒体外复制特性 |
| 4.2.5 重组病毒的遗传稳定性 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 表达IBDV VP2基因的重组MDV的构建及鉴定 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 病毒及细胞 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 |
| 5.1.3 pCAGGS-VP2表达质粒的构建 |
| 5.1.4 VP2入门质粒pENT1-VP2的构建 |
| 5.1.5 含有VP2表达框架的重组突变粘粒的构建 |
| 5.1.6 重组病毒的拯救 |
| 5.1.7 重组病毒的鉴定 |
| 5.1.8 重组病毒目的基因VP2表达情况 |
| 5.1.9 重组病毒的遗传稳定性 |
| 5.1.10 重组病毒的复制特性 |
| 5.1.11 重组病毒对vvIBDV的免疫保护试验 |
| 5.1.12 重组病毒对vvMDV的免疫保护试验 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 插入VP2基因的重组粘粒的构建 |
| 5.2.2 重组病毒的鉴定 |
| 5.2.3 目的基因VP2表达情况 |
| 5.2.4 重组病毒的遗传稳定性 |
| 5.2.5 重组病毒的复制特性 |
| 5.2.6 重组病毒免疫SPF鸡后IBDV抗体滴度的检测 |
| 5.2.7 重组病毒对vvIBDV攻毒的免疫保护效果 |
| 5.2.8 重组病毒对vvMDV攻毒的免疫保护效果 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 表达IBDV VP2基因的重组MDV活载体疫苗的免疫效力评价 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 病毒及细胞 |
| 6.1.2 主要试剂及试验用鸡 |
| 6.1.3 rMDV-VP2疫苗最小免疫剂量的确定 |
| 6.1.4 rMDV-VP2疫苗的效力试验及与商品化疫苗的比较 |
| 6.1.5 rMDV-VP2疫苗对不同vvIBDV分离株的交叉保护试验 |
| 6.1.6 母源抗体对rMDV-VP2疫苗免疫效果的影响 |
| 6.1.7 rMDV-VP2疫苗免疫持续期试验 |
| 6.1.8 rMDV-VP2疫苗对不同品种商品蛋鸡的免疫效力试验 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 rMDV-VP2疫苗最小免疫剂量的确定 |
| 6.2.2 rMDV-VP2疫苗效力试验及与IBD商品化疫苗的比较 |
| 6.2.3 rMDV-VP2疫苗对不同vvIBDV分离株的交叉保护试验 |
| 6.2.4 rMDV-VP2疫苗的母源抗体干扰试验 |
| 6.2.5 rMDV-VP2疫苗免疫持续期试验 |
| 6.2.6 rMDV-VP2疫苗对不同品种商品蛋鸡的免疫效力试验 |
| 6.3 讨论 |
| 第七章 表达IBDV VP2基因的重组MDV活载体疫苗的安全性评价 |
| 7.1 材料和方法 |
| 7.1.1 病毒及细胞 |
| 7.1.2 实验动物 |
| 7.1.3 主要试剂 |
| 7.1.4 主要检测方法 |
| 7.1.5 rMDV-VP2疫苗单剂量接种的安全性试验 |
| 7.1.6 rMDV-VP2疫苗单剂量重复接种的安全性试验 |
| 7.1.7 rMDV-VP2疫苗大剂量接种的安全性试验 |
| 7.1.8 rMDV-VP2疫苗用于非靶动物后的临床反应 |
| 7.1.9 rMDV-VP2疫苗在黑龙江省的环境释放试验 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 rMDV-VP2疫苗单剂量接种的安全性试验 |
| 7.2.2 rMDV-VP2疫苗单剂量重复接种对鸡的安全性分析 |
| 7.2.3 rMDV-VP2疫苗大剂量接种对鸡的安全性分析 |
| 7.2.4 rMDV-VP2疫苗接种非靶动物小鼠后的临床反应 |
| 7.2.5 rMDV-VP2疫苗的水平传播能力 |
| 7.2.6 rMDV-VP2疫苗的垂直传播能力 |
| 7.2.7 rMDV-VP2疫苗在鸡体内的存留情况 |
| 7.2.8 rMDV-VP2疫苗免疫鸡后的排毒情况 |
| 7.2.9 rMDV-VP2疫苗在应用环境中的存活能力 |
| 7.3 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 博士后期间其他工作内容 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 博士后期间论文发表情况 |
（5）鸡马立克氏病病毒Meq蛋白特异性单克隆抗体研制及其初步应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号缩写 |
| 文献综述 |
| 1. 概述 |
| 2. 马立克病毒的概况 |
| 2.1 马立克病毒的分类地位 |
| 2.2 马立克病毒的形态和理化特性 |
| 2.3 病毒的基因组结构 |
| 2.4 基因组编码的蛋白及其功能 |
| 3. 马立克病的概述 |
| 3.1 流行病学 |
| 3.2 临床症状 |
| 4. 马立克氏病的实验室诊断 |
| 4.1 病毒的分离培养 |
| 4.2 病毒抗原的检测 |
| 4.3 聚合酶链反应(PCR)技术 |
| 4.4 DNA探针技术 |
| 5. 禽马立克氏病的预防与控制 |
| 6. MEQ基因研究进展 |
| 7. 免疫组织化学(IHC)概述 |
| 研究目的和意义 |
| 参考文献 |
| 研究内容一 鸡马立克氏病病毒MEQ蛋白特异性单克隆抗体研制 |
| 1. 材料 |
| 1.1 病毒、细胞 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器及耗材 |
| 2. 方法 |
| 2.1 CEF的制备 |
| 2.2 病毒的增殖 |
| 2.3 DNA的提取 |
| 2.4 PCR扩增 |
| 2.5 原核表达载体的构建 |
| 2.6 Meq蛋白原核表达条件优化 |
| 2.7 免疫原的制备 |
| 2.8 免疫方法及免疫程序 |
| 2.9 细胞融合 |
| 2.10 酶联免疫吸附法(ELISA)筛选阳性杂交细胞 |
| 2.11 间接免疫荧光法(IFA)单克隆抗体检测 |
| 2.12 阳性杂交瘤细胞的亚克隆 |
| 3. 结果 |
| 3.1 PCR扩增MDV-Meq基因的结果 |
| 3.2 Pcold-TF-Meq的构建与鉴定 |
| 3.3 阳性杂交瘤细胞的筛选 |
| 3.4 间接免疫荧光法(IFA)单克隆抗体检测 |
| 3.5 亚类鉴定 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究内容二 家禽肿瘤的快速鉴别方法建立 |
| 1. 材料 |
| 1.1 病毒、实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器及耗材 |
| 2. 方法 |
| 2.1 人工感染实验 |
| 2.1.1 MDV的人工感染实验 |
| 2.1.2 ALV的人工感染实验 |
| 2.2 冰冻切片及石蜡切片的制备 |
| 2.2.1 冰冻切片的制备 |
| 2.2.2 石蜡切片的制备 |
| 2.3 冰冻切片免疫荧光(IFA)方法初步建立 |
| 2.4 石蜡切片免疫组化(IHC)方法初步建立 |
| 2.5 冰冻切片免疫荧光(IFA)初步应用 |
| 3. 结果 |
| 3.1 实验感染鸡病理组织学观察结果 |
| 3.2 MDV冰冻切片间接免疫荧光(IFA)检测 |
| 3.3 ALV冰冻切片间接免疫荧光(IFA)检测 |
| 3.4 石蜡切片免疫组化(IHC)检测 |
| 3.5 临床肿瘤检测分析 |
| 3.5.1 病理组织学观察 |
| 3.5.2 HE染色 |
| 3.5.3 间接免疫荧光快速检测 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
（6）鸡马立克氏病meq基因缺失疫苗（SC9-1株）的临床应用效果比较研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要试验材料 |
| 1.1.2 主要仪器设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 免疫途径 |
| 1.2.2 试验鸡群分组 |
| 1.2.3 安全性试验 |
| 1.2.4 效力对比试验 |
| 1.2.4. 1 分组及免疫 |
| 1.2.4. 2 临床观察 |
| 1.2.4. 3 攻毒保护对比试验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 安全性试验结果 (10倍剂量) |
| 2.2 安全性与效力对比试验结果 (使用剂量) |
| 2.2.1 安全性对比试验 |
| 2.2.2 攻毒保护对比试验 |
| 3 讨论 |
（7）鸡传染性贫血病毒感染对鸡马立克病疫苗免疫效力的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 马立克病的研究进展 |
| 1.1.1 病原学 |
| 1.1.2 流行病学 |
| 1.1.3 发病的机理与病理变化 |
| 1.1.3.1 早期增殖性阶段 |
| 1.1.3.2 病毒的潜伏感染阶段 |
| 1.1.3.3 第二次溶细胞感染期 |
| 1.1.3.4 转化和肿瘤形成 |
| 1.1.3.5 临床症状和病理变化 |
| 1.2 马立克病病毒分子生物学研究进展 |
| 1.2.1 与致肿瘤相关的马立克病病毒特有基因 |
| 1.2.2 马立克病病毒的基因及相关蛋白 |
| 1.2.2.1 即时早期基因 |
| 1.2.2.2 早期基因 |
| 1.2.2.3 晚期基因 |
| 1.3 诊断技术 |
| 1.3.1 常规诊断 |
| 1.3.2 病毒分离 |
| 1.3.3 聚合酶链式反应技术 |
| 1.4 马立克病的防制措施 |
| 1.4.1 免疫机理 |
| 1.4.2 疫苗研究进展 |
| 1.4.3 新型疫苗 |
| 1.5 鸡传染性贫血病毒的发病机理和流行病学 |
| 1.5.1 发病机理 |
| 1.5.2 流行病学 |
| 1.6 影响马立克病疫苗免疫效力的因素 |
| 1.7 本研究的目的及意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞和试验动物 |
| 2.1.2 疫苗与病毒 |
| 2.1.3 主要试剂和仪器 |
| 2.1.4 其他试剂的配制方法 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 鸡胚成纤维细胞的制备 |
| 2.2.2 马立克病毒的增殖与定量 |
| 2.2.3 鸡传染性贫血病毒的定量 |
| 2.2.3.1 DNA试剂盒提取 |
| 2.2.3.2 斑点分子杂交 |
| 2.2.4 试验分组 |
| 2.2.5 SPF鸡的死亡率及肿瘤发生率的影响 |
| 2.2.5.1 病理学检测 |
| 2.2.6 体重和免疫器官指数的测定 |
| 2.2.7 NDV和AIV灭活疫苗的免疫和抗体水平的测定 |
| 2.2.7.1 红细胞凝集试验与血凝抑制试验 |
| 2.2.7.2 红细胞凝集试验步骤 |
| 2.2.7.3 血凝抑制试验步骤 |
| 2.2.8 GX0101的增殖动态 |
| 2.2.8.1 外周血淋巴细胞DNA的提取 |
| 2.2.8.2 荧光定量PCR扩增 |
| 2.2.9 不同细胞因子转录水平的影响 |
| 2.2.9.1 外周血淋巴细胞RNA提取 |
| 2.2.9.2 cDNA的合成 |
| 2.2.10 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 病毒毒力的测定 |
| 3.1.1 GX0101毒株定量与检测 |
| 3.1.2 SD15毒株的定量 |
| 3.2 死亡率及肿瘤发生率 |
| 3.3 感染CIAV对SPF鸡生长性能的影响 |
| 3.4 对NDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用 |
| 3.5 对AIV-H9疫苗免疫后抗体反应的抑制作用 |
| 3.6 感染CIAV对SPF鸡中枢免疫器官的影响 |
| 3.7 GX0101在鸡体内的增殖结果 |
| 3.7.1 荧光定量PCR批内重复性 |
| 3.7.2 GX0101增殖动态 |
| 3.8 细胞因子的转录水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 致谢 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 |
（8）先天感染ALV-J对鸡马立克病疫苗免疫保护效果的影响及不同马立克病疫苗的分子鉴别（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 鸡马立克病(MD)的研究进展 |
| 1.1.1 MDV分类及病原学特点 |
| 1.1.2 MDV的基因组结构 |
| 1.1.3 MDV特有基因 |
| 1.1.4 MDV的发病机理 |
| 1.1.4.1 早期溶细胞感染 |
| 1.1.4.2 潜伏感染 |
| 1.1.4.3 第二次溶细胞感染 |
| 1.1.4.4 肿瘤细胞增生期 |
| 1.1.5 MDV的免疫抑制 |
| 1.1.6 流行病学 |
| 1.1.7 临床症状及病理变化 |
| 1.1.8 诊断技术 |
| 1.1.8.1 常规诊断 |
| 1.1.8.2 病毒分离与鉴定 |
| 1.1.8.3 聚合酶链反应技术(PCR) |
| 1.1.8.4 实时荧光定量PCR技术 |
| 1.1.9 MD疫苗的研究进展 |
| 1.1.9.1 疫苗的免疫机理 |
| 1.1.9.2 疫苗的种类 |
| 1.2 禽白血病(AL)的研究进展 |
| 1.2.1 病原学特点 |
| 1.2.2 流行病学特征 |
| 1.2.3 免疫抑制机制与致病性 |
| 1.3 MDV与ALV混合感染 |
| 1.4 本研究的目的和意义 |
| 1.4.1 先天感染ALV-J对马立克病疫苗免疫保护效果的影响 |
| 1.4.2 不同马立克病疫苗分子鉴别方法的建立 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 病毒 |
| 2.1.2 疫苗与质粒 |
| 2.1.3 主要试剂与仪器 |
| 2.1.4 其他试剂的配制 |
| 2.1.5 试验动物与SPF饲养设施 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 |
| 2.2.2 MDV的增殖与定量 |
| 2.2.3 ALV的增殖与定量 |
| 2.2.4 先天感染ALV-J对马立克病疫苗免疫保护效果的影响 |
| 2.2.4.1 试验设计 |
| 2.2.4.2 鸡的死亡率及肿瘤发生率 |
| 2.2.4.3 体重和免疫器官指数的测定 |
| 2.2.4.4 AIV-H9和NDV灭活疫苗的免疫和抗体水平的测定 |
| 2.2.4.5 外周血淋巴细胞DNA的提取 |
| 2.2.4.6 GX0101的增殖动态 |
| 2.2.4.7 病理学检测 |
| 2.2.4.8 统计学分析 |
| 2.2.5 不同马立克病疫苗分子鉴别方法的建立 |
| 2.2.5.1 PCR引物的设计与合成 |
| 2.2.5.2 疫苗DNA的提取 |
| 2.2.5.3 PCR扩增体系及条件优化 |
| 2.2.5.4 地高辛标记DNA探针的制备 |
| 2.2.5.5 核酸斑点杂交检测 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 先天感染ALV-J对马立克病疫苗免疫保护效果的影响 |
| 3.1.1 MDV毒株GX0101以及ALV-J毒株NX0101含量测定结果 |
| 3.1.2 SPF鸡的死亡率及肿瘤发生率 |
| 3.1.3 SPF鸡各组体重 |
| 3.1.4 SPF鸡AIV-H9疫苗免疫后抗体水平测定 |
| 3.1.5 SPF鸡NDV疫苗免疫后抗体水平测定 |
| 3.1.6 SPF鸡中枢免疫器官指数 |
| 3.1.7 SPF鸡GX0101病毒增殖动态 |
| 3.2 不同马立克病疫苗分子鉴别方法的建立 |
| 3.2.1 PCR方法对MDVmeq基因缺失疫苗SC9-1与商品化疫苗的鉴别结果 |
| 3.2.2 核酸斑点杂交方法对MDVmeq基因缺失疫苗SC9-1与商品化疫苗的鉴别结果. |
| 3.2.2.1 探针标记结果 |
| 3.2.2.2 核酸斑点杂交结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 先天感染ALV-J对马立克病疫苗免疫保护效果的影响 |
| 4.2 不同马立克病疫苗分子鉴别方法的建立 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 致谢 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 |
（9）表达REV env基因的重组马立克病毒的构建及生物学活性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 RE的研究进展 |
| 1.1.1 RE的流行病学调查 |
| 1.1.2 REV的分子生物学特性 |
| 1.1.3 RE的实验室诊断 |
| 1.1.4 RE的预防与治疗 |
| 1.2 MD的研究进展 |
| 1.2.1 马立克氏病的流行病学调查 |
| 1.2.2 MDV病毒的分子生物学特性 |
| 1.2.3 MD的实验室诊断 |
| 1.2.4 MD的预防与治疗 |
| 1.2.5 REV对马立克疫苗效果的影响 |
| 1.2.6 新型独立自主知识产权的马立克基因缺失疫苗 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 常规分子克隆试剂 |
| 2.1.2 SPF鸡 |
| 2.1.3 仪器设备 |
| 2.1.4 相关试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 env基因的扩增与纯化(基因扩增产物的回收与纯化) |
| 2.2.2 回收env基因PCR产物 |
| 2.2.3 PCR产物与真核表达载体的酶切与连接 |
| 2.2.4 提取重组质粒进行酶切鉴定 |
| 2.2.5 重组质粒转染CEF细胞 |
| 2.2.6 IFA鉴定 |
| 2.2.7 带有kana基因的pUC载体的构建 |
| 2.2.8 基因表达盒与表达载体连接 |
| 2.2.9 重组载体的回收(质粒DNA的回收) |
| 2.2.10 质粒转染 |
| 2.2.11 IFA鉴定 |
| 2.2.12 带有Meq两侧同源臂的env表达盒以及kana抗性基因的扩增与纯化 |
| 2.2.13 将REV env基因表达盒以及kana抗性基因插入MDV SC9-1基因组meq基因位点 |
| 2.2.14 插入meq位点重组病毒的拯救及生物学特性的研究 |
| 2.2.15 表达REV env、gp90蛋白的MDV meq位点重组病毒的构建、拯救及鉴定 |
| 2.2.16 带有不同启动子真核表达载体的构建 |
| 3 结果 |
| 3.1 表达REV env的重组MDV病毒的构建、拯救、鉴定及生物活性比较 |
| 3.1.1 env的扩增与回收 |
| 3.1.2 将env基因、gp90基因与真核表达载体连接及鉴定 |
| 3.1.3 扩增带有gp90基因的表达盒 |
| 3.1.4 重组MDV SC9-env在CEF细胞的复制水平 |
| 3.1.5 重组病毒SC9-env对SPF鸡的致病性 |
| 3.1.6 重组病毒SC9-env对SPF鸡感染vv MDV rMd5的免疫保护效果 |
| 3.2 表达REV env、gp90蛋白的MDV meq位点重组病毒的构建、拯救及鉴定结果 |
| 3.2.1 gp90基因的扩增与回收 |
| 3.2.2 将gp90基因与真核表达载体连接及鉴定 |
| 3.2.3 插入US10位点的重组病毒的拯救与鉴定 |
| 3.2.4 相对RT-PCR荧光定量方法比较不同插入位点重组病毒转录REV gp90RNA的水平 |
| 3.2.5 ELISA方法比较携带不同目的基因重组病毒表达蛋白的水平 |
| 3.3 不同启动子体外表达env蛋白的水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（10）安全性,免疫效力双重把控——鸡马立克氏病活疫苗（CVI988/Rispens株）（论文提纲范文）
| 我国二类新兽药CVI988/Rispens疫苗研发 |
| CVI988/Rispens疫苗的推广应用 |
| CVI988/Rispens疫苗保障 |
四、鸡马立克氏病CVI988/Rispens疫苗免疫效力试验（论文参考文献）
- [1]表达基因Ⅶ型新城疫病毒融合蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗株构建及其免疫效力试验[D]. 白雪雁. 扬州大学, 2019
- [2]鸡马立克病毒的研究进展[J]. 崔治中,苏帅,罗俊,钱琨,庄国庆,孙爱军,滕蔓. 微生物学通报, 2019(07)
- [3]表达H9亚型禽流感病毒血凝素的重组火鸡疱疹病毒构建及其安全性与免疫效力试验[D]. 楚电峰. 扬州大学, 2018(05)
- [4]表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组马立克氏病病毒活载体疫苗研究[D]. 李凯. 中国农业科学院, 2018(05)
- [5]鸡马立克氏病病毒Meq蛋白特异性单克隆抗体研制及其初步应用[D]. 陈洋宙. 扬州大学, 2018(01)
- [6]鸡马立克氏病meq基因缺失疫苗（SC9-1株）的临床应用效果比较研究[J]. 颜文光,屠颉,刘云迎,刘有昌,何叶峰,刘长清,周煜,崔治中,何海蓉. 中国家禽, 2018(08)
- [7]鸡传染性贫血病毒感染对鸡马立克病疫苗免疫效力的影响[D]. 张言坤. 山东农业大学, 2018(08)
- [8]先天感染ALV-J对鸡马立克病疫苗免疫保护效果的影响及不同马立克病疫苗的分子鉴别[D]. 韩妮. 山东农业大学, 2018(09)
- [9]表达REV env基因的重组马立克病毒的构建及生物学活性研究[D]. 周忠文. 山东农业大学, 2018(08)
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